Спосіб діагностики хронічного гастриту типу а /аутоімунного гастриту/

Номер патенту: 51170

Опубліковано: 15.11.2002

Автори: Гайдар Юрій Адольфович, Степанова Олена Василівна

Завантажити PDF файл.

Формула / Реферат

Спосіб діагностики хронічного гастриту типу А, що включає використання кріостатних зрізів слизової оболонки фундального відділу шлунка людини або білого лабораторного щура, як джерела антигенів, для виявлення специфічних для даного захворювання антитіл проти парієтальних клітин шлунка з допомогою непрямої реакції імунофлуоресценції,  який відрізняється тим, що слайд-препарати готовлять з тканини шлунка, попередньо фіксованої в 4 % розчині параформальдегіду і постфіксованої в рідкому азоті, обробляють сироваткою крові пацієнта в розведенні не менше 1 : 20 і при імунофлуоресценції мембран секреторних канальців парієтальних клітин шлунка діагностують хронічний гастрит типу А (аутоімунний гастрит).

Текст

Спосіб діагностики хронічного гастриту типу А, що включає використання крюстатних зрізів слизової оболонки фундального відділу шлунка людини або білого лабораторного щура, як джерела антигенів, для виявлення специфічних для даного захворювання антитіл проти парієтальних клітин шлунка з допомогою непрямої реакції імунофлуоресценцм, який відрізняється тим, що слайд-препарати готовлять з тканини шлунка, попередньо фіксованої в 4 % розчині параформальдегіду і постфіксованої в рідкому азоті, обробляють сироваткою крові пацієнта в розведенні не менше 1 20 і при імунофлуоресценцм мембран секреторних канальців парієтальних клітин шлунка діагностують хронічний гастрит типу А (аутоїмунний гастрит) Винахід відноситься до області медицини, а саме, до способів діагностики аутоімуниих захворювань і може бути використаний для виявлення хронічного гастриту типу А (аутоімунного гастриту) і макроцитарної гіперхромної (нерницюзної) анемії Хронічний гастрит являється широко поширеним захворюванням, поражаючим практично половину працездатного населення розвинутих держав Однією З форм хронічного гастриту являється хронічний гастрит типу А - аутоімунне захворювання, обусловлене сімейними генетичними факторами Питома вага аутоімунного гастриту в популяції складає 1%, серед хворих гастроентерологічного профілю - 9%, в структурі хронічних гастритів - 6% Сполучні форми хронічного аутоімуиного гастриту з бактеріальним складають 12% випадків У хворих з перницюзною анемією аугоімунний гастрит діагностують у 16% випадків [1] постійна присутність в сироватці крові хворих органоспецифічних аутоантитіл проти парієтальних клітин слизової оболонки шлунка, виборне ураження фундального відділу шлунка, прогресуюче послаблення кислотопродукуючої функції шлунка аж до розвитку ахілії та снижения виробки паріетальнимн клітинами внутрішнього фактору (фактору Кастла) [1, 2, 3] При морфологічному дослідженні в слизовій оболонці фундального відділу шлунка, на предатрофічній стадії розвитку патологічного процесу, спостерігається помірна або виражена дифузна лімфоцитарна інфільтрація власної пластинки з утворенням лімфоідноклітинних скупчень між залозами і появою осередків диструкцм окремих залоз лімфоцитами В клітинному інфільтраті відзначається підвищений вміст В-лімфоцитів, Тхелперів і IgG плазматичних клітин, що свідчить про участь в ушкодженні залозного аппарату шлунка місцевих гуморальних імунних механізмів При імунопстохімічному дослідженні в сироватці крові хворих виявляються аутоантитіла що вибірково зв'язуються з мембранами секреторних канальців парієтальних клітин, де локалізуються головні антигени, ІНІЦІЮЮЧІ виробіток аутоантитіл при класичному аутоімунному гастриті В подальшому у слизовій оболонці фундального відділу шлунка розвивається виражена атрофія залозного аппарату з прогресуючою втратою спеціалізованих епітелюцитів і заміщенням їх клітинами пілоричного та кишкового типу, що приводить до розвитку У 31% хворих аутоімунний гастрит протікає як самостійне захворювання, в решта - сполучається з другою патологією органів травлення виразковою хворобою шлунка та дванадцятипалої кишки (18%), раком шлунка (3%), хронічним гепатитом (6%), цирозом печінки (13%), хронічним калькульозним холециститом (6%) хронічним панкреатитом (20%), целіакією-спру (3%), які часто маскують прояви хронічного гастриту аутоімунної природи [2] Характерними особливостями аутоімунного гастриту являються тривали й скритий перебіг, ю 51170 ахлорпдрм і перницюзної анемії [3] Рання діагностика аутоімунного гастриту і своєчасне призначення імунокорегуючої терапії дозволяє попередити розвиток перницюзної анемії Однак аутоімунний гастрит не завжди розпізнається КЛІНІЧНО і часто маскується сполучною патологією органів травлення Тому для раннього виявлення аутоімунного гастриту необхідно більш широке впровадження в гастроентерологічну практику методів виявлення головної ознаки захворювання - наявності в сироватці крові аутоантитіл проти паріетальних клітин Розробка і удосконалення таких методів являється актуальним завданням медичної науки Відомий спосіб діагностики аутоімунного гастриту, оснований на застосуванні непрямої реакції імунофлуоресценцм, для постановки якої в якості джерела антигена використовують нефіксовані крюстатні зрізи слизової оболонки фундального відділу шлунка людини, а для контролю - нефіксовані крюстатні зрізи нирки лабораторних тварин Зрізи, прикріпляють до предметного скла і обробляють сироваткою крові досліджуваного хворого, а потім - антитілами проти імуноглобулінів крові людини, міченими флуорохромом При яскравій імунофлуоресценцм цитоплазми паріетальних клітин шлунка і відсутності імунофлуоресценцм цитоплазми епітеліальних клітин прямих канальців нирки діагностують аутоімунний гастрит [4] Даний метод принято за прототип Недоліком методу-прототипа являється те, що імунофлуоресценція цитоплазми паріетальних клітин можлива і при других аутоімунних захворюваннях, наприклад, при первинному біліарному цирозі печінки, при якому в крові хворого циркулюють ашимітохондріальні аутоантитіла, що дають при постановці непрямої реакції імунофлуоресценцм інтенсивне дифузне свічення всій цитоплазми паріетальних клітин На такому фоні неможливо виділити продукт імунопстолопчної реакції, розміщені на мембранах внутрішньоклітинна секреторних канальців паріетальних клітин, що ускладнює діагностику аугоімунного гастриту при наявності вказаної сполучної патології В основу винаходу поставлено завдання разробити спосіб, що дозволяє виключити можливість помилково позитивної реакції, підвищити специфічність результатів імунопстохімічних досліджень і, тим самим, підвищити точність і надійність діагностики Поставлене завдання вирішується шляхом використання в виді джерела антигена крюстатних зрізів слизової оболонки фундального відділу шлунка, попередньо фіксованої в 4%-ому розчині параформальдегіду з короткочасною постфіксацією в рідкому азоті Використання м'якої фіксації тканини шлунка, передуючий приготуванню кріостати їх зрізів і постановці імунопстохімічних реакцій, дозволяє ліквідувати причину дифузної імунофлуоресценцм цитоплазми паріетальних клітин, характерної не тільки для аутоімунного гастриту, зберігає при цьому антигенні властивості мембран внутрішньоклітинних секреторних канальців, складаючих основні мішені аутоімунної агресії, специфічної для аутоімунного гастриту (внутрішній фактор, Н+/К+АТФ-аза) Досягнутий ефект дозволяє чітко відзначити локалізацію продуктів позитивної імунопстохімічної реакції на мембранах секреторних канальців паріетальних клітин, що виключає можливість діагностичних помилок і дає можливість необов'язково проводити контрольну реакцію на зрізах нирки лабораторних тварин При співставленому аналізі відомого способу (прототипу) і пропонованого способу діагностики аутоімунного гастриту виявлені загальні ознаки - як джерела антигенів використовують крюстатні зрізи слизової оболонки фундального відділу шлунка людини, - для виявлення антитіл проти паріетальних клітин використовують непряму реакцію імунофлуоресценцм ВІДМІННІ ознаки заявленого способу діагностики від способу-прототипу - як джерела антигенів використовують кріостат зрізи негативної слизової оболонки фундального відділу шлунка, а тканини шлунка попередньо фіксованої в параформальдегіді і постфіксованої в рідкому азоті, - контрольні реакції на крюстатних зрізах нирки лабораторних тварин не ставляться Відзначена сукупність відомих і ВІДМІТНИХ ознак, які характеризуют заявлений спосіб, в ВІДОМІЙ техніці не виявлена Суть способу не випливає з відомою рівня техніки Таким чином, заявлений спосіб відповідає критеріям патентоздатності, новизни і винахідницького рівня Спосіб промислове здійснимий і може бути використаний в практичній охороні здоров'я Заявлений спосіб діагностики здійснюється таким чином 1 Кусочки слизової оболонки фундального відділу шлунка людини або білого лабораторного щура розміром 0,5x0,5мм фіксують в 4% розчині параформальдегіду, при кімнатній температурі, на протязі 4-х годин 2 Після фіксації тканинні блоки відмивають в трьох порціях забуференого фізіологічного розчину (ЗФР), рН=7,4, на протязі 15 хвилин і занурюють в рідкий азот на 5 хвилин 3 Із фіксованої тканини слизової оболонки фундального відділу шлунка готують крюстатні зрізи товщиною 5 - 8мкм зрізи поміщають на обезжирене предметне скло 4 На зрізи наносять сироватку крові досліджуваного хворого, розбавлену в 20 раз ЗФР Інкубацію зрізів з сироваткою крові проводять у вологій камері, при кімнатній температурі, на протязі однієї години 5 Після споліскування в дистильованій воді зрізи відмивають в трьох порціях ЗФР на протязі 15 хвилин 6 Надлишки ЗФР видаляють і на зрізи наносять антитіла проти імуноглобулінів крові людини, мічені флуорохромом Інкубацію зрізів з міченими антитілами проводять у вологій камері, при кімнатній температурі, на протязі однієї години 7 Після інкубації зрізи відмивають в трьох порціях ЗФР на протязі 15 хвилин 8 Па зрізи наносять 50мкл забуференого гліцерину (1 частина гліцерину і 3 частини ЗФР) і вивчають за допомогою люмінесцентного мікроскопу При імунофлуоресценцм секреторних канальній паріетальних клітин шлунка діагностують аутоіму 51170 нний хронічний гастрит (хронічний гастрит типу А) Для проведення контрольної реакції використовують сироватку крові донорів, яка не містить циркулюючих антитіл Заявлений спосіб діагностики ілюструється прикладами Приклад 1 Хвора Щ , 40 років Поступила в клініку інституту гастроентерології 2 11 1992р (історія хвороби №2967) Діагноз при поступленні Хронічний гастрит з секреторною недостатністю Хронічний холецистит Хронічний панкреатит Дисбактеріоз кишечника Хворіє майже 10 років Скарги на болі в епігастрм, тяжкість після їжі, сухість в роті, печію, відрижку повітрям, незносність молока, нестійке випорожнення Дані езофагогастродуоденоскопм хронічний гастрит з атрофією слизової оболонки фундального відділу шлунка Аналіз шлункового соку ахлорпдрія ІмунопстохіМІЧНІ дослідження, проведені ВІДПОВІДНО пропонованою способу діагностики, виявили в сироватці крові хворої аутоантитіла до секреторних канальців паріетальних клітин шлунка в титрі, що перевищує розведення 1 20 Заключний КЛІНІЧНИЙ діагноз Хронічний гастрит типу А, з секреторною недостатністю Хронічний холецистит Хронічний панкреатит Дисбактеріоз кишечника в сироватці крові аутоантитіла до секреторних канальців паріетальних клітин шлунка в розведенні 1 20 і більше Заключний КЛІНІЧНИЙ діагноз Хронічний гастрит типу А, з секреторною недостатністю Хронічний холецистит з ГІПОТОНІЄЮ жовчного міхура Хронічний панкреатит Імунопстохімічні дослідження по заявленому способу діагностики аутоімунного гастриту виконані в лабораторії патоморфологм Інституту гастроентерологи АМН України і в центрі імунопстохімічної діагностики при дослідженні зразків сироваток крові 756 хворих гастроентерологічного профілю Аутоімунний гастрит виявлено у 5,2% обстежених осіб, серед яких переважали жінки (31 жінка, 8 ЧОЛОВІКІВ) ВІК хворих варіював від 24 до 72 років В 29% випадків аутоімунний гастрит протікав як самостійне захворювання, в решта - сполучався з другою патологією органів травлення, виразковою хворобою шлунка і дванадцятипалої кишки (20%), хронічним панкреатитом (14%), хронічним калькульозним холециститом (10%), цирозом печінки (14%), хронічним гепатитом (4%), целіакієюспру (3%), хворобою Крона (2%), неспецифічним виразковим колітом (2%), раком шлунка (2%) КЛІНІЧНО даний тип гастриту не діагностувався Приклад 2 Хвора Г , 48 років Поступила в клініку Інституту гастроентерології 20 03 1997р Діагноз при поступленні Хронічний активний гепатит Хронічний холецистит з ГІПОТОНІЄЮ жовчною міхура Хронічний панкреатит Хронічний гастрит Хворіє на протязі одного року Скарги на загальне недомогания, свербіж шкіри Аналіз крові ЩФ 3,32ммоль/л, АЛТ - 2,0ммоль/л При езофагогастродуоденоскопм виявлені ознаки хронічного гастриту При Імунопстохімічному дослідженні сироватки крові, проведеному на свіжеприготованих крюстатних зрізах нефіксованої тканини стінки шлунка і нирки білого лабораторного щура, виявлено дифузне імунозабарвлення цитоплазми паріетальних клітин слизової оболонки шлунка і дифузне імунозабарвлення цитоплазми епітеліальних клітин прямих канальців нефронів нирки При імунопстохімічному дослідженні сироватки крові, виконаному, ВІДПОВІДНО пропонованою способу, на фіксованій тканині стінки шлунка, антитіла до секреторних канальців паріетальних клітин не виявлені, що дозволило виключити аутоімунний гастрит Заключний КЛІНІЧНИЙ діагноз Хронічний холестатичний гепатит Хронічний холецистит з ГІПОТОНІЄЮ жовчного міхура Хронічний панкреатит Хронічний гастрит При ендоскопічному вивченні стану слизової оболонки шлунка у 42,4% обстежених хворих був установлений хронічний гастрит без ознаків атрофії слизової оболонки, у 26,5% - діагностовано хронічний гастрит з атрофію слизової оболонки, у 18% виявлено поліпоз шлунка, у 12,9% пацієнтів патологічних змін в шлунку не виявлено Таким чином, ендоскопічна картина хронічного гастриту мала місце у більшої половини хворих (68,9%) і нерідко (26,5%) супроводжувалась атрофією слизової оболонки При вивченні секреторної функції шлунка виявлялася як збережена секреція, так і секреторна недостатність і ахлорпдрія Причому стан кислотопродукуючої функції не завжди корелірував з особливостями гістологічної будови слизової оболонки шлункаПри збереженні кислотопродукцм спостерігалось як незмінена або малозмінена пстоструктура слизової оболонки, так і атрофія і пілоризація головних залоз шлунка Ахлорпдрія практично завжди розвивалась на фоні атрофії або повної пілоризацм залозного апарату В одному випадку в умовах вираженого зниження кислотопродукцм при гістологічному дослідженні спостерігалась незмінна слизова ополонка фундального відділу шлунка, що дозволяє препустити виражену інгібіруючу дію аутоаінтитіл на механізми секреторного процесу в паріетальних клітинах приклад 3 Хворий К , 57 років Поступив в клініку інституту гастроентерології 19 02 1997р (історія хвороби №361) Діагноз при поступленні Хронічний гепатит Хронічний холецистит з ГІПОТОНІЄЮ жовчною міхура Хронічний панкреатит Скарги на загальне недомагання, болі в епігастрм, нестійке випорожнення Хворіє 2 роки Аналіз крові ЩФ 0,6ммоль/л, АЛТ - 0,18ммоль/л При езофагогастродуоденоскопм виявлені ознаки хронічною гастриту з вогнищевою атрофією слизової оболонки Аналіз шлункового соку ахлорпдрія УЗД Хронічний панкреатит Хронічний холецистит Імунопстохімічне дослідження, проведене ВІДПОВІДНО пропонованого способу діагностики, дозволило виявити При вивченні ультраструктури паріетальних клітин, незалежно від особливостей гістологічної будови слизової оболонки фундального відділу шлунка, визначався недорозвиток тубуловезикулярного апарату, що забезпечує секреторний потенціал клітин Ультраструктурна патологія в паріетальних клітинах виявлялась рідко і проявлялась збільшенням КІЛЬКОСТІ повторних лізосом, нагромадження в цитоплазмі МІЄЛІНОВИХ фігур і екзоцитозом їх в МІЖКЛІТИННІ простори залозного епітелію Описані зміни можна поясниш прямою дією аутоантитіл на рецепторний апарат паріетальних 8 51170 КЛІТИН В 97% випадків при аутоімунному гастриті спостерігалось обсімення слизової оболонки фундального відділу шлунка Hehcobacter pylori, формування адгезивних контактів мікроорганізмів з апікальними поверхнями клітин покривноямочного епітелію і активізація хронічного запалення в слизовій оболонці Таким чином, хронічний гастрит аутоімунної природи часто сполучається з хелікобактерною інфекцією, нерідко маскується другою патологією органів травлення і практично не розпізнається КЛІНІЧНО Це діктує необхідність розширювати показання до проведення досліджень сироватки крові хворих гастроентерологічного профілю для виявлення циркулюючих аутоантитіл проти партетальних клітин з метою раннього виявлення і своєчасною лікування аутоімунного гастриту, що попереджає розвиток перницюзної анемії Заявлений спосіб підвищує чутливість і специфічність результатів імунопстохімічних досліджень, забезпечує високу точність діагностики даного захворювання і нє потребує придбання дефіцитних реактивів і коштовною обладнання Бібліографія 1 Аруни Л И , Григорьев П Я , Исаков В А , Яковенко Э П Хронический гастрит -Амстердам, 1993-362с 2 Гайдар Ю А , Степанова Е В , Мосинчук Л Н , Аксенов И Г Кпинико-морфологические особенности аутоимунного гастрита //Другий Український тиждень гастроентерологів Тези доповідей Дніпропетровськ, 1997-С34 3 Аруин Л И , Капуллер Л Л , Исаков В А Морфологическая диагностика болезней желудка и кишечника - М Триада-Х, 1998 -484с 4 Пат 23700А Укр МПК А61 В10/00 Спосіб діагностики аутоімунного гастриту / Ю А Гайдар, ГА Шейхетова - Заявлено 28 12 93, Опубл 31 08 98, Бюл №4 ДП «Український інститут промислової власності» (Укрпатент) вул Сім'ї Хохлових, 15, м Київ, 04119, Україна ( 0 4 4 ) 4 5 6 - 2 0 - 90 ТОВ "Міжнародний науковий комітет" вул Артема, 77, м Київ, 04050, Україна (044)216-32-71

Дивитися

Додаткова інформація

Назва патенту англійською

Method for diagnostics of chronic gastritis of "a" type (autoimmune gastritis)

Автори англійською

Haidar Yurii Adolfovych

Назва патенту російською

Способ диагностики хронического гастрита типа "а" (аутоиммунного гастрита)

Автори російською

Гайдар Юрий Адольфович

МПК / Мітки

МПК: G01N 1/42, G01N 33/533, G01N 21/64

Мітки: діагностики, спосіб, типу, гастриту, аутоімунного, хронічного

Код посилання

<a href="https://ua.patents.su/4-51170-sposib-diagnostiki-khronichnogo-gastritu-tipu-a-autoimunnogo-gastritu.html" target="_blank" rel="follow" title="База патентів України">Спосіб діагностики хронічного гастриту типу а /аутоімунного гастриту/</a>

Подібні патенти