Спосіб діагностики аутоімунного гастриту

Изобретение относится к медицине, а именно к способам диагностики заболеваний человека. Может быть использовано для диагностики заболеваний желудка, в частности аутоиммунного гастрита (хронического гастрита типа А). Хронический гастрит - широко распространенное и недостаточно изученное заболевание, протекающее длительно с периодами обострений и ремиссии. Установлено, что примерно 50% трудоспособного населения развитых стран страдает хроническим гастритом. Одной из форм хронического гастрита является аутоиммунный гастрит или хронический аутоиммунный гастрит типа А, для которого характерно длительное течение, поражение преимущественно фундального отдела желудка, гипоацидность с высоким уровнем гастринемии, наличие антител к париетальным клеткам [Григорьев П. Я., Яковенко Э. П. Диагностика и лечение хронических болезней органов пищеварения. - М.: Медицина, 1990. - С. 18]. Диагностика хронического гастрита сложна, она базируется на результатах всестороннего обследования с использованием общеклинических и специальных методов исследования (рентгенологический, эндоскопический, морфологический и др.). Для диагностики аутоиммунного гастрита известен способ, включающий выявление в крови аутоантител к цитоплазме париетальных клеток желудка с использованием в качестве антигена растворимого препарата микросом [Mariotti S. et al. Clin, and Exp. Immunol. 1984. - Vol. № 3, 745-753]. Этот способ сложен и редко используется в клинической практике. Используемые реагенты малодоступны и их трудно приготовить. Известен способ диагностики аутоиммунного гастрита, основанный на непрямой иммунофлуоресцентной реакции, при котором е качестве источника антигена используют срезы слизистой оболочки желудка человека или животных, фиксированных на предметном стекле. При этом на антиген. наносят сыворотку крови исследуемого больного, а затем меченные флуорохромом антитела к иммуноглобулинам крови человека и проводят оценку наличия и степени выраженности иммунофлуоресценции. При наличии иммунофлуоресценции цитоплазмы париетальных клеток слизистой желудка диагностируют аутоиммунный гастрит [С. Le Petit, С. Barthelemy, S. Boucheron et al. - Nouv. Presse Med. - 1981, 10. - P. 1799-1802]. Этот способ принят за прототип. Недостатком этого способа является то, что иммунофлуоресценция париетальных клеток слизистой желудка может наблюдаться при других заболеваниях, например, при первичном билиарном циррозе печени, который на начальных этапах имеет скудную клиническую симптоматику, наблюдающиеся боли и диспептические явления имеют место как при гастрите, так и гепатите. В основу изобретения поставлена задача разработать такой способ диагностики аутоиммунного гастрита, при котором обеспечивалась бы большая специфичность результатов исследования этого заболевания и за счет этого повысить точность и надежность диагностики. Поставленная задача решается путем использования в качестве источника антигенов наряду со срезом слизистой оболочки фундального отдела желудка человека дополнительно и среза почки, например, животного, и выявление иммунофлуоресценции париетальных клеток слизистой желудка и клеток канальцев почки при помощи люминесцетного микроскопа. При наличии иммунофлуоресценции клеток слизистой желудка и отсутствии ее в клетках канальцев почки диагностируют хронический аутоиммунный гастрит (хронический гастрит типа А). Дополнительное использование среза почки объясняется тем, что мембраны митохондрий почки являются источником антигена, позволяющего с помощью непрямой реакции иммунофлуоресценции выявить циркулирующие в крови аутоантитела к мембранам митохондрий, которые наблюдаются у подавляющего большинства больных с первичным билиарным циррозом печени [Механизмы иммунопатологии/Под ред. С. Коена с соавт. - М.: Медицина, 1983. - С. 184]. Сопоставительный анализ признаков известного способа (прототипа) и заявляемого способа позволяет выявить, что заявленный способ имеет отличительные признаки, к числу которых относится использование в качестве источника дополнительного антигена среза почки, например, животного. Отличительный признак позволяет повысить специфичность результатов исследования, за счет чего повышается точность и надежность диагностики аутоиммунного гастрита. Способ осуществляется следующим образом. На предметное гистологическое стекло известным приемом наносят криостатные срезы слизистой оболочки фундального отдела желудка человека толщиной 5-7 мкм. На расстоянии 2-3мм от него наносят криосрез почки, например, животного. На приготовленный препарат (срезы слизистой желудка и почек) наносят сыворотку крови исследуемого больного, разбавленную в 10 раз забуференным физиологическим раствором с pH = 7,4 (ЗФР), инкубируют при комнатной температуре во влажной камере 30-60 мин, проводят отмывку трехкратно в течение 15 мин ЗФР, наносят антитела к иммуноглобулинам крови человека меченные флуорохромом, повторно инкубируют во влажной камере в течение 30-60 мин и проводят трехкратно отмывку ЗФР, после чего с помощью люминесцентного микроскопа оценивают результаты исследования. В случае иммунофлуоресценции цитоплазмы париетальных клеток слизистой оболочки фундального отдела желудка и отсутствии ее в цитоплазме клеток проксимальных канальцев почки диагностируют хронический аутоиммунный гастрит (хронический аутоиммунный гастрит типа А). Заявляемый способ иллюстрируется примерами. Пример 1. Больная Г. находилась в клинике заболеваний желудка НИИ гастроэнтерологии в ноябре 1992 года (история болезни Ns 2967). Клинический диагноз: хронический гастрит с секреторной недостаточностью. Больной себя считает около 10 лет, заболевание протекает с частыми обострениями, лечение малоэффективно. В лаборатории патоморфологии института выполнено исследование по заявляемому способу: на закрепленные на предметном стекле криостатные срезы слизистой оболочки фундального отдела желудка человека и почки крысы наносили разбавленную в 10 раз ЗФР сыворотку крови больной, инкубировали в течение часа во влажной камере при комнатной температуре, затем срезы промывали ЗФР, трехкратно по 5 мин, на срезы наносили раствор протеина А меченного ФИТЦом в концентрации 50-100 мкг/мл, повторно инкубировали в течение часа во влажной камере при комнатной температуре, срезы промывали вновь ЗФР, три раза по 5 мин. После промывки на срезы наносили раствор глицерина и покрывали их тонким стеклом, препарат исследовали под люминесцентным микроскопом ЛЮМАМ И2. В процессе исследования выявлена выраженная иммунофлуоресценция цитоплазмы париетальных клеток слизистой тела желудка и отсутствие флуоресценции эпителия проксимальных канальцев нефронов почки. На основании выполненного исследования с учетом клиники у больной диагностирован аутоиммунный гастрит (хронический аутоиммунный гастрит типа А). Внесены коррективы в лечение, после чего состояние больной заметно улучшилось. Выписана в удовлетворительном состоянии. Пример 2. Больной Р., 45 лет, находился в клинике хирургии органов пищеварения НИИ гастроэнтерологии в апреле 1992 года (история болезни №993). Клинический диагноз: язвенная болезнь желудка, хронический гастрит. При изучении гистологического строения слизистой оболочки желудка в лаборатории патоморфологии института выявлен хронический атрофический гастрит с явлениями крупноочаговой кишечной метаплазии и пролиферацией лимфатических фолликулов. Стадия обострения. Глубокое заселение поверхности желудка Helicobacter pylori (препарат 63/93). В той же лаборатории выполнено исследование по заявляемому способу, как описано в примере 1. При исследовании препарата под люминесцентным микроскопом иммунофлуоресценции не выявлено ни в цитоплазме париетальных клеток, ни в канальцах нефронов почки. Следовательно у больного наряду с язвенной болезнью желудка имеется хронический антральный гастрит, инфицирование Helicobacter pylori. В лечение внесены коррективы, после чего наступило значительное улучшение. Выписан в удовлетворительном состоянии. Пример 3. Больной Б. находился на обследовании и лечении в отделении заболеваний печени и поджелудочной железы НИИ гастроэнтерологии с 25.01. по 24.02. 1992 года (история болезни №211). Клинический диагноз: билиарный цирроз печени, активная фаза. В лаборатории патоморфологии института выполнено исследование по заявляемому способу, как описано в примере 1. При исследовании препарата под люминесцентным микроскопом выявлена иммунофлуоресценция цитоплазмы париетальных клеток желудка и эпителиоцитов проксимальных канальцев нефронов почки. Результаты исследования свидетельствуют о наличии у больного первичного билиарного цирроза печени. При использовании в качестве антигена одного среза слизистой оболочки желудка и наличии флуоресценции цитоплазмы париетальных клеток, можно было считать наличие у больного аутоиммунного гастрита. Поставленное наблюдение свидетельствует о том, что наличие в качестве антигенов среза слизистой оболочки желудка и среза почки позволяет в определенных случаях выявлять с помощью иммунофлуоресценции другие заболевания, в частности билиарный цирроз печени, что важно для распознавания начальных проявлений цирроза печени. Заявляемый способ диагностики аутоиммунного гастрита использован в лаборатории патоморфологии НИИ гастроэнтерологии при обследовании 121 больного с заболеваниями органов пищеварения. Аутоиммунный гастрит выявлен у 5 больных (4,1%), билиарный цирроз печени у 1 больного. На основании результатов исследования можно заключить, что заявляемый способ, включающий известные и отличительные признаки, повышает специфичность результатов исследования, точность и надежность диагностики аутоиммунного гастрита типа А. Способ может быть использован как в условиях стационара, так и в условиях клиники. Его применение не сопряжено с приобретением дефицитных средств и оборудования.