5-(4-діетиламінофенілметиліден)-4-(2-метил-4-гідроксі-5-ізопропілфеніламіно)-5н-тіазол-2-он, що має протипухлинну активність

5-(4-Діетиламінофенілметиліден)-4-(2-метил4-гідроксі-5-ізопропілфеніламіно)-5H-тіазол-2-он формули 2 3 54068 зазначеного лікарського засобу характерні транзиторне підвищення рівня сечовини в сиворотці крові, свербіння шкіри, транзиторні та зворотні неврологічні порушення (парестезія, адгезія, порушення свідомості). Відома також сполука формули: O N N N O CH3 N N NH2 Цей лікарський засіб відомий під назвою темозоломід (3,4-дигїдро-3-метил-4-оксоімідазо[5,1-α]тетразин-8-карбоксамід). Темозоломід – імідазотетразиновий алкілюючий засіб з протипухлинною активністю [Справки и инструкции. Компендиум OnLine. http://www.compendium.com.ua/info/166818]. При потраплянні в системну циркуляцію (при фізіологічних значеннях pH) темозоломід зазнає швидкого хімічного перетворення з утворенням активної сполуки монометилтриазепоімідазолкарбоксаміду (МТІК). Вважають, що цитотоксичність МТІК, в основному, зумовлена алкілюванням гуаніну в положенні Об та додатковим алкілюванням в положенні N7. Цитотоксичне пошкодження, яке розвивається потім, швидше за все, запускає механізм аберантного відновлення метального залишку. Однак і цей лікарський засіб має ряд недоліків. Так, при його застосуванні можуть розвиватись тромбоцитопенія, нейтропенія, нудота, блювота, втомлюваність, закрепи, головний біль, анорексія, діарея, висипи, лихоманка та сонливість. В основу корисної моделі поставлене завдання створення ефективного протипухлинного засобу з меншими побічними явищами та прийнятним токсикологічним профілем. Поставлене завдання вирішується тим, що синтезований 5-(4-діетиламінофенілметиліден)-4-(2метил-4-гідрокси-5-ізопропілфеніламіно)-5Hтіазол-2-он формули CH3 H3 C H N N OH H3C S N CH3 H3 C O володіє протипухлинною активністю. Синтезована сполука є оранжевим кристалічним порошком, розчинним в ДМФА, при нагріванні - в оцтовій кислоті, малорозчинним в спиртах і нерозчинним в етері та воді. Для доказу складу і структури синтезованої сполуки були використані відомі фізико-хімічні методи, зокрема спектроскопія ПМР та елементний аналіз. Одержані результати свідчать про відповідність синтезованої сполуки заявленій. Заявлений 5-(4-діетиламиюфенілметиліден)-4(2-метил-4-гідрокси-5-ізопропілфеніламіно)-5Я 4 тіазол-2-он одержують з високими виходами при використанні відомих синтетичних підходів у декілька стадій, що включають реакцію 4-тіоксо-2тіазолідинону і гідрохлориду 4-аміио-2-ізопропіл-5метилфенолу, та взаємодію синтезованого 4-(2метил-4-пдрокси-5-ізогфопілфеніламіно)-5Hтіазол-2-ону за СН-кислотним центром з діетиламінобензальдегідом в умовах реакції Кньовенагеля. Фармакологічний ефект 5-(4діетиламінофенілметиліден)-4-(2-метил-4-гідроксі5-ізопропілфеніламіно)-5H-тіазол-2-ону вивчався за стандартною процедурою оцінки протипухлинної активності новосинтезованих сполук [Feasibility of Drug Screening with Panels of Human Tumor Cell Lines Using a Microculture Tetrazolium Assay / M.C. Alley. D.A. Scudiero. P.A. Monks [et al.] // Cancer Research. - 1988. - Vol.48. - P. 589-601; Boyd M.R., Paull K.D. // Drug Development Research. - 1995 Vol.34. - P.91-109; Grever M.R.. Schepartz S.A.. Chabner B.A. // Seminars in Oncology - 1992. Vol.19 - №6. - P.622-638; A. Monks. D. Scudiero. P. Skehan. [et ak] // J. Nat. Cancer, lust. - 1991. - 83. P.757-766] в Національному інституті раку (National Cancer Institute of National Institute of Health. USA) в рамках Development Therapeutic Program згідно з договором між вказаною установою та Львівським національним медичним університетом імені Данила Галицького. На першому етапі проведено скринінг протипухлинної активності на 60 лініях ракових клітин, що охоплюють практично весь спектр онкологічних захворювань людини (лінії раку легень, молочної залози, яєчників, товстого кипіківника, нирок, простати і ЦНС, а також лінії лейкемії та меланоми), при дії речовини в концентрації 10-5моль/л і визначенні відсотку росту клітин (GI) у порівнянні з контролем. Дослідження проведено методом флуоресцентного зафарбовування (барвник - сульфородамін Б, еталони - 5фторурацил та адріаміцин). За результатами проведеного скриніпгу встановлено, що па фоні сполуки, яка заявляється середнє значення відсотку росту клітин відносно контролю становило 75.33% при селективності дії на окремі лінії раку легень (HOP-92: GI=-15,52%), молочної залози (HS 578T: GI=-10,20%) та раку ЦІ 1С (SF-295: Gl=5,64%). За результатами І етапу дослідження проведено ґрунтовний протипухлинний in vitro скринінг 5-(4-діетиламіпофенілметилідеи)-4-(2-метил-4пдрокси-5-ізопропілфеніламіно)-5H-тіазол-2-ону в п'яти концентраціях при 10-кратному розведенні (100 M, 10 M, 1 M,0,1 M, та 0б01 М) на 57-ти лініях ракових клітин, набір яких аналогічний до попекреднього експерименту. Одержано 3 дозозалежпі параметри: 1) Gl50 - концентрація сполуки, яка викликає пригнічення росту 50% клітин лінії: 2) TGI - концентрація, що створює повне пригнічення росту клітин; 3) Gl50 - концентрація, яка викликає загибель 50% пухлинних клітин. Gl50 інтерпретують як ефективний рівень інгібування. TGI - як цитостатичний ефект, a Gl50 є легальною концентрацією, що характеризує цитотоксичну дію. Якщо 5 54068 логарифмічні значення досліджуваних параметрів IgGI 50 ,IgTGI та IgLC 50 ) є меншими, ніж -4,00. сполуки розглядаються як активні. 6 В умовах наведеного вище експерименту сполука, що заявляється, виявила високу протипухлинну активність (результати наведені в таблиці). Таблиця Протипухлинна активність in vitro 5-(4-діетиламінофенілметиліден)-4-(2-метил-4-гідрокси-5ізопропілфеніламіно)-5H-тіазол-2-ону Лінії ракових клітин 1 Лейкемія CCRF-CEM HL-60 К-562 MOLT-4 RPMI-8226 SR Недрібноклітинний рак легень А549/АТСС EKVX HOP-62 HOP-92 NCI-H226 NC1-H23 NCI-H332M NCI-H460 NCI-H522 Рак товстого кишківника COLO 205 НСС-2998 НСТ-116 НСТ-15 НТ29 КМ12 SW-620 Рак ЦHС SF-268 SF-295 SF-539 SNB-19 SNB-75 U251 Меланома LOX IMVI MALME-3M M14 MDA-MB-435 SK-MEL-2 SK-MEL-28 SK-MEL-5 UACC-257 UACC-62 Рак яєчників IGROV1 OVCAR-3 OVCAR-4 OVCAR-3 OVCAR-8 NCI/ADR-RES Параметри і протипухлинної активності lgGI50 lgTGI IgLС50 2 3 4 -5.51 -4.74 -5,70 -4.76 -5,62 -5,42 -4,00 -4,00 -4,68 -4.00 -4,00 -4,32 >-4,00 >-4.00 >-4.00 >-4.00 >-4.00 >-4.00 -5,32 -4.84 -5.45 -4,89 -5.68 -4.36 -4.27 -5.03 -5.21 -4,75 -4,00 -4.79 -4,47 -5.04 -4.00 -4,00 -4.11 -4.00 -4,38 >-4.00 -4.28 -4,05 -4.34 ->-4.00 >-4.00 >-4.00 >-4,00 -4.85 -4,49 -5,58 -5.60 -5.42 -4.87 -4,95 >-4,00 >-4.00 -4.84 -4.33 -4.73 >-4.00 >-4,00 >-4.00 >-4.00 -4.39 >-4.00 >-4.00 >-4.00 >-4.00 -4.73 -5.02 -4.99 -4.55 -5.16 -5,26 -4,19 -4.18 -4,58 >-4.00 -4,58 -4,58 ^-4.00 >-4.00 -4,16 >-4.00 -4.06 -4,01 -5,02 -4,49 -4,60 -4.96 -4.91 -4,75 -5,10 -5,05 -5.25 -4,33 >-4,00 >-4,00 >-4.00 -4,jj >-4.00 >-4.00 -4.22 -4,51 >-4.00 >-4.00 >-4.00 >-4.00 >-4.00 >-4.00 >-4.00 >-4.00 >-4.00 -4.78 -4,77 -4.96 -4.20 -5.12 -4.39 -4,27 -4,14 -4,45 >-4.00 -4,56 >-4.00 >-4.00 >-4.00 >-4.00 >-4.00 -4,05 >-4.00 7 54068 8 Продовження таблиці 1 2 -4,32 3 >-4.00 4 >-4.()0 -4.86 -4.52 -5,13 -4.57 -7.93 -4.78 -4.60 -4,45 >-4.00 -4,53 >-4.00 -5,29 -4.30 >-4,00 -4.05 >-4.00 >-4.00 >-4.00 -4,48 >-4,00 >-4.00 -5,40 -4.96 -4,69 -4,54 -4,15 -4.12 -5,01 -5,33 -4,55 -5.32 SK-OV-3 -4.18 -4,57 >-4,00 >-4,00 >-4.00 >-4.00 >-4.00 >-4.00 Рак нирок 786-0 A498 ACHN CACI-1 RXF 393 TK-10 UO-31 Рак простати PC-3 DU-145 Рак молочної залози MCF7 HS 578T BT-549 T-47D Як видно з даних таблиці, 5-(4діетиламіпофенілметиліден)-4-(2-метил-4-пдрокси5-ізопропілфеніламіно)-5H-тіазол-2-он, що заявляється, проявляє суттєве інгібування росту майже всіх ліній ракових клітин. Найнижчі ефективні значення концентрацій речовини спостерігалися при дії на лінію раку нирок RXF 393 (lgGI50=-7.93), лінії лейкемії К-562 (lgGI50=-5,70) та RPMI-8226 (lgGl50=5,62), лінію рику легень NCI-H226 (lgGI50=-5,68), лінію раку кишківника МСТ-15 (lgGI50=-5,60). Крім того, спостерігався досить високий рівень ефективного інгібування на лінії раку нирок RXF 393 у порівнянні середнім значенням lgGI50 для 57 ліній, що становив -5,02. Таким чином, заявлена сполука виявляє високу протипухлинну дію і є перспективним протипухлинним засобом. Для розуміння даної корисної моделі нижче наведено приклад одержання 5-(4діетиламінофенілмегиліден)-4-(2-мегил-4-гідроксі5-ізопропілфеніламіно)-5Н-тіазол-2-ону. Сполуку синтезують в декілька етапів наступним чином. 1. Синтез 4-(2-метил-4-гід роксп-3-ізопропіл феніламіно)-5Н-тіазол-2-ону. Еквімолярну суміш 0,04моль 4-тіоксо-2-тіазолідону, гідрохлориду 4аміно-2-ізопропіл-5-метилфенолу та безводного ацетату натрію в 30мл етанолу кип’ятять у колбі із Комп’ютерна верстка O. Рябко зворотнім холодильником протягом 30хв. Осад, що утворився, відфільтровують, промивають етанолом та ефіром. Вихід 70%. Т.топл. 195-197°С. C13H16N2O2S Знайдено. %: N10,50, S12.00. Вирахувано. %: N10,60. S12,13. 2. Синтез 5-(4-дістиламінофенілметиліден)-4(2-метил-4-гідроксп-5-ізопропілфеіііламіно)-5Нтіазол-2-оііу. Суміш 0,0034 моль 4-(2-метил-4гідрокси-5-ізопропілфеніламіно)-5Н-тіазол-2-ону, 0,0038моль 4-діетиламіпобепзальдегіду та 0.0034моль безводного ацетату натрію в 10мл оцтової кислоти нагрівають протягом 1год у колбі із зворотнім холодильником. Після повного охолодження реакційної суміші осад відфільтровують, промивають оцтовою кислотою, водою, етанолом та ефіром, висушують і перекристалізовують з суміші ДМФА-етанол (1:2) або ДМФА-оцтова кислота (1:2). Вихід 79%. Т.топл. >250°С. C22H16S2F3N2O3. Знайдено, %: N9.80. S7.40. Вирахувано, %: N9.92, S7,57. ЯМР 1Н, δ, м.ч.: 1.15 (м, 12Н, (СН3)2СН. (CH3СН2)2N). 2.07 (с, 3Н. СH3). 3.18 (кв, 1Н, СН), 3.43 (кв, 4Н, (CH3CH2)2N), 6.70 (с, 1Н, аром.), 6.82 (д. 2H,.J=8.4Гц. аром.). 6.84 (с, 1Н. аром.), 7.41 (д, 2Н, J=8.4Гц. аром.). 7.91 (с, 1Н, =СН). 9.39 (с, 111. ОН). 10.31 (с, 1Н, NH). Підписне Тираж 26 прим. Міністерство освіти і науки України Державний департамент інтелектуальної власності, вул. Урицького, 45, м. Київ, МСП, 03680, Україна ДП “Український інститут промислової власності”, вул. Глазунова, 1, м. Київ – 42, 01601