Штам vibrio cholerae o139 №35-д для діагностики холерних та інших патогенних вібріонів з метою вхідного контролю діагностичних препаратів

Штам Vibrio cholerae O139 № 35-Д для діагностики холерних та інших патогенних вібріонів з метою вхідного контролю діагностичних препаратів, який задепонований в МПМ ДУ "Інститут епідеміології та інфекційних хвороб ім. Л.В.Громашевського" Академії медичних наук України 27.11.2008 p. і знаходиться у філії МПМ на базі Державного закладу "Українська протичумна станція" МОЗ України. Корисна модель належить до біотехнології та медицини, а саме, до бактеріології, і може використовуватися в практичних та наукових лабораторіях, референс-лабораторії МОЗ України з діагностики холерних та інших патогенних вібріонів з метою вхідного контролю діагностичних препаратів. До цього часу перевірка препаратів для діагностики Vibrio cholerae O139 проводилась лише в країнах, де було депоновано штамм Vibrio cholerae 0139, а через відсутність в Україні відповідних штамів така перевірка взагалі не проводилась. Придбання та періодичні поновлення еталонного штаму за кордоном має високу вартість, а також пов'язане зі складною процедурою придбання патогенних бактерій за кордоном. В основу корисної моделі поставлене завдання знайти новий штам, який може бути використаний для діагностики холерних та інших патогенних вібріонів, вхідного контролю діагностичних препаратів при дослідженнях на холеру. За умови штам має бути доступний на території України та відповідно мати нижчу вартість, ніж придбаний у закордонних колекціях. Поставлене завдання вирішують за рахунок виділення та застосування штаму Vibrio cholerae 0139 № 35-Д для вхідного контролю діагностичних препаратів при дослідженнях на холеру. Штам Vibrio cholerae O139 № 35-Д задепонований в колекції депозитарію музею патогенних мікроорганізмів (МПМ) ДУ «Інститут епідеміології та інфекційних хвороб ім. Л.В.Громашевського" Академії медичних наук України 27.11.2008 p., і знаходиться у філії МПМ на базі Державного закладу «Українська протичумна станція» МОЗ України. Штам має характерні властивості. Морфологічні ознаки. У мазках з добових агарових культур клітини цього штаму мають вигляд вигнутих грамнегативних паличок, що рухаються. Спор і капсул не утворюють, добре фарбуються всіма аніліновими барвниками. Поліморфізм помірно виражений. Культуральні властивості. (19) UA (11) 57566 (13) (21) u201007161 (22) 09.06.2010 (24) 10.03.2011 (46) 10.03.2011, Бюл.№ 5, 2011 р. (72) ХАЙТОВИЧ ОЛЕКСАНДР БОРИСОВИЧ, ІЛЬЇЧЬОВ ЮРІЙ ОЛЕКСАНДРОВИЧ, ПІДЧЕНКО НАДІЯ НИКИФОРІВНА, В'ЯЛИХ ЖАННА ЕДУАРДІВНА (73) ДЕРЖАВНИЙ ЗАКЛАД "УКРАЇНСЬКА ПРОТИЧУМНА СТАНЦІЯ" МОЗ УКРАЇНИ, ДЕРЖАВНА УСТАНОВА "ІНСТИТУТ ЕПІДЕМІОЛОГІЇ ТА ІНФЕ U 1 3 На пластинах 1,5-2 % лужного агару рН (7,6 ±0,2) вібріони штаму Vibrio cholerae поп 0139 № 35-Д виростають у вигляді круглих ніжних, напівпрозорих, блакитних у проточному світлі колоній розміром 1,5-2 мм у діаметрі. Колонії на твердому елективному середовищі TSBS мають яскравий жовтий колір на зеленому фоні середовища, напівпрозорі, 1,5 - 2 мм у діаметрі. Добре ростуть на елективному середовищі Vibrio агар у вигляді круглих, напівпрозорих, блакитних у проточному світлі колоній, розміром 1,52мм у діаметрі. У бульйоні і пептонній воді вібріони у процесі росту дають рівномірне помутніння й утворюють поверхневу плівку. Після 3-х днів зберігання посівів при кімнатній температурі морфологія колоній зберігається. Суспензії добових агарових культур у 0,9 % розчині NaCI стабільні і не аглютинуються у розчині трипофлавіну. Оптимальна температура росту +(36±1)°С, температурний інтервал росту 20 - 40 °С, час росту на рідких поживних середовищах 3-6 годин, на щільних поживних середовищах -18-20 годин. Біохімічні ознаки. Вібріони штаму Vibrio cholerae О139 № 35-Д володіють оксидазною активністю. Ферментують глюкозу в середовищі Хью-Лейфсона в аеробних й анаеробних умовах, ферментують маніт, сахарозу, манозу (з 0,1 % пептону), але не розщеплюють лактозу, арабінозу, інозит, мають ферменти діастазу, желатиназу та триптофаназу (індол). Фермент тіосульфатредуктази (сірководень) - негативний. Ріст на 1 % пептонній воді з 0 % NaCI присутній, на на 1 % пептонній воді з 7 % NaCI відсутній, на 1 % пептонній воді з 10 % NaCl - відсутній. Містять декарбоксілазу лізину і орнітину, але не мають дигідролази аргініну. Антигенні властивості. Штам Vibrio cholerae 0139 № 35-Д відноситься до серогрупи 0139, має типову реакцію аглютинації холерною сироваткою 0139 - 1:160 +++; холер 57566 4 ними сироватками О, Інаба, Огава, RO, вібріони не агглютинуються. Чутливість до фагів штаму Vibrio cholerae non О139 № 112: холерного «С», «ельтор», ХДФ - 3, ХДФ - 4, ХДФ-5, ДДФ - негативна. Гемолітична активність по Грейгу - негативна. Штам був досліджений за допомогою полімеразної ланцюгової реакції на наявність наступних генів: toxR (ген видової приналежності культури, глобальний ген регулятор), Hly - для визначення виду всіх серогруп Vibrio cholerae; WbeT - для визначення приналежності до серогрупи O1; WbeF для визначення приналежності до серогрупи О139; сtх (токс-ген), tcp (токсин-корегулюючих пілей адгезії) [1]. У штаму Vibrio cholerae 0139 № 112 виявлені гени toxR, Hly, WbeF, гени ctx, tcp, WbeT - відсутні. Штам зберігається у ліофілізованому стані при температурі +(5±2)°С, життєздатність його зберігається не більше 5 років або в напіврідкому 0,4 % поживному агарі (рН 7,6-7,8) під шаром стерильної вазелінової олії при температурі +18 - +25 °С, але не більше 1 року. Приклад 1. Здійснення корисної моделі. При висівах на середовища збагачення - 1 % пептонну воду та бульйон Хоттінгера культури Vibrio cholerae 0139 № 112 через 6 годин росли у вигляді рівномірного помутніння з ніжною плівкою на поверхні. Була відсутня дисоціація колоній при зберіганні протягом 48-72 годин на лужному агарі при температурі +(20± 2)°С. Не виявлено S-Rдисоціації у культур в тесті з фізіологічним розчином та RO-сироваткою. Морфологія мікробних клітин у всіх досліджуваних культур була типова Грам негативні вигнуті палички. За характером росту на лужному агарі - блакитні, круглі, напівпрозорі колонії з рівним краєм до 2 мм у діаметрі. На рідкому середовищі збагачення ріст у всіх культур спостерігався у вигляді рівномірного помутніння з утворенням плівки на поверхні. Біохімічні, серологічні властивості культур та результати досліджень з фагами після 5 пасажувань на лужному агарі наведені в табл. 1. 5 57566 6 Таблиця 1 Визначення ефективності корисної моделі ОЗНАКИ 1 1 пасаж V. cholerae O139 2 негативна кислота кислота кислота негативна негативна позитивна Лактози Маніту Сахарози ФЕРМЕНТАЦІЯ: Манози Арабінози Інозиту Середовище Кодама Середовище Хью-Лейфсона кислота (окислення глюкози) Середовище Хью-Лейфсона кислота (ферментація глюкози) Індолу позитивна УТВОРЕННЯ: H2S негативна желатина позитивна Реакція Фогес-Проскауера позитивна Ріст на 1 % пептонній воді ріст без NaCI Ріст на 1 % лептонній воді з 7 немає росту % NaCI Ріст на 1 % пептонній воді з немає росту 10 % NaCI Лізиндекарбоксілаза позитивна Аргініндигідролаза негативна Орнітиндекарбоксілаза позитивна Контроль амінокислот норма АГЛЮТИНАЦІЯ негативна Сироватка «О» Сироватка «RO» негативна Сироватка Інаба негативна Сироватка Огава негативна Сироватка O139 ++++ Холерний фаг «С» негативна Холерний фаг Eltor негативна Фаг ХДФ - 3 негативна Фаг ХДФ - 4 негативна Фаг ХДФ - 5 негативна Наявність гену toxR присутній Наявність гену Нlу присутній Наявність гену ctx відсутній Наявність гену tcp відсутній Наявність гену WbeT відсутній Наявність гену WbeF присутній 2 пасаж V. cholerae O139 3 негативна кислота кислота кислота негативна негативна позитивна 3 пасаж V. cholerae O139 4 негативна кислота кислота кислота негативна негативна позитивна 4 пасаж V. cholerae O139 5 негативна кислота кислота кислота негативна негативна позитивна 5 пасаж V. cholerae O139 6 негативна кислота кислота кислота негативна негативна позитивна кислота кислота кислота кислота кислота кислота кислота кислота позитивна негативна позитивна позитивна позитивна негативна позитивна позитивна позитивна негативна позитивна позитивна позитивна негативна позитивна позитивна ріст ріст ріст ріст немає росту немає росту немає росту немає росту немає росту немає росту немає росту немає росту позитивна негативна позитивна норма позитивна негативна позитивна норма позитивна негативна позитивна норма позитивна негативна позитивна норма негативна негативна негативна негативна негативна негативна негативна ++++ негативна негативна негативна негативна негативна присутній присутній відсутній відсутній відсутній присутній негативна негативна негативна ++++ негативна негативна негативна негативна негативна присутній присутній відсутній відсутній відсутній присутній негативна негативна негативна ++++ негативна негативна негативна негативна негативна присутній присутній відсутній відсутній відсутній присутній негативна негативна негативна ++++ негативна негативна негативна негативна негативна присутній присутній відсутній відсутній відсутній присутній Висновок: Штам Vibrio cholerae O139 № 35-Д доступний в Україні, стабільні морфологічні, культуральні, біохімічні, серологічні характеристики штаму Vibrio cholerae О139 № 35-Д дозволяють використовувати його для діагностики холерних та інших патогенних вібріонів, вхідного контролю діагностичних препаратів при дослідженнях на холеру. Наявність штаму Vibrio cholerae О139 № 35-Д у вітчизняній колекції дозволить уникнути витрат коштів на купівлю штамів у закордонних колекціях та на періодичне поновлення цих штамів. Джерела інформації: 1. „Інструкція з організації та проведення протихолерних заходів, клініки та лабораторної діагностики холери", затверджено наказом МОЗ України № 167 від 30.05.1997р. 2. „Методичні рекомендації з епідеміології, клініки, лабораторної діагностики та профілактики захворювань, що викликані холерними вібріонами не 01 групи", затверджено наказом МОЗ України № 185 від 07.04.2004р. МР 9.3.1 - 106 - 2004р. 7 Комп’ютерна верстка Л. Купенко 57566 8 Підписне Тираж 23 прим. Міністерство освіти і науки України Державний департамент інтелектуальної власності, вул. Урицького, 45, м. Київ, МСП, 03680, Україна ДП “Український інститут промислової власності”, вул. Глазунова, 1, м. Київ – 42, 01601