Спосіб виготовлення мікобактеріальних антигенів для диференційної серодіагностики туберкульозу у великої рогатої худоби

Спосіб виготовлення мікобактеріальних антигенів для диференційної серодіагностики туберкульозу у великої рогатої худоби, який включає вирощування мікобактерій туберкульозу бичачого, людського і пташиного видів, інактивацію бактері 3 59848 експозиції з наступним центрифугуванням при 1,5 тис. обертів на хвилину упродовж 20 хвилин. Одержаний надосад піддають озвученню при 22 кГц з експозицією в 10-30 хвилин (креслення). Надалі одержані антигени стандартизують за вмістом білка на спектрофотометрі. При цьому концентрацію білка в препаратах визначають за номограмою Адамса [5] і прирівнюють за цим показником до ППД-туберкуліну для ссавців. Чутливість і специфічність набору мікобактеріальних антигенів визначали в реакції пасивного 4 гемолізу модифікованій (РПГМ) [6] з сироватками крові лабораторних тварин (кролів), заражених референтними штамами Mycobacterium bovis, Mycobacterium tuberculosis, Mycobacterium avium та сенсибілізованих атиповими мікобактеріями в експериментальних умовах. Приклад 1. Визначення чутливості і специфічності набору мікобактеріальних антигенів в РПГМ при дослідженні сироваток крові тварин, заражених мікобактеріями туберкульозу різних видів в експериментальних умовах. Таблиця 1 Титри специфічних антитіл у сироватках крові тварин, експериментально інфікованих мікобактеріями туберкульозу (ум. од. екс.) Сироватки крові тварин, № інфікованих проби 1 2 Mycobacterim bovis 3 M±m 4 5 Mycobacterium tuberculosis 6 M±m 7 8 Mycobacterium avium 9 M±m 10 He інфіковані (контроль) 11 12 Mycobacterium bovis 0,125 0,095 0,114 0,111±0,011 0,074 0,081 0,090 0,081± 0,026 0,025 0,018 0,023±0,003 0 0 0 Титр специфічних антитіл до антигенів з: Mycobacterium Mycobacterium ППД-туберкуліну tuberculosis avium для ссавців 0,095 0,030 0,095 0,085 0,029 0,089 0,110 0,035 0,109 0,094±0,004 0,031±0,002 0,097±0,007 0,130 0,030 0,080 0,125 0,029 0,069 0,112 0,045 0,089 0,122±0,007 0,034±0,004 0,079±0,007 0,024 0,150 0,062 0,031 0,130 0,075 0,027 0,131 0,068 0,027±0,002 0,137±0,008 0,070±0,003 0 0 0 0 0 0 0 0 0 Отримані результати випробування набору мікобактеріальних антигенів у гомологічній і гетерологічній системах представлені в табл. 1 засвідчують їх 100 % чутливість і специфічність. Приклад 2. Визначення чутливості і специфічності набору мікобактеріальних антигенів в РПГМ при дослідженні сироваток крові лабораторних тварин, експериментально сенсибілізованих атиповими мікобактеріями належних до III-IV груп за класифікацією Раньйона. Таблиця 2 Титри специфічних антитіл у експериментально сенсибілізованих сироватках крові лабораторних тварин, атиповими мікобактеріями (ум. од. екс.) Сироватки крові тва№ рин, інфікованих проби Mycobacterium aviumintracellulare, АВ-1 Mycobacterium chelonei, ДГК-8 Mycobacterium fortuitum, KЛ-11 1 2 3 M±m 4 5 6 M±m 7 8 9 M±m Титр специфічних антитіл до антигенів з: Mycobacterium Mycobacterium Mycobacterium ППД-туберкуліну bovis, шт. Vallee tuberculosis, шт, Dt/st avium, шт. 14141 для ссавців 0,027 0,015 0,051 0,030 0,031 0,018 0,049 0,041 0,026 0,020 0,055 0,021 0,028±0,002 0,017±0,002 0,051±0,001 0,030±0,006 0,003 0,007 0,020 0,005 0,012 0,009 0,017 0,009 0 0,002 0,021 0,001 0,015±0,005 0,018±0,012 0,019±0,001 0,005±0,002 0,005 0 0,015 0,003 0 0,002 0 0 0,015 0 0,006 0,007 0,020±0,006 0,027±0,002 0,007±0,003 0,008±0,002 5 59848 6 Продовження таблиці 2 Сироватки крові тва- № рин, інфікованих проби Mycobacterium smegmatis, ДЛ-4 10 11 12 M±m Mycobacterium bovis, шт. Vallee 0,021 0 0,005 0,026±0,008 Титр специфічних антитіл до антигенів з: Mycobacterium Mycobacterium ППД-туберкуліну tuberculosis, шт, Dt/st avium, шт. 14141 для ссавців 0 0 0 0,004 0,005 0 0,010 0,008 0 0,014±0,004 0,004±0,001 0 В табл.2 представлені результати досліджень, що свідчать про 100 % чутливість і специфічність набору мікобактеріальних антигенів. Застосування виготовлених запропонованим способом мікобактеріальних антигенів в реакції пасивного гемолізу модифікованій, на відміну від антигену з ППД-туберкуліну для ссавців, дає можливість диференціювати тварин, заражених збудником туберкульозу бичачого виду, від тварин, інфікованих збудником туберкульозу людського і пташиного видів. Джерела інформації: 1. Інструкція про заходи профілактики та оздоровлення тваринництва від туберкульозу. – К.: 1994. - 16 с. 2. Настанова по діагностиці туберкульозу тварин та птиці. - К.: 1994. - 39 с. 3. Пат. № 28240 Україна МПК (2006) А61К39/04, А61К39/35 Спосіб одержання біологіч ного препарату для алергічної діагностики туберкульозу / Власенко В.В., Багрій П.І., Лисенко О.П., Власенко І.Г., заявник і патентовласник Власенко В.В., Багрій П.І., Лисенко О.П., Власенко І.Г. - № u200709929; заявл.05.09.2007; опубл. 26.11.2007, Бюл. № 19. - 4 с. 4. Савченко П.Е. Лабораторная диагностика туберкулеза животных. – Чернигов, 1998. - 63 с. 5. Алейников Т.Л., Рубцов Т.В. Руководство к практическим занятиям по биологической химии.М.: "Медицина". - 1988. – 424 с. 6. Пат. №18970 Україна МПК(2006) А61К39/04 Спосіб прискореної серодіагностики туберкульозу у великої рогатої худоби / Г.М. Дяченко, Н.О. Кравченко, О.В. Головач, О.М. Дмитрук.; заявник і патентовласник Інститут сільськогосподарської мікробіології Української академії аграрних. - № u 200607249; заявл. 30.06.2006; опубл. 15.11.2006, Бюл. № 11. - 4 с. 7 Комп’ютерна верстка В. Мацело 59848 8 Підписне Тираж 24 прим. Міністерство освіти і науки України Державний департамент інтелектуальної власності, вул. Урицького, 45, м. Київ, МСП, 03680, Україна ДП “Український інститут промислової власності”, вул. Глазунова, 1, м. Київ – 42, 01601