Процес одержання вакцини “мультивак” для профілактики і терапії масових хвороб тварин, зумовлених дією асоційованого інфекційного етіологічного фактора

Процес одержання вакцини для профілактики і терапії масових хвороб тварин, зумовлених дією асоційованого інфекційного етіологічного фактора, що включає виготовлення антигену та визначення рівня протективного захисту одержаного препарату, який відрізняється тим, що проводять дослідження виділених мікроорганізмів, їх ідентифікують та виявляють ознаки їх патогенності (екзотоксинів, адгезинів, антилізоцимної, антикомплементарної активностей, тощо), відбирають та проводять селекцію мікроорганізмів із високим патогенним потенціалом, культивують відібрані мікроорганізми для накопичення біомаси, виготовляють комплексний інактивований антиген, додають ад'ювант, що містить 6% гідрооксид алюмінію або 6% завись аеросилу в розчині 0,9% натрію хлориду, або 30% галуни у 0,9% розчині натрію хлориду. Корисна модель, що передбачається, відноситься до ветеринарної біотехнології, зокрема до способів одержання вакцини „Мультівак" для профілактики масових хвороб тварин, зумовлених асоційованою дією патогенних та умовнопатогенних мікроорганізмів. Існує спосіб одержання формолтіомерсалової вакцини проти колібактеріозу і паратифу хутрових звірів, птиці, телят і поросят, який передбачає культивування виробничих штамів сальмонел і ешерихій в рідкому живильному середовищі, розбавлення бактеріальної суспензії до концентрації 4млрд.мкр.кл. в 1мл фізіологічним розчином NaCI, внесення в одержану суспензію ад'юванту та інактивацію одержаної суміші формаліном, консервуванні тіомерсалом [Ветеринарные препараты. Справочник. Под ред. Д.Ф. Осидзе, 1981, с.223], „Способ получения ассоциированной вакцины для профилактики инфекций, вызываемых условнопатогенными бактериями" [патент России №2035189], „Способ отбора вакцинных штаммов энтеробактерий антропозоонозной природы для получения ассоциированной вакцины» [А.С. №178 5531, опубл. 30.12.1992, Бюл. №48], „Спосіб одер жання асоційованої вакцини "Бівак" проти інфекційного ринотрахеїту та парагрипу -З ВРХ" [А.С. №1092778; кл. А61К39/00]; „Вакцина «Рококол» інактивована проти ешерихіозу та рота, коронавірусних інфекцій телят" [патент України №45698], „Спосіб виготовлення вакцини проти стрептококових та/або стафілококових інфекцій тварин" [патент України №41546], „Спосіб одержання препарату для профілактики сальмонельозу та інфекційного ринотрахеїту у телят" [патент України №60089], „Спосіб виготовлення інактивованої вакцини проти сальмонельозу та ешерихіозу тварин" [патент України №67144]. Дані препарати є близькими за технічним рішенням до об'єкту, що заявляється. За допомогою вказаних способів можливо одержати біопрепарати для вакцинопрофілактики і терапії захворювань сальмонельозної, ешерихіозної етіології, рота вірусних і коронавірусних та інфекційного ринотрахеїту у сільськогосподарських тварин, стафілококових та стрептококових інфекцій. Недоліком існуючих способів є те, що застосування одержаних за допомогою вказаних способів препаратів, не забезпечує захист чутливих тварин (0 6097 від дії асоційованого інфекційного фактора, що обумовлює масові захворювання поросят, телят, лошат, ягнят, птиці (сільськогосподарської та декоративної), щенят хутрових звірів, лабораторних тварин (морських свинок, мишей, щурів). Збудниками таких захворювань частіше виступають асоціації патогенних та умовнопатогенних бактерій. Встановлено, що частіше обумовлюють масові захворювання і загибель тварин при промисловому веденні тваринництва ешерихії, псевдомонади, гемофілюси, актинобацилюси, стафілококи, протеї, стрептококи, бордотели, мікоплазми, хламідії, сальмонели, тощо. Прототипом об'єкту, що заявляється, може бути "Способ получения гетерологических иммуноглобулинов против вирусных инфекций Марбург и Эбола" [Патент России №2089217 от 01.04.1992, кл. А61К39/085]. Цей спосіб включає виготовлення антигенів, визначення рівня протективного захисту одержаного за цим способом препарату. Проте за допомогою даного способу не можливо одержати вакцину проти масових інфекційних хвороб тварин, зумовлених дією асоційованого інфекційного фактора, при інтенсивному веденні тваринництва, що є недоліком. В основу корисної моделі поставлено задачу розробити процес одержання вакцини для профілактики і терапії масових хвороб тварин, зумовлених дією асоційованого інфекційного етіологічного фактора, що включає виготовлення антигену та визначення рівня протективного захисту одержаного препарату, шляхом проведення дослідження виділених мікроорганізмів, їх ідентифікації та виявлення ознак їх патогенності (екзотоксинів, адгезинів, антилізоцимної, антикомплементарної активностей, тощо), відбирання та проведення селекції мікроорганізмів із високим патогенним потенціалом, культивування відібраних мікроорганізмів для накопичення біомаси, виготовлення комплексного інактивованого антигену, додавання ад'юванту, що містить 6% гідрооксид алюмінію або 6% завись аеросилу в розчині 0,9% натрію хлориду, або 30% галуни у 0,9% розчині натрію хлориду, щоб забезпечити процес одержання вакцини „Мультивак" для профілактики і терапії масових хвороб тварин, зумовлених дією асоційованого інфекційного етіологічного фактору. Спосіб виконується таким чином: 1. проводять лабораторні дослідження біологічного матеріалу від тварин різних статево-вікових груп та загиблих тварин з метою виділення та ідентифікації збудників бактеріальної природи; 2. проводять дослідження з метою ідентифікації виділених мікроорганізмів і виявлення у них ознак патогенності (екзотоксинів, адгезинів, антилізоцимної, антикомплементарної активностей, тощо); 3. на підставі одержаних даних проводять відбір і селекцію мікроорганізмів із високим патогенним потенціалом; 4. проводять культивування відібраних мікроорганізмів з метою накопичення біомаси; 5. виготовляють комплексний інактивований антиген; 6. вносять до комплексного інактивованого антигену ад'ювант (6% гідрооксид алюмінію або за вись аеросилу 6% в розчині 0,9% натрію хлориду, або 30% галуни у 0,9% розчині натрію хлориду). До складу вакцини „Мультівак" входять антигени мікроорганізмів, що виділені з біологічного матеріалу від загиблих та хворих тварин в певному господарстві, в яких встановлено високий патогенний потенціал, а як ад'ювант використовують завись аеросилу 6% в розчині 0,9% натрію хлориду, або гідрооксид алюмінію 6%, або 30% галуни у 0,9% розчині натрію хлориду. Порівняльний аналіз з відомими технічними рішеннями в галузі ветеринарної мікробіології та біотехнології дозволяє зробити висновок, що в способі виготовлення вакцини „Мультівак" для профілактики інфекційних захворювань тварин зумовлених дією асоційованого етіологічного фактора використовуються протективні антигени (комплекс антигенів - екзотоксинів, гемолізинів, адгезинів та соматичних антигенів) мікроорганізмів співчленів паразитоценозу (асоційованого етіологічного фактора), що відповідає критеріям „новизна" та „суттєві ознаки". Приклад 1. Виробничі штами бактерій. З метою виготовлення вакцини „Мультівак" використовували штами бактерій (в яких встановлено високий патогенний потенціал), які виділяли з патологічного матеріалу від загиблих тварин. Приклад 2. Виготовлення комплексного антигену. Відібрані штами бактерій культивували в пробірках з рідкими живильними середовищами (середовища використовували відповідно до видової приналежності мікроорганізмів) при 37°С протягом 24-72 годин. Отриманими матричними культурами засівали ємності з відповідними рідкими живильними середовищами і культивували при 37°С протягом 72-86 годин. Після чого в бактеріальну суспензію виробничих штамів вносили фосфатно-сечовинний буфер (рН7,0-7,2), виходячи з розрахунку 1л буфера на 10л бактеріальної суспензії. Отриману суміш витримували 20 хвилин при 60°С, після чого вносили 0,5% формаліну і витримували при 37-38°С впродовж 5-15 діб. Концентрацію мікроорганізмів у суспензії доводили до 8-15млрд.мк.кл./мл. Отримані інактивовані антигени виробничих штамів об'єднували у співвідношенні 1:1; в одержану суміш вносили гідрооксид алюмінію 6%, або 10% зависі аеросилу (6%) в розчині 0,9% натрію хлориду, або 30% галуни у 0,9% розчині натрію хлориду. Приклад 3. Визначення стерильності та нешкідливості комплексного антигену та залишкової кількості формаліну. Стерильність вакцини „Мультівак" визначали за ГОСТ 28085-89. Вакцина „Мультівак" була стерильною. Нешкідливість вакцини „Мультівак" визначали за ГСТУ 46.024-2002. Вакцина „Мультівак" була нешкідливою для лабораторних тварин. Залишкова кількість формаліну у вакцині „Мультівак" не перевищувала 0,5%. Приклад 4. Визначення імуногенності вакцини. Білим мишам масою 18-20г підшкірне вводили вакцину дворазове з інтервалом між ін'єкціями 1014 діб в об'ємі 0,5см3 (кількість тварин визначаєть 6097 ся КІЛЬКІСНИМ антигенним складом вакцини по 10 мишей на кожний антиген, що входить до складу вакцини) Через 14 діб після останнього введення препарату дослідних тварин заражали інтраперитоніально раніше визначеними летальними дозами штамів, що використовувалися як вакцинні (кожним штамом заражали по 10 лабораторних тварин) Спостереження за зараженими тваринами вели 10 діб Препарат вважали активним в тому разі, коли за термін спостереження загибель Комп ютерна верстка Н Лисенко серед заражених патогенними мікроорганізмами тварин не перевищувала 30% Спосіб одержання вакцини „Мультівак" профілактики масових хвороб тварин, зумовлених дією асоційованого інфекційного етіологічного фактору знайде застосування в тваринницьких господарствах приватного і громадського сектора власності, неблагополучних для профілактики масових хвороб тварин, зумовлених асоційованою дією патогенних та умовно-патогенних мікроорганізмів Підписне Тираж 28 прим Міністерство освіти і науки України Державний департамент інтелектуальної власності, вул Урицького, 45 м Київ, МСП, 03680, Україна ДП 'Український інститут промислової власності", вул Глазунова, 1, м Київ - 42, 01601