Спосіб прогнозування генетично детермінованої тяжкої атопічної бронхіальної астми у дітей з дермато-респіраторним синдромом

Спосіб прогнозування генетично детермінованої тяжкої бронхіальної астми у дітей із дерматореспіраторним синдромом, що включає застосування полімеразної ланцюгової реакції, який відрізняється тим, що розраховують ступінь ризику 3 61802 М.Б.Фрейдин. - Томск, 2001). Проте, для практичної медицини, та, зокрема, педіатрії, даний спосіб має ряд недоліків, які обумовлені складністю та громіздкістю проведення обстежень, що вимагає значних фінансових затрат на дослідження «генетичних ансамблів», відсутністю чітких критеріїв для призначення подібної методики. Крім того, спосіб ранньої діагностики бронхіальної астми за рахунок виявлення поліморфізму генів інтерлейкінів, застосовувався лише щодо дорослих осіб. Відомості про інформативність даного методу серед дитячого населення відсутні, що вносить протиріччя в доцільність застосування подібного обстеження. Тому, призначення доклінічних профілактичних заходів залишаються емпіричними. В основу корисної моделі поставлене завдання створити спосіб прогнозування генетично детермінованої атопічної бронхіальної астми у дітей з дермато-респіраторним синдромом шляхом удосконалення відомого, досягти визначення ризику реалізації БА з урахуванням шкали тяжкості атопії та забезпечити обґрунтованість призначення поглибленого генетичного дослідження поліморфізму гена Toll-подібного рецептора 4 (Asp299Gly), забезпечити раннє виявлення, швидку диференційну діагностику представленої патології. Поставлену задачу вирішують створенням 4 способу прогнозування генетично детермінованої тяжкої бронхіальної астми у дітей із дерматореспіраторним синдромом, що включає застосування полімеразної ланцюгової реакції, в якому, згідно корисної моделі, розраховують ступінь ризику реалізації бронхіальної астми у дітей за шкалою критеріїв тяжкості атопії шляхом присвоєння кожному критерію оцінки від 0 до 2 балів, внесення показників до розробленої таблиці, обробки і систематизації отриманих результатів, легкій формі атопії відповідає оцінка від 0 до 5 балів, середньотяжкій формі - 5-10 балів, тяжкій формі атопії більше 10 балів, додатково, дітям із тяжкою формою атопії, проводять полімеразну ланцюгову реакцію для виявлення одиничного нуклеотидного поліморфізму Asp299Gly гена Toll-подібного рецептора 4 (позиція 1187, rs4986790), виявлення алеля G TLR4 засвідчує та асоціюється з тяжким перебігом атопічної бронхіальної астми. Запропонований спосіб здійснюють наступним чином: при клініко-генеалогічному обстеженні хворого із дермато-респіраторним синдромом визначали ступінь тяжкості атопії, який включає найбільш значимі ознаки доклінічної картини генетично детермінованої БА запропонованими критеріями: спадковість, супутня алергопатологія, спектр сенсибілізації, лабораторні критерії. Всі отримані дані вносили в розроблену таблицю. Таблиця Шкала тяжкості атопії Критерії по материнській лінії по батьківській лінії мати батько дядько, тітка брати, сестри бабуся, дідусь вік матері на час вагітності більше 30р. ускладнений перебіг вагітності пасивне паління в сім'ї Алергічний діатез в анамнезі стенозуючий ларинготрахеїт на 1 році атопічний дерматит алергічний риніт побутові алергени епідермальні алергени пилкові алергени грибкові алергени харчові алергени Підвищений загальний Ig E Стійка еозинофілія крові Оцінка критерію в балах при його наявності Спадковість 2 1 1 1 0,5 0,5 0,5 0,5 1 1 Супутня алергопатологія 0,5 0,5 1 2 Спектр сенсибілізації: 2 1,5 1 0,5 0,5 Лабораторні критерії 1 0,5 загальна оцінка (бал) 6,5 2,5 4,0 5,5 1,5 5 Запропонована шкала дає можливість визначити ступінь ризику реалізації бронхіальної астми: сума балів від 1 до 5 - визначена як легка форма атопії та сумнівний ризик реалізації патології, 5-10 - середньотяжка та низький ризик, відповідно, більше 10 балів - тяжка атопія та потенційний ризик реалізації БА. Запропонована шкала тяжкості атопії дає можливість сформувати групу дітей із потенційним ризиком реалізації тяжких форм БА, які підлягають поглибленому генетичному дослідженню, а саме, поліморфізму гена TLR4 Asp299Gly. Матеріал для дослідження - венозна периферична кров. Геномну ДНК виділяли за допомогою набору "ДНКекспрес". Поліморфізм гена TLR4 Asp299Gly визначали застосовуючи полімеразну ланцюгову реакцію (ПЛР) з використанням специфічних олігонуклеотидних праймерів. Для ідентифікації алелей проводили рестрикційний аналіз ампліконів за допомогою ендонуклеази рестрикції Nco І. Продукт розщеплення поліморфної ділянки гену TLR4 (Asp299Gly) виявляли за допомогою електрофорезу в 3 % агарозному гелі. Гель забарвлювали етидіумом бромідом з подальшою візуалізацією результатів в УФ-світлі. Запропонована методика дає можливість визначити 3 типи генотипу гена Toll-подібного рецептора 4: GG/GG - гомозигота мутантного типу, AA/AG - гетерозигота, АА/АА«дикий» тип розподілу алелей. Виявлення алеля G TLR4 за результатами проведених полімеразних ланцюгових реакцій засвідчує та асоціюється із тяжким перебігом атопічної бронхіальної астми. Приклад конкретного виконання Хворий Максим Л., 7 років, мешканець м. Полтава, знаходився на стаціонарному обстеженні та лікуванні в педіатричному відділенні №2 алергологічні ліжка Полтавської обласної дитячої клінічної лікарні з 26.04.10 по 14.0510 р. з діагнозом: бронхіальна астма, атопічна форма, персистуючий перебіг, III ступеню тяжкості, період ремісії, ДН 0 ст. Алергічний риніт, персистуючий. Атопічний дерматит, дитяча форма, середньотяжкий перебіг, період ремісії. Дитина поступила зі скаргами на щоденні напади ядухи, які виникають після контакту з побутовим пилом та протягом дня після фізичних навантажень, нічні напади до 2 раз на тиждень, обмеження фізичної активності. З анамнезу відомо, що з 1 місяця життя з'явились прояви ексудативно-катарального діатезу, який максимально був вираженим до 1 року. З 6 місячного віку на фоні гострої респіраторної вірусної інфекції тричі за рік хворів на обструктивний бронхіт та двічі - на стенозуючий ларинготрахеїт. На 2 році життя почали з'являтись обструкції до 7 раз на рік без загальних проявів інфекційного процесу. Неодноразово лікувався в пульмонологічному відділенні з діагнозом: обструктивний бронхіт. Отримував антибактеріальну та симптоматичну терапію. У віці 2,6 років вперше спеціалізовано обстежений в педіатричному відділенні №2, встановлено діагноз: бронхіальна астма, атопічна форма, персистуючий перебіг, III ступеню тяжкості, період медикаментознообумовленої ремісії, ДН 0 ст. Атопічний дерматит, дитяча форма, середньотяжкий перебіг, період 61802 6 ремісії. З 4-річного віку з'явилось утруднене носове дихання. Діагностовано алергічний риніт, персистуючий, сенсибілізація до побутових алергенів. Тривало отримував базисну терапію фліксотидом. З 4 років почали турбувати щоденні напади ядухи, які не завжди знімались вентоліном. Тому, дитині в якості базисної терапії призначено серетид в дозі 25/50 мкг (сальметерол/флутиказону пропіонат). З сімейного анамнезу відомо, що у матері прояви медикаментозної алергії, у дідуся по материнській лінії - поліноз, бронхіальна астма (діагностовано після 30 років). На даний час у хворого виявлено супутню патологію - алергічний риносинуїт, атопічний дерматит. В загальному аналізі крові відмічена стійка еозинофілія. При обстежені виявлена сенсибілізація до побутових алергенів (дом. пил серія № 0197/2 ++++, дом. пил серія № 189 ++, перо подушки серія № 23 ++), епідермальних алергенів (шерсть кішки ++++, шерсть кроля ++++), мікста пилкових алергенів (дерева -; злаки -; бур'яни -); грибкових алергенів (Penicillinum sp +, Monilia sitoph +). При імунологічному обстеженні - підвищений рівень загального IgE до 489,3 МО/мл. Функція зовнішнього дихання за даними спірометрії на період ремісії збережена (ОФВ 1 %-86 %). Отримані клініко-генеологічні дані були занесені в шкалу тяжкості атопії: спадковість по материнській лінії - 2 бала, алергічні захворювання у матері - 1, алергічні захворювання у діда - 0,5, ускладнений перебіг вагітності - 1, пасивне паління в сім'ї - 1; супутня алергопатологія: алергічний діатез в анамнезі - 0,5, стенозуючий ларинготрахеїт - 0,5, атопічний дерматит - 1, алергічний риніт - 2 бала відповідно; спектр сенсибілізації (за результатом специфічного IgE): побутові алергени - 2, епідермальні - 1,5, грибкові - 0,5 відповідно; лабораторні критерії: підвищений загальний IgE - 1, стійка еозинофілія крові - 0,5 балів. Сума балів по шкалі тяжкості атопії відповідно становить 15 балів. Дитині призначено дослідження геномної ДНК для виявлення поліморфної ділянки Asp299Gly гена Toll-подібного рецептора 4. У результаті рестрикції були отримані фрагменти розміром 263 bр. Тобто у хворого діагностовано однонуклеотидний поліморфізм Tollподібного рецептора 4 Asp299Gly (AA/AG - гетерозигота), наявність якого визначає тяжкість перебігу астми. Запропонованим способом в умовах педіатричного відділення №2 Полтавської обласної дитячої клінічної лікарні було обстежено 64 дитини хворих на атопічну бронхіальну астму різного ступеню тяжкості в періоді ремісії. Доцільність запропонованого методу обумовлена високою достовірністю, малоінвазивністю, безпечністю у застосуванні. Запропонований корисна модель дозволяє не тільки проводити дослідження в сім'ях хворих на бронхіальну астму, але й може бути використаним в якості скринінгового методу стосовно осіб із функціональними маркерами схильності до БА, та осіб, які мають інші прояви алергії, оскільки сімейну обтяженість по захворюванню у старшого покоління не завжди вдається виявити. 7 61802 Впровадження генетичного обстеження - пріоритетний напрямок практичної медицини, оскільки він спрямований на оптимізацію прогнозування тяжкої бронхіальної астми, можливості вчасного превентивного лікування і використання комплекс Комп’ютерна верстка А. Крулевський 8 ної профілактики захворювання у дітей, що, в свою чергу, підвищить медичну допомогу дітям та позитивно позначиться на показниках якості життя дітей. Підписне Тираж 23 прим. Міністерство освіти і науки України Державний департамент інтелектуальної власності, вул. Урицького, 45, м. Київ, МСП, 03680, Україна ДП “Український інститут промислової власності”, вул. Глазунова, 1, м. Київ – 42, 01601