Спосіб діагностики розсіяного склерозу

Спосіб діагностики розсіяного склерозу за даними вмісту тау-білкa в сироватці крові, який відрізняється тим, що використовують імунофлюоресцентний метод, де визначення рівня тау-білка здійснюють в імунофлюоресцентній реакції з використанням моноклональних первинних мишачих анти-тау-2 та вторинних антитіл. (19) (21) u201104665 (22) 15.04.2011 (24) 12.12.2011 (46) 12.12.2011, Бюл.№ 23, 2011 р. (72) ВОЛОШИН ПЕТРО ВЛАСОВИЧ, ВОЛОШИНА НАТАЛІЯ ПЕТРІВНА, ГАПОНОВ ІВАН КОСТЯНТИНОВИЧ, ЛЕКОМЦЕВА ЄВГЕНІЯ ВОЛОДИМИРІВНА, ГОРБАЧ ТЕТЯНА ВІКТОРІВНА, ТАРТАКОВСКІЙ ІГОРЬ АЛЄКСАНДРОВІЧ, RU, ЛОПІНА НАТАЛІЯ ГРИГОРІВНА, ЖУК НАТАЛІЯ МИКОЛАЄВНА 3 65425 виконання та відсутність візуалізації отриманих даних. В основу корисної моделі поставлено задачу вдосконалення способу діагностики розсіяного склерозу шляхом вивчення вмісту тау-білка (clone 2) в сироватці крові імунофлюоресцентним методом з використанням первинних й вторинних моноклональних антитіл, що мають забезпечити підвищення специфічності, однозначності й чутливості способу діагностики PC (Bartosik-Psujek H., Psujek M., Jaworski J., Stelmasiak Z. Total tau and S100b proteins in different types of multiple sclerosis and during immunosuppressive treatment with mitoxantrone // Acta Neurol. Scand. - 2011. - Vol. 123 (4). - P. 252-256) та надасть можливість отримати нейровізуалізаційні дані. Суть корисної моделі полягає в тому, що у хворих на PC вивчається вміст тау-білка імунофлюоресцентним методом з використанням моноклональних первинних мишачих анти-тау-2 та вторинних антитіл порівняно з даними контрольної групи здорових осіб та неврологічним контролем. Задача, яку покладено в основу корисної моделі, вирішується тим, що у відомому способі діагностики PC в сироватці крові хворих на PC вивчається вміст тау-білка імунофлюоресцентним методом з використанням первинних й вторинних моноклональних мишачих антитіл порівняно з даними контрольної групи здорових осіб та неврологічним контролем хворих на епілепсію. Імунофлюоресцентний метод дає змогу виявлення субклітинного компонента - нейроантигену - за допомогою імунологічної флюоресцентної реакції, цей метод відзначається високою специфічністю та чутливістю та оснований на конкурентному зв'язуванні моноклональних антитіл, які є специфічними до різних епітопів дослідних високоглобулярних молекул тау-протеїну. За умов імунофлюоресцентної реакції з первинними і вторинними моноклональними антитілами було продемонстровано значне збільшення рівня таупротеїну в сироватці крові хворих на PC, на відміну від зниження цього показника у хворих неврологічного контролю та здорових осіб. Таким чином, застосування корисної моделі у клініці за допомогою імунофлюоресцентного дослідження рівня тау-білка в сироватці крові надасть можливість ранньої та адекватної діагностики PC. Спосіб діагностики здійснюється таким чином. У пацієнта одержують кров і заморожують при -20 °С. Зразки, отримані від хворих, та стандарти, отримані від контрольної групи, а також у зв'язку з відсутністю стандартної калібровальної кривої, як контрольної групи згідно з методикою Землан 4 (Zemlan F. US Patent 6589746 - Method of detecting axonally-derived protein tau in patients with traumatic CNS injury // Traumatic CNS Injury, 2003), додають до контрольної групи, так званий, "неврологічний контроль", який складається із хворих на епілепсію у міжнападний період. Зразки й подвійні стандарти (контроль та неврологічний контроль) інкубують з першим моноклональним мишачим Anti-τ (Tau, clone 2) антитілом протягом 2 годин у термостаті при температурі +37 °С в присутності вторинного антитіла, міченого ізотіоціанід флюоресцентом специфічним до IgG. Після інкубації зміст відмивається тричі у буферному розчині з твином для вилучення незв'язувальних комплексів антитіл до тау. Для визначення тау-білка імунофлюоресцентним методом використовують стандартні набори фірми Sigma (USA). Для визначення концентрації тау в імунофлюоресцентній реакції використовують вимірювання флюоресцентного свічення, що проводиться з використанням імунофлюоресцентного мікроскопа "Olympus" BX41 (Японія). Далі формують базу даних з показників здорових осіб (контрольна група) і порівнюють з нею показники пацієнтів з розсіяним склерозом (основана група) і показники пацієнтів неврологічного контролю з епілепсією (група клінічного порівняння). Приклад У ході дослідження було обстежено 3 клінічні групи - 1 група складалася з 87 хворих (з них 78 жінок, 89,66 % та 9 чоловіків, 10,34 %, у віці від 27 до 42 років) на різні типи перебігу розсіяного склерозу, що знаходилися на лікуванні у відділенні нейроінфекцій та розсіяного склерозу інституту, 20 хворих жінок на епілепсію у міжнападний період у віці від 19 до 38 років (середній вік складав 27,45±8,71 років) та 20 практично здорових осіб (з них 10 жінок, 50 % та 10 чоловіків у віці від 25 до 40 років). Середній вік пацієнтів 1 групи складав 41,52±14,34 років, середній вік контрольної групи 27,63±8,96 років. Всі хворі 1 групи на момент обстеження приймали комплексне патогенетичне лікування: імуноглобулін, цитостатики, вітаміни, судинна терапія. Всі хворі 2 групи отримували базисну терапію протиепілептичними засобами у середньотерапевтичних дозах. В ході дослідження було з'ясовано, що пацієнти з PC мають дуже високий рівень тау-білка в сироватці крові та статистичне підвищення його рівня на 0,98 ум.од. оптичної щільності (ОЩ, D) порівняно зі здоровим контролем (р