Спосіб діагностики вторинно-прогредієнтного типу перебігу розсіяного склерозу у жінок

Спосіб діагностики вторинно-прогредієнтного типу перебігу розсіяного склерозу у жінок за даними вмісту тау білка в сироватці крові, який відрізняється тим, що використовують імунофлюоресцентний метод, де визначення рівня тау білка здійснюють в імунофлюоресцентній реакції з використанням моноклональних первинних анти-тау-2 та вторинних IgG () FITC антитіл. (19) (21) u201106153 (22) 17.05.2011 (24) 25.11.2011 (46) 25.11.2011, Бюл.№ 22, 2011 р. (72) ВОЛОШИН ПЕТРО ВЛАСОВИЧ, ВОЛОШИНА НАТАЛІЯ ПЕТРІВНА, НЕГРЕБА ТЕТЯНА ВАЛЕР'ЯНІВНА, ГАПОНОВ ІВАН КОСТЯНТИНОВИЧ, ЛЕКОМЦЕВА ЄВГЕНІЯ ВОЛОДИМИРІВНА (73) ДЕРЖАВНА УСТАНОВА "ІНСТИТУТ НЕВРОЛОГІЇ, ПСИХІАТРІЇ ТА НАРКОЛОГІЇ АМН УКРАЇНИ" 3 вітчизняними дослідниками (Неіп К., Kohler A., Diem R. et al. Biological markers for axonal degeneration in cerebrospinal fluid and blood of patients with the first event indicative for multiple sclerosis // Neuroscience Lettres.- 2008.- Vol. 436, Issue 1.- P. 7276.), де, насамперед, значна увага приділяється визначенню у лікворі рівню тау протеїну та антитіл до тау у сироватці крові (Jimenez-Jimenez F. J., Ayuso-Peralta L., Medina-Acebron S. et al., Tau protein concentrations in cerebrospinal fluid of patients with multiple sclerosis // Acta Neurol. Scand.- 2002.Vol. 106, N 6.- P. 351-354). За прототип корисної моделі правлять факти збільшення концентрації тау білка в лікворі та крові жінок хворих на PC, що вимірюване імуноферментним методом (Valis M., Talab R., Stourac P. et al., Tau protein, phosphorylated tau protein and beta-amyloid42 in the cerebrospinal fluid of multiple sclerosis patients // Neuro Endocrinol. Lett.- 2008.- Vol. 29 (6).- P. 971-976.). Серед недоліків прототипу звертає на себе увагу низька специфічність методу, складна методика виконання та відсутність візуалізації отриманих даних. В основу корисної моделі поставлено задачу вдосконалення способу діагностики вториннопрогредієнтного типу перебігу розсіяного склерозу у жінок шляхом вивчення вмісту тау білку в сироватці крові імунофлюоресцентним методом з використанням моноклональних первинних антитау-2 й вторинних FITC-кон'югованих антитіл, що забезпечить підвищення специфічності та однозначності й чутливості способу діагностики PC у жінок (Bulut М., Koksal О., Dogan S. et al. Tau protein as a serum marker of brain damage in mild traumatic brain injury: Preliminary results // Advances in Therapy.- 2006.- № 23 (1).- P. 12-22.). Суть корисної моделі полягає в тому, що у жінок з вторинно-прогредієнтним типом перебігу PC вивчається вміст тау білка імунофлюоресцентним методом з використанням моноклональних первинних анти-тау-2 та вторинних IgG () FITC антитіл порівняно з даними контрольної групи здорових осіб та групами співставлення, який складається із чоловіків хворих на вторинно-прогредієнтний тип перебігу PC та жінок хворих на ремітуючий тип перебігу PC . Задача, яку покладено в основу корисної моделі, вирішується тим, що у відомому способі діагностики вторинно-прогредієнтного типу перебігу PC у жінок в сироватці крові жінок з вторинно-прогредієнтним типом вивчається вміст тау білка імунофлюоресцентним методом з використанням моноклональних мишачих первинних анти-тау-2 й вторинних IgG () FITC антитіл порівняно з даними контрольної групи здорових осіб та групами співставлення чоловіків хворих на вторинно-прогредієнтний тип перебігу PC та жінок хворих на ремітуючий тип перебігу PC. За умов імунофлюоресцентної реакції з первинними і вторинними моноклональними антитілами було продемонстровано значне збільшення рівня тау білка в сироватці крові жінок хворих на вториннопрогредієнтний тип перебігу PC на відміну від середніх цифр цього показника у хворих груп порівняння та зниження показника у здорових осіб. 65141 4 Таким чином, застосування корисної моделі у клініці за допомогою імунофлюоресцентного дослідження вмісту тау білка з використанням моноклональних мишачих первинних анти-тау-2 й вторинних IgG () FITC антитіл надасть можливість ранньої та адекватної діагностики вториннопрогредієнтного типу перебігу PC у жінок. Спосіб діагностики здійснюється таким чином. У пацієнта одержують кров і заморожують при – 20 °С. Зразки, отримані від хворих, та стандарти, отримані від контрольної групи, а також, зразки отримані від груп порівняння, які складалися із чоловіків з вторинно-прогредієнтним типом перебігу PC та жінок з ремітуючим типом перебігу PC. Зразки й подвійні стандарти інкубують з першим моноклональним мишачим Anti- (Tau, clone 2) антитілом протягом 2 годин у термостаті при температурі +37 °С в присутності вторинного антитіла, міченого ізотіоціанід флюоресцентом специфічним до IgG. Після інкубації зміст відмивається у буферному розчині з твіном для вилучення не зв'язувальних комплексів антитіл до тау. Для визначення тау білка імунофлюоресцентним методом використовують стандартні набори фірми Sigma (USA). Для визначення концентрації тау в імунофлюоресцентній реакції використовують вимірювання флюоресцентного свічення, що проводиться з використанням імунофлюоресцентного мікроскопа «Olympus» BX41 (Японія). Далі формують базу даних з показників здорових осіб (контрольна група) і порівнюють з нею показники жінок з вториннопрогредієнтним типом перебігу PC (основана клінічна група) і показники пацієнтів груп співставлення: чоловіки з вториннопрогредієнтним типом перебігу PC (2 група) та жінки з ремітуючим типом перебігу PC (3 група). Приклад. У ході дослідження було обстежено 4 клінічні групи: 1 клінічна група складалася з 49 жінок з вторинно-прогредієнтним типом перебігу PC у віці від 27 до 49 років, середній вік пацієнтів 1 групи складав 41,21± 14,3 8 років, що знаходилися на лікуванні у відділенні нейроінфекцій та розсіяного склерозу інституту, 2 клінічна група - 12 чоловіків з вторинно-прогредієнтним типом перебігу PC у віці від 34 до 39 років (середній вік складав 37,52±4,35 років), 3 група складалася із 21 жінки з ремітуючим типом перебігу PC у віці від 28 до 46 років (середній вік - 31,44±12,71) та 4 група - 20 практично здорових осіб (з них 10 жінок, 50 % та 10 чоловіків у віці від 27 до 42 років), середній вік контрольної групи - 27,72±8,84 років. Всі хворі на момент обстеження приймали комплексне патогенетичне лікування: імуноглобулін, цитостатики, вітаміни, судинна терапія. В ході дослідження було з'ясовано, що жінки з вторинно-прогредієнтним типом перебігу PC мають дуже високий рівень тау білка в сироватці крові та статистичне підвищення його рівня на 0,97 ум. од. оптичної щільності (ОЩ, D) порівняно зі здоровим контролем (р