Спосіб одержання ліпосомальної форми протипухлинного препарату платини

Спосіб одержання ліпосомальної форми протипухлинного препарату, який включає висушування фосфоліпідів у вакуумі, емульгування їх у водному середовищі, що містить препарат платини, гомогенізацію ліпідної емульсії, стерилізуючі фільтрації та розлив, який відрізняється тим, що фосфоліпіди містять фосфатидилхолін і дифосфатидилгліцерин у співвідношенні інгредієнтів (99:1) - (98:2)мас. %, співвідношення препарат платини:фосфоліпіди у водному середовищі емульгування становить 1:(15-45) мас.ч., гомогенізацію емульсії виконують з додаванням лактози у співвідношенні препарат платини: лактоза 1:(1535) мас.ч. і після стерилізуючої фільтрації та розливу здійснюють ліофільне висушування. UA (21) 2003087676 (22) 13.08.2003 (24) 15.02.2006 (46) 15.02.2006, Бюл. № 2, 2006 р. (72) Дудниченко Олександр Сергійович, Теміров Юрій Павлович, Швец Віталій Івановіч, RU, Краснопольський Юрій Михайлович, Сеннікова Ірина Георгіївна (73) Дудниченко Олександр Сергійович, Теміров Юрій Павлович, Швец Віталій Івановіч, RU, Краснопольський Юрій Михайлович, Сеннікова Ірина Георгіївна (56) UA А 14629 20.01.1997 Каледин В.И, Попова Н.А., Стеценко А.И, Яковлев К.И. Противоопухолевая эффективность свободного и заключенного в липосомы плаксанта у мышей линии А/Не с метастазами опухоли ГА-1 в печени - Экспериментальная онкология, 1993, №5, т.15, с. 75-77 Каледин В.И., Попова Н.А., Николин В.П., Стеценко А.И. Влияние условий приготовления липосом и схемы введения платина в липосомах мышам ли C2 2 (19) 1 3 66633 4 лено задачу створити такий спосіб одержання лігліцерин у співвідношенні (99:1)-(98:2)мас. %, співпосомальної форми протипухлинного препарату, у відношення препарат платини: фосфоліпіди у воякому технологічні стадії та параметри процесу дному середовищі емульгування становить 1:(15дозволяють отримати препарат з низькою токсич45)мас.ч., гомогенізацію емульсії виконують з доністю, низьким індексом окислювання, стабільними даванням лактози у співвідношенні препарат плафізико-хімічними властивостями у процесі зберітини: лактоза 1:(15-35)мас.ч. і після стерілізуючої гання, збільшити термін зберігання. фільтрації та розливу здійснюють ліофільне висуПоставлена задача вирішується тим, що у вішування. домому способі одержання ліпосомальної форми Залежність фізико-хімічних властивостей препротипухлинного препарату, що включає висушупарату від співвідношень фосфатидилхолін: дивання фосфоліпідів у вакуумі, емульгування їх у фосфатидилгліцерин, препарат платини: фосфоводному середовищі, що містить препарат платиліпіди та препарат платини: лактоза та технічний ни, гомогенізацію ліпідної емульсії, стерилізуючу результат, що отриманий за їх допомогою, навефільтрацію та розлив, згідно з винаходом, фосфодені в табл.1-3. ліпіди містять фосфатидилхолін і дифосфатидилТаблиця 1 Залежність фізико-хімічних властивостей препаратувід співвідношення фосфатидилхолін : дифосфатидилгліцерин Показники Токсичність препарату LD50, мг/кг рН Включення препарату платини до ліпосоми, % Співвідношення фосфатидилхолін : дифосфатидилгліцерин, мас. % 99,5:0,5 99:1 98,5:1,5 98:2 97,5:2,5 64 74 77 75 60 6,85 6,8 6,8 6,7 6,0 78 90 Як видно з даних, наведених у табл.1, оптимальним є співвідношення фосфатидилхолін: дифосфатидилгліцерин (99:1)-(98:2)мас. %, тому що вміст в ліпосомі кислого фосфоліпідудифосфатидилгліцерину у кількості 1-2мас. % у присутності препарату платини забезпечує внутрішньо-ліпосомальну стабільність, що сприяє максимальному включенню препарату платини до ліпосоми та зниженню токсичності препарату. Використання концентрацій дифосфатидилгліцерину 91,3 92,0 82 менш 1мас. % виявляється недостатнім для повноти включення препарату платини до ліпосоми, що призводить до присутності в препараті вільного препарату платини та збільшенню токсичності. Збільшення концентрації дифосфатидилгліцерину вище 2мас. % знижує рН препарату, що також знижує включення препарату платини до ліпосоми та підвищує токсичність препарату через присутність в ньому вільного препарату платини. Таблиця 2 Залежність фізико-хімічних властивостейпрепарату від співвідношення препарат платини: фосфоліпіди Показники Включення препарату платини до ліпосоми, % Індекс окислювання Розмір ліпосом, нм Токсичність препарату LD50, мг/кг Співвідношення препарат платини: фосфоліпіди, мас. ч. 1:10 1:15 1:30 1:45 1:50 83,5 90,6 92,0 91,3 91,9 0,17 0,24 0,24 0,27 0,33 140 160 160 160 194 60 74 73,1 74,2 74,4 Як видно з даних, наведених у табл.2, оптимальним є співвідношення препарат платини: фосфоліпіди 1:(15-45) мас. ч.. Використання співвідношень менш зазначених призводить до неповного включення препарату платини до ліпосоми, що значно підвищує токсичність препарату через присутність в ньому вільного препарату платини. Збільшення співвідношення призводить до збільшення розміру ліпосом, що перешкоджає процесу стерилізуючої фільтрації і збільшує індекс окислювання через необхідність здійснювати більш тривалу гомогенізацію ліпідної емульсії. Таблиця 3 Залежність фізико-хімічних властивостейліофілізованого препарату від співвідношення препарат платини: лактоза Показники Співвідношення препарат платини: лактоза, мас.ч. 1:10 1:15 1:25 1:35 1:40 Розмір ліпосом ліофілі290 160 156 150 165 зованого препарату, нм Індекс окислювання 0,176 0,198 0,21 0,26 0,32 5 Як видно з даних, наведених у табл.3, оптимальним є співвідношення препарат платини: лактоза 1:(15-35)мас. ч. Використання співвідношень менш зазначених призводить до збільшення розміру ліпосом у ліофілізованому препараті, що небажано при внутрішньовенному введенні препара 66633 6 ту. Збільшення співвідношень призводить до збільшення індексу окислювання через необхідність здійснювати більш тривалу гомогенізацію ліпідної емульсії. Переваги способу, що заявляється, перед способом за прототипом наведені в табл.4. Таблиця 4 Характеристики препарату в залежності від способу одержання Показники Включення препарату платини до ліпосоми, % Індекс окислювання Токсичність препарату LD50, мг/кг Термін зберігання препарату, місяців Таким чином, спосіб, що заявляється, має суттєві переваги перед способом за прототипом: 1. Використання зазначених співвідношень препарат платини: фосфоліпіди та препарат платини: лактоза дозволяють оптимізувати процес одержання ліпосомального препарату через збільшення включення препарату платини до ліпосоми, зниженню індексу окислювання та токсичності препарату. 2. Уведення до препарату дифосфатидилгліцерину у кількості 1-2мас. % дозволяє стабілізувати ліпосому, що вміщує препарат платини, через надавання їй негативного заряду (дифосфатидилгліцерин - кислий негативно заряджений ліпід), що сприяє максимальному включенню препарату платини до ліпосоми та зниженню токсичності препарату. 3. Зазначенні співвідношення препарат платини: лактоза дозволяють провадити ліофільне висушування препарату, що дає можливість випускати протипухлинний препарат у вигляді ліофілізованої маси для ін'єкцій (на відміну від способу - прототипу, де препарат отримують у вигляді ліпідної емульсії), що сприяє стабільності фізико-хімічних властивостей препарату у процесі зберігання та збільшує термін зберігання препарату до 12 місяців, зниженню токсичності ліофілізованого препарату у порівнянні з рідким препаратом, у якому через нестабільність ліпосом з'являється високотоксичний препарат платини. 4. Стабільність фізико-хімічних властивостей препарату у процесі зберігання та збільшення терміну зберігання препарату забезпечується також низьким індексом окислювання. 5. Дозволяє одержати досконаліший протипухлинний препарат з низькою токсичністю для непухлинних клітин хворого, що дає можливість застосування препарату навіть в тих випадках, коли його використання обмежено через токсичність для хворого , наприклад, нефротоксичність. Можливість здійснення винаходу ілюструється наступними прикладами: Приклад 1 Суміш спиртових розчинів фосфатидилхоліну яєчного жовтка, що містить 222,5г фосфатидилхоліну, і дифосфатидилгліцерину великої рогатої худоби, що містить 2,25г дифосфатидилгліцерину, висушують на роторному випарнику у вакуумі при Спосіб, що заявляється 90,6-92,0 0,20-0,27 73-77 12 Спосіб за прототипом 85-89 0,30-0,34 64-68 6 температурі 35-37°С до одержання тонкої ліпідної плівки. Одержану плівку фосфоліпідів емульгують у 29,437л водного розчину, що містить 15г препарату платини (цисплатина, карбоплатина). Суміш перемішують протягом 1год до отримання однорідної ліпідної емульсії. Емульсію піддають гомогенізації у реакторі гомогенізатора високого тиску " - Laval" при тиску 5,3 107-6,4 107Па та температурі 35-40°С протягом 3-5хв (І цикл). Потім протягом 5хв охолоджують суміш до температури 3335°С. Після здійснення 5 циклів додають 0,563л 40% розчину стерильної апірогенної лактози ( кількість лактози становить 222г). Здійснюють ще 2-3 цикла гомогенізації до досягнення оптичної щільності не більше 0,15 при 540нм, після чого процес припиняють. Отриману емульсію піддають стерилізуючій фільтрації на установці “Millipore” через мембранні фільтри з розміром пор спочатку 0,65мкм, а потім - 0,22мкм та дозовано розливають в стерильних умовах у скляні флакони по 20мл. Препарат у флаконах піддають заморожуванню при температурі (-50)-(-70)°С і здійснюють ліофільне висушування. Флакони з ліпосомальним продуктом герметизують в атмосфері інертного газу. Форма випуску: ліофілізована маса для ін'єкцій. Індекс окислювання - 0,21. Термін зберігання препарату без зміни фізико-хімічних властивостей не менш 12 місяців. Токсичність препарату LD50 73мг/кг. Включення препарату платини до ліпосоми 90,6%. Приклад 2 Суміш спиртових розчинів фосфатидилхоліну яєчного жовтка, що містить 443,25г фосфатидилхоліну, і дифосфатидилгліцерину великої рогатої худоби, що містить 6,75г дифосфатидилгліцерину, висушують на роторному випарнику у вакуумі при температурі 35-37°С до одержання тонкої ліпідної плівки. Одержану плівку фосфоліпідів емульгують у 29,064л водного розчину, що містить 15г препарату платини (цисплатина, карбоплатина). Суміш перемішують протягом 1год до отримання однорідної ліпідної емульсії. Емульсію піддають гомогенізації у реакторі гомогенізатора високого тиску " - Laval" при тиску 5,3 107-6,4 107Па та температурі 35-40°С протягом 3-5хв (І цикл). Потім протягом 5 хв охолоджують суміш до температури 3335°С. Після здійснення 5 циклів додають 0,936л 7 66633 8 40% розчину стерильної апірогенної лактози ( кільтягом 5хв охолоджують суміш до температури 33кість лактози становить 375г). Здійснюють ще 2-3 35°С. Після здійснення 5 циклів додають 1,312л цикла гомогенізації до досягнення оптичної щіль40% розчину стерильної апірогенної лактози (кільності не більше 0,15 при 540нм, після чого процес кість лактози становить 525г). Здійснюють ще 2-3 припиняють. Отриману емульсію піддають стерицикла гомогенізації до досягнення оптичної щільлізуючій фільтрації на установці „Millipore” через ності не більше 0,15 при 540нм, після чого процес мембранні фільтри з розміром пор спочатку припиняють. Отриману емульсію піддають стери0,65мкм, а потім - 0,22мкм та дозовано розливалізуючій фільтрації на установці „Millipore" через ють в стерильних умовах у скляні флакони по мембранні фільтри з розміром пор спочатку 20мл. Препарат у флаконах піддають заморожу0,65мкм, а потім - 0,22мкм та дозовано розливаванню при температурі (-50)-(-70)°С і здійснюють ють в стерильних умовах у скляні флакони по ліофільне висушування. Флакони з ліпосомальним 20мл. Препарат у флаконах піддають заморожупродуктом герметизують в атмосфері інертного ванню при температурі (-50)-(-70)°С і здійснюють газу. Форма випуску: ліофілізована маса для ін'єкліофільне висушування. Флакони з ліпосомальним цій. Індекс окислювання - 0,24. Термін зберігання продуктом герметизують в атмосфері інертного препарату без зміни фізико-хімічних властивостей газу. Форма випуску: ліофілізована маса для ін'єкне менш 12 місяців. Токсичність препарату LD50 цій. Індекс окислювання - 0,27. Термін зберігання 75мг/кг. Включення препарату платини до ліпосопрепарату без зміни фізико-хімічних властивостей ми 91,0%. не менш 12 місяців. Токсичність препарату LD50 Приклад 3 77мг/кг. Включення препарату платини до ліпосоСуміш спиртових розчинів фосфатидилхоліну ми 92,0%. яєчного жовтка, що містить 661,5г фосфатидилхоЗ огляду на викладене вище і з урахуванням ліну, і дифосфатидилгліцерину великої рогатої розкритого причинно-наслідкового зв'язку між сухудоби, що містить 13,5г дифосфатидилгліцерину, купністю ознак винаходу, що заявляється, та техвисушують на роторному випарнику у вакуумі при нічним результатом, що отриманий за їх допомотемпературі 35-37°С до одержання тонкої ліпідної гою, можна стверджувати, що задача, поставлена плівки. Одержану плівку фосфоліпідів емульгують в основу створеного способу одержання ліпосоу 28,688л водного розчину, що містить 15г препамальної форми протипухлинного препарату, цілрату платини (цисплатина, карбоплатина). Суміш ком виконана, бо такий спосіб дозволяє отримати перемішують протягом 1год до отримання одноріпрепарат з низькою токсичністю, низьким індексом дної ліпідної емульсії. Емульсію піддають гомогеокислювання, стабільними фізико-хімічними власнізації у реакторі гомогенізатора високого тиску тивостями у процесі зберігання, збільшити термін зберігання. " - Laval" при тиску 5,3 107-6,4 107 Па та температурі 35-40°С протягом 3-5хв (І цикл). Потім про Комп’ютерна верстка M. Клюкін Підписне Тираж 26 прим. Міністерство освіти і науки України Державний департамент інтелектуальної власності, вул. Урицького, 45, м. Київ, МСП, 03680, Україна ДП “Український інститут промислової власності”, вул. Глазунова, 1, м. Київ – 42, 01601