Спосіб одержання засобу з антимікробною активністю з трави деревію звичайного

Реферат: Спосіб одержання засобу з антимікробною активністю включає екстракцію трави деревію спиртом етиловим, фільтрацію, упарювання, очищення та сушку. UA 68825 U (12) UA 68825 U UA 68825 U 5 10 15 20 25 30 35 40 45 50 55 60 Корисна модель належить до хіміко-фармацевтичної галузі, зокрема до одержання з трави деревію звичайного (Achillea millefolium) біологічно активних засобів рослинного походження з антимікробною активністю. Відомий спосіб одержання хлорофіліпту (Пат.UА № 5242, А61К 35/78. за №2753048/SU; Опубл. 28.12.94). Зазначений спосіб полягає у екстракції листя евкаліпту прутовидного 96 % спиртом в співвідношенні 1:12, упарюванні екстракту до 1/20 частини первинного об'єму, розведенні залишку, що утворився, у 3-х кратною кількістю води, очистці розчином сірчанокислої сірки у співвідношенні 9:1, екстрагуванні цільового продукту бензолом в співвідношенні 3:5, промиванні отриманого бензольного витяг промивають рівною кількістю води, упарюванні під вакуумом, обробці залишку 96 % спиртом в співвідношенні 1:2 та висушуванні. Недоліками способу можна вважати використання імпортної сировини - листя евкаліпту, очистку з використанням гемотоксичного розчинника бензолу, крім того, додаткового використання 96 % спирту для очистки, що ускладнює, здорожує та робить більш небезпечним процес одержання екстракту. В основу корисної моделі поставлено задачу удосконалення способу одержання засобу рослинного походження з антимікробною активністю, який передбачає спиртову екстракцію трави деревію звичайного та подальшу очистку одержаного екстракту, що дозволить менше використовувати імпортну сировину - листя евкаліпту та підвищити ефективність терапії інфекційних захворювань. Поставлена задача вирішується таким чином, що спосіб одержання засобу з антимікробною активністю включає екстракцію рослинної сировини 96 % спиртом, фільтрацію, упарювання, очищення та сушку. Згідно з корисною моделлю, як рослинну сировину використовують траву деревію звичайного, екстракцію проводять при співвідношенні сировини до екстрагенту 1:8-1:20, фільтрацію та упарювання одержаного рідкого екстракту до 1/20-1/22 попереднього об'єму, очищення проводять шляхом розчинення в 3-х кратній кількості гексану та додавання 4 % розчину цинку сульфату, упарювання та висушування. Експериментальним шляхом встановлено, що ефективним при здійсненні заявленого способу є використання співвідношення сировини до екстрагенту як 1:8-1:20. При цьому, якщо співвідношення менше 1:8, не забезпечується достатня екстракція БАР, що приводить до зниження фармакологічної активності та виходу цільового продукту. Навпаки, якщо співвідношення більше 1:20, це веде до ускладнення та подовження технологічного процесу, час упарювання та енерговитрати значно зростають. Оптимальне співвідношення 1:8-1:12 тому, що забезпечується достатня екстракція БАР, час упарювання мінімальний та дозволяє одержати екстракт на стандартному обладнанні. При цьому з сировини екстрагують хлорофіли, терпеноїди, флавоноїди, гідроксикоричні кислоти та інші фенольні сполуки. Згідно з заявленим способом упарювання проводять до 1/20-1/22 первинного об'єму. При більшому упарюванні залишок має більшу в'язкість та зменшується його текучість, що ускладнює роботу з екстрактом та збільшує його втрати в процесі виробництва. При меншому упарюванні значно збільшується витрата реагентів та розчинників в процесі очистки. Очистку екстракту в процесі здійснення заявленого способу проводять шляхом розчинення сконцентрованого екстракту в 3-х кратній кількості гексану, при додаванні рівної кількості 4 % розчину цинку сульфату та перемішуванні протягом 4-8 годин доки рН водного шару не досягне 2-4. Далі гексановий шар тричі промивають рівною кількістю води та сушать, наприклад, в вакуум-циркуляторному апараті при зниженому тиску, до густого екстракту та при необхідності доводять спиртом до рідкого. Після очистки екстракт містить терпенові сполуки та порфірини. Для вибору кислоти Льюїса в технології очистки первинного спиртового екстракту з трави деревії звичайного було проведено вивчення антимікробної активності екстрактів, одержаних за допомогою розчинів міді, цинку, заліза, магнію та кальцію сульфатів. Модифіковані екстракти з трави деревію звичайного, в технології яких використовували розчини міді та цинку сульфатів, та хлорофіліпт виявляють антимікробну активність майже на одному рівні по відношенню до Staphylococcus aureus, Escherichia coli, Pseudomonas aeruginosa, Streptococcus pyogenes та Candida albicans. При цьому цинковий екстракт більш активний, ніж мідний, а екстракти,в технології яких використовували розчини сульфатів заліза, кальцію та магнію, майже не виявляли антимікробну активність, тому для подальшої очистки використовують розчин цинку сульфату. Заявлений спосіб забезпечує одержання екстракту з трави деревію звичайного у вигляді густої, в'язкої, темно-зеленої маси, яка при збереженні висихає. Заявлений спосіб здійснюють шляхом екстракції подрібненої трави деревію звичайного 96 % спиртом етиловим при співвідношенні сировина:екстрагент - 1:8-1:20, фільтрації одержаного 1 UA 68825 U 5 10 15 20 25 30 35 40 45 50 екстракту та упарюванні до 1/20-1/22 попереднього об'єму, отриманий кубовий залишок розчиняють у 3-х кратній кількості гексану, для очистки додають рівну кількість 4 % розчину сульфату цинку, тричі промивають гексановий шар рівною кількістю води та упарюють під вакуумом до густого екстракту. Екстракт являє собою густу, в'язку масу темно-зеленого кольору, зі специфічним запахом. Вихід готового продукту 8-12 %. Корисна модель ілюструється прикладами. Приклад 1. 1 кг подрібненого шляхом вальцювання до розмірів часток 2,5-3,0 мм сухої трави деревію звичайного екстрагували 3 л 96 % етилового спирту протягом 5 годин, екстракцію проводили тричі. Одержані екстракти об'єднували (7,3 л), упарювали при температурі 85 °С під вакуумом у вакуум-циркуляційному апараті при розрідженні 690 мм рт.ст. до об'єму залишку 0,35 л. Кубовий залишок розчиняли в 1,0 літрах гексану, додавали 1,3 л 4 % розчину сульфату цинку та перемішували протягом 5 годин до тих рН 3,3 водного шару. Далі гексановий шар тричі промивали рівною кількістю води очищенної (3,9 л), водний шар відокремлювали, а гексановий шар упарювали під вакуумом. Вихід готового продукту - 8,3 %. Приклад 2. Вивчення антибактеріальної активності екстракту, одержаного заявленим способом проводили методом дифузії в агар та методом послідовних розведень у рідкому живильному середовищі (Доклінічні дослідження лікарських засобів: Метод рекоменд. / За ред. чл.-кор. АМН України О.В. Стефанова. - К.: Здоров'я, 2002. - С. 79-95, 292-306). Відповідно до рекомендацій ВООЗ для оцінки активності препарату використовували рефренс-штамы Staphylococcus aureus АТСС 25923, Staphylococcus aureus 6538 АТСС, Escherichia coli АТСС 25922, Proteus vulgaris NCTC 4636, Pseudomonas aeruginosa ATCC 27853, Pseudomonas aeruginosa 9027 ATCC, Basillus subtilis ATCC 6633, Candida albicans 885/653 ATCC. Встановлено, що екстракт виявляє активність по відношенню до штамів Staphylococcus aureus, Escherichia coli, Pseudomonas aeruginosa, Streptococcus pyogenes та Candida albicans, тобто екстракт виявляє антимікробну активність по відношенню до грам-позитивних та грамнегативних бактерій та грибів. Найбільшу активність спиртовий розчин екстракту виявляє у концентрації від 0,25 % до 1,5 %. Таким чином, заявлено новий спосіб одержання засобу з антимікробною активністю, який відзначається рядом переваг: 1) простота виконання та можливість здійснення на стандартному обладнанні в промислових умовах України; 2) використання як сировину траву деревію звичайного, який зростає по всій території України, що дозволить використовувати вітчизняну сировину; 3) в процесі очистки відмовились від використання токсичного розчинника бензола та проведено його заміну на гексан, що робить технологію більш безпечною; 4) в процесі очистки використовують розчин цинку сульфат замість більш токсичних міді сульфату та сірчанокислої сірки, що робить технологію більш безпечною; 5) при промисловому використанні заявленого способу зменшується використання спирту етилового та оптимізовано час технологічного процесу, що дозволить фармацевтичним підприємствам підвищити економічну ефективність виробництва; 6) перспективність використання одержаного екстракту як лікарської субстанції для одержання різних лікарських форм; 7) тривалий термін зберігання засобу, одержаного заявленим способом. ФОРМУЛА КОРИСНОЇ МОДЕЛІ Спосіб одержання засобу з антимікробною активністю, що включає екстракцію рослинної сировини 96 % спиртом етиловим, фільтрацію, упарювання, очищення та сушку, який відрізняється тим, що як рослинну сировину використовують траву деревію звичайного, екстракцію проводять при співвідношенні сировини до екстрагенту як 1:8-1:20, фільтрацію та упарювання одержаного рідкого екстракту до 1/20-1/22 попереднього об'єму, очищення проводять шляхом розчинення в 3-х кратній кількості гексану та додавання 4 % розчину цинку сульфату. Комп’ютерна верстка І. Скворцова Державна служба інтелектуальної власності України, вул. Урицького, 45, м. Київ, МСП, 03680, Україна ДП “Український інститут промислової власності”, вул. Глазунова, 1, м. Київ – 42, 01601 2