Спосіб визначення біологічної активності лектинів та лектинвмісних екстрактів

Реферат: UA 72014 U UA 72014 U 5 10 15 20 Корисна модель належить до галузі біології, медицини і сільського господарства, а саме до способів оцінки біологічної активності рослинних екстрактів шляхом біотестування, і може бути використана під час вивчення фізіологічних процесів, скринінгу рослин, а також імунології. Відомий спосіб біотестування лектинів та лектинвмісних екстрактів, коли серію досліджуваних речовин і екстрактів готують при розведенні в 0,9 % розчині NaCl та пророщують на них паростки крес-салату [див. Застосування біотестування для оцінки біологічної активності лектинів та лектинвмісних екстрактів / Поспелова Г.Д, Поспелов С.В. Пат. України № 13551, заявка u200507653, опубл. 17.04.2006, бюл. № 4]. Незважаючи на ефективність відомого способу, при дослідженні не враховується, що фізіологічний розчин (0,9 % NaCl) негативно впливає на ріст паростків крес-салату, що знижує достовірність дослідження. Задача корисної моделі - підвищення достовірності біотестування. Задача вирішується за рахунок того, що максимальна концентрація хлористого натрію становить 0,4 %. Під час проведення лабораторних досліджень було встановлено, що 0,9 % NaCl, який використовується при вивченні лектинів і лектинвмісних екстрактів, гальмує ріст паростків крессалату. З даних, наведених в таблиці 1, видно, що NaCl в концентраціях 0,9-0,4 % негативно впливає на ріст тест-об'єкта. Якщо в контролі (дистильована вода) значення становило 1,08 мм, то при пророщуванні крес-салату на 0,9 % NaCl довжина зменшилась на 0,4 мм і становила 0,68 мм. Викладена закономірність зберігалась до концентрації NaCl 0,4 %. Статистичний аналіз підтверджує отриманні дані. Таким чином, при проведенні досліджень концентрація розчину NaCl повинна бути не більш як 0,4 %, оскільки більш висока концентрація може негативно вплинути на точність експерименту. 25 Таблиця 1 Біотестування залежно від концентрації NaCl Концентрації NaCl Boдa, dst 0,9 % 0,8 % 0,7 % 0,6 % 0,5 % 0,4 % 0,3 % 0,2 % 0,1 % Показники Довжина паростків 1,08 0,68 0,71 0,79 0,87 0,95 1,02 1,04 1,06 1,08 крес-салату, мм T0,01=2,98 4,5 4,6 3,41 3,21 3,05 3,05 2,1 2,1 0,9 30 35 40 Спосіб здійснюється наступним чином. Розведення або екстракцію досліджуваних речовин проводять 0,9 % NaCl в співвідношенні 1:10 (1 грам сировини на 10 мл NaCl). З метою біотестування екстракт розводять дистильованою водою до остаточної концентрації NaCl не більше 0,4 %. Даний екстракт або розчин використовують для біотестування. Для цього згідно зі схемою досліду екстракт або розчин розводять розчином NaCl таким чином, щоб концентрація в усіх розведеннях була однаковою. Проросле насіння, корінці якого досягли довжини 1-3 мм, по 20-25 штук розміщують в чашці Петрі з досліджуваними розчинами або екстрактами. Паралельно закладають контрольну чашку Петрі з дистильованою водою. На наступну добу вимірюють довжину корінців в досліді і в контролі, вираховують середнє, і результати досліду виражають у відсотках до приросту коренів контрольних проростків. Про алелопатичну активність сполук судять за стимулюванням або інгібуванням тест-системи. Приклад 1. Були проведені дослідження біологічної активності лектинвмісних екстрактів з листків ехінацеї блідої, які свідчать про те, що довжина корінців крес-салату суттєво залежить від концентрації NaCl. З даних, які наведені у таблиці 2, видно, що при застосуванні концентрації 0,9 % процент приросту тест-об'єкта був значно нижчим порівняно з використанням хлористого натрію в концентрації 0,09 %, що свідчить про більшу достовірність отриманих даних. 1 UA 72014 U Таблиця 2 Біотестування лектинвмісних екстрактів з листків ехінацеї блідої залежно від концентрації NaCl Концентрація 0,01 % 0,001 % 0,0001 % 0,00001 % 0,000001 % 0,0000001 % % приросту коренів крес-салату до контролю 0,9 %NaCl 0,09 % NaCl -15,64 -1,82 -7,8 +4,35 -3,33 +10,14 +5,17 +15,09 +0,7 +7,97 -4,8 +0,6 Приклад 2. Було проведено біотестування лектинів квасолі ( Таблиця 3 Біотестування лектинів квасолі залежно від концентрації NaCl Концентрація 0,01 % 0,001 % 0,0001 % 0,00001 % 0,000001 % 0,0000001 % % приросту коренів крес-салату до контролю 0,9 %NaCl 0,09 %NaCl -52,1 -45,1 +12,6 +16,2 +1,5 +9,5 +5,2 +6,1 +6,4 +5,6 +4,2 +2,0 5 ФОРМУЛА КОРИСНОЇ МОДЕЛІ 10 Спосіб визначення біологічної активності лектинів та лектинвмісних екстрактів шляхом їх послідовного розведення 0,9 % розчином хлористого натрію і проведення біотестування на паростках крес-салату, який відрізняється тим, що максимальна концентрація хлористого натрію становить 0,4 %. Комп’ютерна верстка Г. Паяльніков Державна служба інтелектуальної власності України, вул. Урицького, 45, м. Київ, МСП, 03680, Україна ДП “Український інститут промислової власності”, вул. Глазунова, 1, м. Київ – 42, 01601 2