Тест-система імуноферментна для кількісного визначення антитіл класу igg до вірусу краснухи уніфікована “dia-rubella-igg-u”

Реферат: Тест-система імуноферментна для кількісного визначення антитіл класу IgG вірусу краснухи "DIA-Rubella-IgG-u", в якій на полістироловий планшет сорбовані антигени вірусу краснухи, а як кон'югат використовуються антитіла проти імуноглобулінів класу IgG людини. Застосовуються однокомпонентний розчин хромогену та два позитивних контролі (високо- і низькотитражних), відкаліброваних відносно 1-го Міжнародного стандарту ВООЗ - Anti-Rubella immunoglobulin, Human, RUBI-1-94 (NIBSC) для кількісного розрахунку наявності антитіл проти вірусу краснухи в досліджуваних сироватках. UA 72427 U (12) UA 72427 U UA 72427 U 5 10 15 20 25 30 35 40 45 Корисна модель належить до біотехнології, імунохімії та медицини і може бути використана для кількісного аналізу сироватки або плазми крові людини на наявність антитіл класу IgG до вірусу краснухи. Вірус краснухи (Rubella virus) належить до родини Togaviridae і є РНК-вмісним вірусом розміром 50-70 нм в діаметрі. Механізм передачі збудника повітряно-крапельний, що обумовлює швидке розповсюдження захворювання особливо в дитячих колективах. Вірус викликає широко розповсюджене захворювання зі слабковираженими симптомами, що характеризується лихоманкою, лімфаденопатією, плямисто-вузелковою висипкою. Однак може перебігати також в безсимптомній формі, що ускладнює клінічну діагностику краснухи. В дитячому віці це захворювання звичайно не дає ускладнень. При первинному інфікуванні в першому триместрі вагітності існує значний ризик серйозних пошкоджень плоду, тому вагітні, що не мають IgG антитіл до вірусу краснухи, є сприйнятливими до інфекції та належать до групи ризику. Для оцінки рівня захисного імунітету проти краснухи найбільш широкого розповсюдження набув метод імуноферментного аналізу. Наявність в крові специфічних IgG антитіл до вірусу краснухи є показником минулої інфекції або проведеної вакцинації. У пацієнтів з гострою інфекцією в динаміці спостерігається збільшення рівня специфічних IgG. Відома тест-система для виявлення антитіл проти вірусу краснухи в сироватках і плазмі крові людини при діагностиці інфекції [1]. В основі тест-системи лежать антигени вірусу краснухи, використані в складі імуносорбенту, а як кон'югат застосовують антилюдські антитіла, зв'язані з пероксидазою. Суть корисної моделі в створенні імуноферментної тест-систем для кількісного аналізу сироватки або плазми крові людини на наявність антитіл класу IgG до вірусу краснухи. Поставлена задача вирішується шляхом використання імуносорбенту з сорбованими антигенами вірусу краснухи, пероксидазного кон'югату моноклональних антитіл до імуноглобулінів класу IgG людини, однокомпонентного розчину хромогену та двох позитивних контролів (високо- і низькотитражних), відкаліброваних відносно 1-го Міжнародного стандарту ВООЗ - Anti-Rubella immunoglobulin, Human, RUBI-1-94 (NIBSC). Приклад 1. Визначення наявності антитіл до вірусу краснухи в сироватці крові хворої З., 1999 року народження. Визначення проводять за відомою методикою [2] твердофазного імуноферментного аналізу. При внесенні в лунки по 100 мкл попередньо розведених 1:50 зразків досліджуваних сироваток антитіла класу IgG до вірусу краснухи, у випадку їх наявності, зв'язуються з антигенами вірусу, сорбованими на твердій фазі, утворюючи комплекси антиген-антитіло. Утворені комплекси виявляють за допомогою пероксидазного кон'югату моноклональних антитіл до імуноглобулінів класу IgG людини. Після відмивання незв'язаних компонентів в лунки додають розчин однокомпонентного хромогену. Пероксидазну реакцію зупиняють, додаючи стоп-реагент, і вимірюють оптичну густину суміші у лунках при довжині хвилі 450/620 нм, яка пропорційна концентрації специфічних IgG антитіл до вірусу краснухи у зразках сироваток або плазми крові. Концентрацію IgG, специфічних до вірусу краснухи, у зразку виражають в Міжнародних одиницях (МО). Для отримання кількісного результату в МО/мл будують калібрувальну криву. Для чого відкладають по осі Y значення ОГ контролів: негативного та двох позитивних (високота низькотитражного), а на осі X відповідні до них концентрації - 0, 10, 100 МО/мл. Використовуючи побудовану криву, визначають концентрацію IgG в МО/мл для кожного досліджуваного зразка згідно з отриманим значенням оптичної густини. Результат кожного аналізу оцінюють наступним чином: >12 МО/мл