Тест-система імуноферментна для якісного та напівкількісного визначення антитіл класу igg до цитомегаловірусу людини (dia-cmv-igg-u)

Реферат: Тест-система імуноферментна для якісного та напівкількісного визначення антитіл класу IgG до цитомегаловірусу людини "DIA-CMV-u", в якій на полістироловий планшет сорбовані рекомбінантні антигени, а як кон'югат використовуються антитіла проти імуноглобулінів класу IgG людини. Імуносорбентом є сорбовані до полістиролу рекомбінантні поліпептиди антигени p150-HIS-6 та р28 цитомегаловірусу і застосовується пероксидазний кон'югат моноклональних антитіл до імуноглобулінів класу G людини, який виявляють за допомогою однокомпонентного розчину хромогену, а для оцінки зміни рівня антитіл в динаміці результат аналізу виражають в одиницях DIA Units (DU). UA 72429 U (12) UA 72429 U UA 72429 U 5 10 15 20 25 30 35 40 45 50 Корисна модель належить до біотехнології, імунохімії та медицини і може бути використана для якісного та напівкількісного аналізу сироватки або плазми крові людини на наявність антитіл класу IgG до цитомегаловірусу. Цитомегаловірусна інфекція - вірусне захворювання, що характеризується різноманітними клінічними проявами з переважним ураженням гематопоетичної системи. Збудником є ДНКвмісний вірус (150-200 нм) - цитомегаловірус (CMV), який належить до родини Herpesviridae. Інфекція переважно протікає у вигляді безсимптомного носійства і клінічно проявляється лише на фоні первинного або вторинного імунодефіциту. Лабораторна діагностика CMV базується на виявленні специфічних антитіл (IgG та IgM) в сироватці крові або інших біологічних рідинах поряд з різними методами виявлення антигену та ДНК вірусу. Серед серологічних методів діагностики CMV найбільш поширеним є метод імуноферментного аналізу (ІФА), який характеризується високою чутливістю та специфічністю. Виявлення в динаміці специфічних до CMV IgG методом ІФА може дати найбільш переконливі докази первинного інфікування або реактивації цитомегаловірусної інфекції. Відома тест-система для виявлення антитіл проти CMV у сироватках і плазмі крові людини при діагностиці цитомегаловірусної інфекції [1]. В основі тест-системи лежать антигени вірусу або рекомбінантні поліпептиди аналоги антигенів CMV, використані в складі імуносорбенту, а як кон'югат застосовують козячі антилюдські антитіла, зв'язані з пероксидазою. Задачею корисної моделі є створення імуноферментної тест-системи для якісного та напівкількісного аналізу сироватки або плазми крові людини на наявність антитіл класу IgG до цитомегаловірусу "DIA-CMV-IgG-u". Поставлена задача вирішується шляхом використання імуносорбенту з сорбованим рекомбінантним антигеном pl50-HIS-6 та р28 CMV. При внесенні в лунки зразків досліджуваних сироваток антитіла класу IgG до цитомегаловірусу, у випадку їх наявності, зв'язуються з рекомбінантними антигенами цитомегаловірусу, сорбованими на твердій фазі, утворюючи комплекси антиген-антитіло, які виявляються за допомогою пероксидазного кон'югату моноклональних антитіл до імуноглобулінів класу IgG людини. Після відмивання незв'язаних компонентів в лунки додають розчин однокомпонентного проявника. Пероксидазну реакцію зупиняють, додаючи стоп-реагент, і вимірюють оптичну густину суміші у лунках при довжині хвилі 450/620 нм, яка пропорційна концентрації специфічних IgG антитіл до цитомегаловірусу у зразках сироваток або плазми крові. Для оцінки зміни рівня антитіл в динаміці результат аналізу виражають в одиницях DIA Units (DU). Приклад 1. Визначення наявності антитіл до CMV в сироватці крові хворої С, 1995 року народження. Визначення проводять за відомою методикою [2] твердофазного імуноферментного аналізу. Для цього в лунки імуносорбенту з фіксованими на ньому рекомбінантними поліпептидами аналогами-антигенів р150 CMV вносять в лунки по 90 мкл розчину для розведення сироваток, а потім по 10 мкл досліджуваних сироваток та контролів. Накривають планшет кришкою та інкубують при температурі (37±2)°С протягом 60 хв. Після закінчення інкубації промивають планшет 4 рази розчином для промивання і вносять в лунки по 100 мкл кон'югату. Знову інкубують планшет, але вже при кімнатній температурі (18-25)°С протягом 30 хвилин. Промивають планшет 6 разів розчином для промивання і вносять в лунки по 100 мкл однокомпонентного розчину хромогену ТМБ. Накривають планшет кришкою та інкубують при температурі (18-25)°С в темному місці протягом 30 хвилин. Вносять в лунки по 100 мкл стопреагенту для зупинення кольорової реакції (в тій же послідовності внесення що й ТМБ). Не більше як через 5 хв. після зупинення кольорової реакції визначають оптичну густину (ОГ) в лунках у двохвильовому режимі (450 нм відносно 620 нм). Для обліку результатів розраховують середнє значення ОГ негативного контролю - НКсер і граничне значення (ГЗ) по формулі: ГЗ = НКсер + 0,2. Результат аналізу вважається негативним, якщо ОГ досліджуваного зразка менше ГЗ. Результат аналізу вважається позитивним, якщо ОГ досліджуваного зразка більше ГЗ. Для оцінки зміни рівня антитіл в динаміці результат аналізу оцінюється в одиницях DIA Units (DU) за формулою: DU = (ОГ сироватки  10): ГЗ Результат кожного аналізу оцінюють наступним чином: >10DU