Тест-система імуноферментна “dia-hbcore-igg-igm” для визначення антитіл класів igg ta igm до корового антигену вірусу гепатиту в

Реферат: Тест-система імуноферментна для визначення антитіл класів IgG та IgM до корового білка вірусу гепатиту В, в якій використовується імуносорбент, в лунки якого внесено рекомбінантний поліпептид core - аналог антигену вірусу гепатиту В і кон'югат. В складі кон'югатів використовуються моноклональні антитіла проти IgG та IgM людини, мічені ферментом, а як проявник - однокомпонентний розчин хромогену. UA 72506 U (12) UA 72506 U UA 72506 U 5 10 15 20 25 30 35 40 45 50 55 Корисна модель належить до біотехнології, імунохімії та медицини і може бути використана для виявлення антитіл класів IgG та IgM до корового білка вірусу гепатиту В (ВГВ) у сироватці або плазмі крові людини методом імуноферментного аналізу. Гепатит В (ГВ) залишається однією з найпоширеніших інфекційних хвороб і важливою проблемою охорони здоров'я багатьох країн. ГВ характеризується не тільки широким розповсюдженням, високим рівнем захворюваності, нерідко важким перебігом, але й схильністю до формування хронічних уражень печінки. Труднощі в боротьбі з ГВ значною мірою визначаються існуванням при цій інфекції хронічних вірусоносіїв, число яких у світі досягає 350 млн. чоловік. При цьому поглиблене обстеження таких осіб доводить, що у більшості з них присутні ознаки хронічного ГВ. Приблизно 80 % первинних ракових захворювань печінки пов'язують з ВГВ. Антитіла (AT) проти білка НВcorе - це найбільш ранній антитільний маркер ВГВ-інфекції, що може бути виявлений в інкубаційному періоді, ще до підвищення активності АлАТ. Анти-НВсоrе AT класу IgM мають важливе діагностичне значення і вказують на активність інфекційного процесу. У фазу так званого "вікна" - після зникнення поверхневого білка HBsAg ВГВ і до появи антитіл проти нього - антитіла проти НВсоrе стають єдиним маркером ВГВ-інфекції. АнтиНВсоrе AT класу IgM циркулюють у крові протягом 4-8 тижнів, а потім, після завершення інфекційного процесу, зникають. Надалі (практично довічно) у всіх осіб, інфікованих ВГВ, у крові можна виявити антитіла проти НВсоrе класу IgG. Осіб, у яких виявляються тільки анти- НВсоrе, можна розглядати як потенційні джерела інфекції: у 4-40 % із них у сироватці крові виявляється ДНК ВГВ… Лабораторна діагностика ГВ базується на виявленні специфічних антитіл (IgG та IgM) в сироватці крові або інших біологічних рідинах поряд з різними методами виявлення антигену та вірусу. Серед серологічних методів діагностики ВГВ найбільш поширеним є метод імуноферментного аналізу (ІФА), який характеризується високою чутливістю та специфічністю. В Україні розроблена і випускається тест-система для визначення антитіл класу IgG проти вірусу гепатиту В (DIA-HBV) виробництва НВК Діапроф-Мед [1]. В основу корисної моделі поставлена задача створити імуноферментну тест-систему для виявлення антитіл класів IgG та IgM до корового антигену НВсоrе ВГВ як на ранніх стадіях сероконверсії, так і при хронічному перебігу захворювання. Суть корисної моделі в створенні імуноферментної тест-системи на основі рекомбінантного поліпептиду аналога структурного корового (core) антигену ВГВ, який засорбовано в лунках полістиролового планшету, як кон'югат використовуються моноклональні антитіла проти IgG та IgM людини, дає змогу виявляти гепатит В на різних стадіях, як гостру так і хронічну фази. Поставлена задача вирішується шляхом отримання імуносорбенту, в лунки якого засорбовано рекомбінантні поліпептиди НВсоrе - аналог корового білка ВГВ. В складі кон'югатів використовуються моноклональні антитіла проти імуноглобулінів людини класів G та М, мічені ферментом. Ферментативну реакцію визначають за допомогою однокомпонентного субстратного розчину з хромогеном. За одну постановку (2 години) можна проаналізувати 80 сироваток. Приклад. Визначення антитіл до окремих антигенів вірусу гепатиту С у сироватці крові хворої Б., 1951 року народження. Визначення проводять за відомою методикою [2] твердофазного імуноферментного аналізу. Після однократного промивання планшету у лунки імуносорбенту, з сорбованим НВсоге антигеном ВГВ, вносять по 80 мкл розчину для розведення сироваток і по 20 мкл досліджуваних зразків сироватки від хворої для виявлення антитіл до корового білка ВГВ і контрольні зразки: 4 позитивних і 4 негативних. Накривають планшет клейкою плівкою або кришкою та інкубують при температурі 37 °C протягом 60 хв. При наявності в зразку специфічних антитіл до ВГВ, вони зв'язуються з антигенами на твердий фазі, утворюючи комплекс антиген-антитіло. Після відмивання планшета в лунки додають кон'югат - суміш моноклональних антитіл проти IgG та IgM людини, мічені пероксидазою і інкубують при 37 °C протягом 30 хв. Після відмивання 6 разів в лунки додають розчин проявника (однокомпонентний субстратний розчин з хромогеном) та інкубують при 18-22 °C у темряві 30 хв. Зупиняють кольорову реакцію, вносячи до всіх проб по 100 мкл стоп-реагенту. Не більш як через 5 хв. після зупинення кольорової реакції визначають оптичну густину (ОГ) в лунках у двохвильовому режимі за допомогою спектрофотометра. Значення ОГ зразка прямо пропорційне кількості антитіл до НВсоге антигену ВГВ у сироватці. Позитивні значення ОГ хоча б двох з чотирьох антигенів ВГВ свідчить про наявність антитіл до ВГВ і захворюваність на гепатит В. У хворої визначені антитіла до корового білка ВГВ. 60 1 UA 72506 U 5 Джерела інформації: 1. Деклараційний патент UA № 57639 А. Заявка № 2002076165. Тест-система діагностична імуноферментна для визначення антитіл проти вірусу гепатиту В у сироватках або плазмі крові людини (DIA-HBV). Семиноженко В. П. Гураль А. Л., Шевчук О. А. 16.06.2003. бюл. № 7. 2. Михайлов А.Т., Симирский В.Н. "Методы иммунохимического анализа в биологии развития". - М.: "Наука", 1981. ФОРМУЛА КОРИСНОЇ МОДЕЛІ 10 Тест-система імуноферментна для визначення антитіл класів IgG та IgM до корового білка вірусу гепатиту В, в якій використовується імуносорбент, в лунки якого внесено рекомбінантний поліпептид core - аналог антигену вірусу гепатиту В і кон'югат, яка відрізняється тим, що в складі кон'югатів використовуються моноклональні антитіла проти IgG та IgM людини, мічені ферментом, а як проявник - однокомпонентний розчин хромогену. 15 Комп’ютерна верстка А. Крижанівський Державна служба інтелектуальної власності України, вул. Урицького, 45, м. Київ, МСП, 03680, Україна ДП “Український інститут промислової власності”, вул. Глазунова, 1, м. Київ – 42, 01601 2