Спосіб предпосівної обробки проб фекалій та об’єктів зовнішнього середовища при паратуберкульозі

Реферат: Спосіб передпосівної обробки фекалій та об'єктів зовнішнього середовища при паратуберкульозі включає відбір біоматеріалу, змішування з фекальними масами, повторний відбір біоматеріалу для висіву у пробірки, висів обробленого біоматеріалу, використання бактерициду. Як бактерицид використовують 0,9 % розчин N-цетилпіридинію хлористого за експозиції 18 годин. UA 72573 U (54) СПОСІБ ПРЕДПОСІВНОЇ ОБРОБКИ ПРОБ ФЕКАЛІЙ ТА ОБ'ЄКТІВ ЗОВНІШНЬОГО СЕРЕДОВИЩА ПРИ ПАРАТУБЕРКУЛЬОЗІ UA 72573 U UA 72573 U 5 10 15 20 25 30 35 40 45 50 55 Корисна модель належить до галузі ветеринарної мікробіології і може бути використана для передпосівної обробки проб фекалій (різних видів тварин) та об'єктів зовнішнього середовища (ґрунт, підстилка, зіскреби з кормушок та стін, силосу) з метою виділення культур мікобактерій збудників паратуберкульозу. В ветеринарній медицині існує спосіб обробки об'єктів зовнішнього середовища при туберкульозі 18 % розчином сірчаної кислоти (Кассич Ю.А., Тихонов П.М. Совершенствование и сравнительное изучение методов обработки материала, отобранного из объектов внешней среды для культуральной диагностики туберкулѐза // Ветеринария: Респ. межвед. тематич. науч. сб. - К., 1984. - Вып. 59. - С. 16-18). Недоліком цього способу є високий ступінь росту на живильних середовищах сапрофітної мікрофлори (40 %), крім того 18 % H2SO4 пригнічує ріст М. paratuberculiosis, що вливає на собівартість та результативність проведених досліджень. Також існує спосіб обробки проб фекалій 1,5 %-м розчином лаурилсульфату натрію на 1,5 % розчині їдкого натру, термін експозиції 3 години (Алиев, А.И. Выделение микобактерий паратуберкулеза из патологического материала [Текст]) / А.И Алиев, Н.Г. Фадеева // Бюллетень НИИЭВ - М., 1990. - Вып. 73-74. - С. 71-76. Недоліком цього способу є високий ступінь росту сторонньої мікрофлори та відсоток проростів посівів (36,3 %). Для виділення культури мікобактерій паратуберкульозу та їх ідентифікації на спеціальних живильних середовищах найбільш близьким до запропонованого способу є спосіб передпосівної обробки біоматеріалу 5 % щавлевою кислотою (ОІЕ Manual of Diagnostic Test and Vaccines for Terrestrial Animals.-2004; ch. 2.2.6). Цей спосіб є прототипом. 3 За цим способом: подрібнені та розтерті у ступці (біля 10 см ) фекальні маси змішують з 10 частинами 5 %-го розчину щавлевої кислоти в стерильному флаконі з кришкою та збовтують. Флакон з емульсією ставлять на 20-30 хвилин на водяну баню за температури 37 °C, після чого центрифугують з частотою обертів 2500-3000 об/хв. протягом 15 хвилин. Після центрифугування відокремлюють надосадову рідину, осад відмивають стерильним фізіологічним розчином, потім з його поверхні бактеріологічною петлею відбирають матеріал та висівають в 5-6 пробірок з поживним середовищем із вмістом мікобактину. Недоліком цього способу є високий ступінь росту на живильних середовищах сапрофітної мікрофлори (60-100 %), що впливає на собівартість та результативність проведених досліджень. В основу корисної моделі поставлено задачу розробити спосіб передпосівної обробки фекалій та об'єктів зовнішнього середовища при паратуберкульозі, що включає відбір біоматеріалу, змішування з фекальними масами, повторний відбір біоматеріалу для висіву у пробірки, висів обробленого біоматеріалу, згідно з корисною моделлю, як бактерицид використовують 0,9 % розчину N-цетилпіридинію хлористого за експозиції 18 годин, щоб забезпечити ефективність способу. Порівняльний аналіз із прототипом дає змогу зробити висновок, що спосіб, який заявляється, відрізняється від відомого використанням як бактерициду 0,9 % розчину Nцетилпіридинію хлористого. Це дає можливість зменшити відсоток росту на живильних середовищах супутньої мікрофлори та підвищити висівання мікобактерій на живильному середовищі, що відповідає критерію "новизна". Спосіб виконують таким чином: Приклад 1. 1,0 г фекальних мас відібраних від тварин або проб з об'єктів зовнішнього середовища (ґрунт, підстилка, зіскреби з кормушок та стін, вода, силос) в стерильному боксі поміщають у 3 стерильні флакони ємністю 50 см , заливають стерильною дистильованою водою у співвідношенні 1:4, залишають на 2 години за кімнатної температури. Після чого готують 0,75 % розчин N-цетилпіридинію хлористого і розливають у стерильні флакони. Потім обережно стерильною піпеткою відбирають верхній шар відстояної у воді дослідної проби у кількості 5,0 3 см і вносять на дно флакону з препаратом. Закривають стерильними гумовими пробками та залишають за кімнатної температури на 18 годин. Після цього матеріал обережно стерильною піпеткою відбирають з дна флакону та висівають на спеціальні живильні середовища у кількості 10 пробірок. Пробірки з висівами розташовують у термостаті за температури 37 °C на 5 діб у горизонтальному положенні з негерметично закритими пробками, після чого парафінують та культивують в термостаті за температури 37 °С до появи росту культури. Облік росту проводять через кожні 7-10 діб. Приклад 2. 1 UA 72573 U 5 10 15 20 25 Спосіб передпосівної обробки проводять як вказано вище, тільки передпосівну обробку матеріалу проводять 0,9 % розчином N-цетилпіридинію хлористим за експозиції 18 годин. Приклад 3. Теж саме, що і в прикладі 1, тільки передпосівну обробку матеріалу проводять 1 % розчином N-цетилпіридинієм хлористим за експозиції 18 годин. Результати ефективності запропонованого способу у порівнянні з прототипом наведені в таблиці. Із матеріалів таблиці видно, що при застосуванні для передпосівної обробки 5 %-го розчину щавлевої кислоти відсоток росту сторонньої мікрофлори (проріст) на живильному середовищі складає від 60 до 100 %, виділення культур мікобактерій паратуберкульозу від 10 до 20 %. При застосуванні 0,75 %-го розчину N-цетилпіридинію хлористого за експозиції 18 годин контамінація посівів на живильному середовищі складає від 20 до 50 %, виділення культури від 20 до 50 % (приклад 1). При застосуванні 0,9 %-го розчину N-цетилпіридинію хлористого збільшується кількість виділення культур від 70 до 90 % з відсутністю на живильному середовищі росту сапрофітної мікрофлори (приклад 2). При обробці із застосуванням 1 %-го розчину N-цетилпіридинію хлористого було виділено від 10 до 40 % культур мікобактерій паратуберкульозу та жодного росту сапрофітної мікрофлори (приклад 3). Це свідчить про те, що цей розчин пригнічує ріст культури мікобактерій паратуберкульозу. Результати проведених досліджень свідчать про те, що при використанні запропонованого способу передпосівної обробки проб фекалій та проб з об'єктів зовнішнього середовища (приклад № 2) росту сторонньої мікрофлори не відмічається, а виділення культур мікобактерій паратуберкульозу на живильному середовищі становить найбільший відсоток. Запропонований спосіб передпосівної обробки фекальних мас та об'єктів зовнішнього середовища відповідає сучасним вимогам при роботі з заразним матеріалом, безпечний, ефективний та може використовуватись в лабораторіях для культуральних досліджень на паратуберкульоз. Таблиця Спосіб передпосівної обробки фекалій та об'єктів зовнішнього середовища при паратуберкульозі Ріст M.ptb при обробці Ріст M.ptb запропонованим Ріст сторонньої мікрофлори, % № при обробці способом (%) Дослідні проби з/п прототипом Запропонований Прототип (%) 0,75 % 0,9 % 1% 0,75 % 0,9 % 1% Пригнічує 1 Фекальні маси 40 80 10 10 50 ріст 9,0 культури 2 силос 50 90 40 40 100 3 ґрунт 20 70 20 10 30 60 4 підстилка 30 70 20 20 20 70 5 зіскріб з кормушки 40 80 10 10 10 80 6 Зіскріб зі стіни 50 70 10 10 20 70 ФОРМУЛА КОРИСНОЇ МОДЕЛІ 30 Спосіб передпосівної обробки фекалій та об'єктів зовнішнього середовища при паратуберкульозі, що включає відбір біоматеріалу, змішування з фекальними масами, повторний відбір біоматеріалу для висіву у пробірки, висів обробленого біоматеріалу, використання бактерициду, який відрізняється тим, що як бактерицид використовують 0,9 % розчин N-цетилпіридинію хлористого за експозиції 18 годин. 35 Комп’ютерна верстка M. Мацело Державна служба інтелектуальної власності України, вул. Урицького, 45, м. Київ, МСП, 03680, Україна ДП “Український інститут промислової власності”, вул. Глазунова, 1, м. Київ – 42, 01601 2