Тест-система імуноферментна для виявлення антитіл класу igм до вірусу простого герпесу 2 типу уніфікована “dia-hsv 2- igm-u”

Реферат: Тест-система імуноферментна для виявлення антитіл класу IgM до вірусу простого герпесу 2 типу уніфікована "DIA-HSV2-IgM-u", в якій антигени вірусу простого герпесу 2 типу, використані в складі імуносорбенту. Як кон'югат застосовані антилюдські антитіла проти IgM, зв'язані з пероксидазою. В тест-системі застосовується імуносорбент з сорбованими на твердій фазі моноклональними антитілами проти IgM людини, а пероксидазний кон'югат містить рекомбінантний антиген G2 HSV2 - аналог поверхневого білка вірусу простого герпесу 2 типу, який виявляють за допомогою однокомпонентного розчину хромогену. UA 73661 U (12) UA 73661 U UA 73661 U 5 10 15 20 25 30 35 40 45 50 55 60 Корисна модель належить до біотехнології, імунохімії та медицини і може бути використана для виявлення антитіл класу IgM до вірусу простого герпесу 2 типу (HSV2) в сироватці або плазмі крові людини з метою визначення активного перебігу інфекції - вперше набутої або її рецидиву. Вірус простого герпесу (Herpes Simplex Virus - HSV) відноситься до родини Herpesviridae і є ДНК-вмісним вірусом розміром 150-200 нм в діаметрі. Вірус простого герпесу 2 типу переважно вражає генітальну область людини. За даними ВООЗ приблизно 20 % дорослого населення інфіковано HSV2. Даний тип вірусу в 80 % випадків є причиною генітальної та неонатальної герпетичної інфекції. Інфекція, викликана HSV2 рецидивує частіше та перебігає з більш важкою патологією. HSV2 може призводити до онкогенної трансформації клітин, у вагітних - до викиднів та уродженим вадам розвитку плоду, є причиною несприятливого прогнозу неонатальної герпетичної інфекції у новонароджених. У ряді випадків генітальний герпес перебігає атипово, або безсиптомно. В зв'язку з цим при обстеженні пацієнтів лабораторне дослідження з застосуванням сучасних серологічних методів має важливе значення. Діагностичне значення при первинній HSV2 інфекції мають специфічні антитіла класу IgM, які з'являються на 4-6 день захворювання та сягають максимуму на 15-20 добу. При рецидивуючому герпесі поява IgM в сироватці крові хворого відбувається при загостренні захворювання. Відома тест-система для виявлення імуноглобулінів класу М проти вірусу простого герпесу у сироватках і плазмі крові людини при діагностиці герпетичної інфекції [1]. В основі тест-системи лежать антигени вірусу простого герпесу, використані в складі імуносорбенту, а як кон'югат застосовують анти людські антитіла проти IgM, зв'язані з пероксидазою. Суть корисної моделі в створенні імуноферментної тест-системи для визначення наявності антитіл класу IgM до вірусу простого герпесу 2 типу в сироватці або плазмі крові людини. Поставлена задача вирішується шляхом створення тест-системи, в основу роботи якої закладено принцип "захоплення антитіл" твердофазного імуноферментного аналізу, де імуносорбентом є моноклональні анти-IgM антитіла, а кон'югат - рекомбінантний антиген G2 HSV2, мічений пероксидазою. При внесенні в лунки досліджуваної сироватки всі антитіла класу IgM, присутні в зразку, зв'язуються з моноклональними антитілами на твердій фазі, утворюючи комплекси анти-IgMIgM. На наступному етапі IgM, специфічні саме до вірусу простого герпесу 2 типу, виявляють за допомогою рекомбінантного антигену HSV2 у складі пероксидазного кон'югату. Після відмивання незв'язаних компонентів в лунки додають розчин однокомпонентного хромогену. Пероксидазну реакцію зупиняють, додаючи стоп-реагент, і вимірюють оптичну густину суміші у лунках при довжині хвилі 450/620 нм, яка пропорційна концентрації специфічних IgM антитіл до HSV2 у зразках сироваток або плазми крові. Приклад 1. Визначення наявності антитіл до HSV2 в сироватці крові хворої Б, 1993 року народження. Визначення проводять за відомою методикою [2] твердофазного імуноферментного аналізу. Для цього в лунки імуносорбенту з фіксованими на ньому моноклональними антитілами проти IgM людини вносять по 90 мкл розчину для розведення сироваток і про 10 мкл досліджувані зразки і позитивний та негативний контролі. Накривають планшет кришкою та інкубують при температурі (37±2) °С протягом 60 хв. Після закінчення інкубації промивають планшет 4 рази розчином для промивання і вносять в лунки по 100 мкл кон'югату. Знову інкубують планшет при (37±2) °С протягом 30 хвилин. Промивають планшет 6 разів розчином для промивання і вносять в лунки по 100 мкл однокомпонентного розчину хромогену ТМБ. Накривають планшет кришкою та інкубують при температурі (18-25) °С в темному місці протягом 30 хвилин. Для зупинення кольорової реакції вносять в лунки по 100 мкл стоп-реагенту (в тій же послідовності внесення що й ТМБ). Не більше як через 5 хв. після зупинення кольорової реакції визначають оптичну густину (ОГ) в лунках у двохвильовому режимі (450 нм відносно 620 нм). Для обліку результатів розраховують середнє значення ОГ негативного контролю - НКсер і граничне значення (ГЗ) по формулі: ГЗ=НКсер+0,3. Результат аналізу вважається негативним, якщо ОГ досліджуваного зразка менше ГЗ. Результат аналізу вважається позитивним, якщо ОГ досліджуваного зразка більше ГЗ. Досліджений матеріал від хворої було ідентифіковано як позитивний на наявність герпетичної інфекції. Використана література: 1. Інструкція по застосуванню тест-системи "HSV-IgM-ELISA test for detection of IgM antibodies to Herpes simplex virus in human serum" фірми Human. - Німеччина, 2011. - 20 с. 1 UA 73661 U 2. А.Т. Михайлов, В.Н. Симирский "Методы иммунохимического анализа в биологии развития". М.: "Наука", 1981. ФОРМУЛА КОРИСНОЇ МОДЕЛІ 5 10 Тест-система імуноферментна для виявлення антитіл класу IgM до вірусу простого герпесу 2 типу уніфікована "DIA-HSV2-IgM-u", в якій антигени вірусу простого герпесу 2 типу, використані в складі імуносорбенту, а як кон'югат застосовані антилюдські антитіла проти IgM, зв'язані з пероксидазою, яка відрізняється тим, що в тест-системі застосовується імуносорбент з сорбованими на твердій фазі моноклональними антитілами проти IgM людини, а пероксидазний кон'югат містить рекомбінантний антиген G2 HSV2 - аналог поверхневого білка вірусу простого герпесу 2 типу, який виявляють за допомогою однокомпонентного розчину хромогену. Комп’ютерна верстка А. Крулевський Державна служба інтелектуальної власності України, вул. Урицького, 45, м. Київ, МСП, 03680, Україна ДП “Український інститут промислової власності”, вул. Глазунова, 1, м. Київ – 42, 01601 2