Спосіб оцінки протимікробної реактивності нейтрофілів секрету молочної залози корів

Реферат: Спосіб оцінки протимікробної реактивності нейтрофілів секрету молочної залози корів включає цитологічне дослідження нейтрофільних клітин, які піддаються цитохімічній реакції з нітросинім тетразолієм. UA 73935 U (54) СПОСІБ ОЦІНКИ ПРОТИМІКРОБНОЇ РЕАКТИВНОСТІ НЕЙТРОФІЛІВ СЕКРЕТУ МОЛОЧНОЇ ЗАЛОЗИ КОРІВ UA 73935 U UA 73935 U 5 10 15 20 25 30 35 40 45 Корисна модель належить до ветеринарної медицини, а саме до ветеринарного акушерства та імунології, і може бути використана для визначення стану локального імунітету молочної залози корів. Аналогом заявленого способу є відомий спосіб (Хомин С.П. Використання люмінесцентної мікроскопії молока для діагностики субклінічного маститу у корів / С.П. Хомин, Г.В. Зверева, О.Я. Дмитрів, М.Г. Анросюк // Науковий вісник Львівської державної академії ветеринарної медицини ім. С.З. Ґжицького. - Львів, 2000. - Т. 2. (№2). - С. 214-217) цитологічної диференціації соматичних клітин секстету молочної залози корів проводиться шляхом люмінесцентної мікроскопії. Недоліком даного способу є те, що для його проведення необхідне спеціальне обладнання (люмінесцентний мікроскоп) та дорогі реактиви (флуоресцентні барвники тощо). Цей спосіб дає змогу визначити тільки кількісний вміст соматичних клітин, і при цьому не дає можливість провести точну цитологічну оцінку мікропрепарату, визначення функціональної (протимікробної) реактивності фагоцитарних клітин. Нейтрофільні гранулоцити є складовою секрету молочної залози корів, є специфічними індикаторами та ефекторами запальної реакції. Тому визначення цитохімічної реактивності останніх з важливим діагностичнім критерієм при визначенні локального імунного захисту молочної залози, а також є інформативним показником при діагностиці маститу вже на ранніх стадіях розвитку запальної реакції. Ознаками, спільними з рішенням, що заявляється, є визначення цитохімічної реактивності нейтрофільних гранулоцитів в метаболічній реакції з нітросинім тетразолієм (НСТ-тест), який об'єктивно відражає оксигензалежний механізм протимікробного потенціалу фагоцитів, що є надзвичайно важливим діагностичним критерієм в клінічній імунології. В основу корисної моделі поставлена задача оцінки цитохімічної (протимікробної) реактивності нейтрофілів секрету молочної залози корів в метаболічній реакції з нітросинім тетразолієм (НСТ - тест). Поставлена задача вирішується тим, що у способі оцінки протимікробної реактивності нейтрофілів секрету молочної залози корів, згідно з корисною моделлю, для проведення цитологічного дослідження використовуються нейтрофільні клітини секрету молочної залози, які піддаються цитохімічній реакції з нітросинім тетразолієм (НСТ-тест). Опис способу: у центрифужну пробірку вносять 1,0 мл градієнта щільності фікол-верографін 3 ( 1,077 г/см ), на який за допомогою автодозатора (піпеткою) обережно нашаровують 1,0 мл молока корови. Дослідну пробу центрифугують впродовж 20 хв. в режимі 15000 об/хв. Після завершення центрифугування із розшарованої інтерфази мікропіпеткою відбираємо 0,1 мл клітинного пулу, який наносять на предметне скельце. До клітин додають 0,1 мл нітросинього тетразолію, приготовленого на фосфатному буфері (рН 7,2). Суміш інкубують у вологій камері термостату впродовж 15 хв., а потім витримують 30 хв. у холодильнику (t +4 °С). Потім готують мазок, який фіксують 90° метиловим спиртом, далі фарбують 0,1 %-вим розчином нейтрального червоного - 15-20 хв. Мікропрепарат досліджують із використанням світлового мікроскопу (об'єктив 90-100*, окуляр 20*). При оцінці метаболічної реактивності визначають ступеневу (І, II, III, IV) інтенсивність відновлення фагоцитами нітросинього тетразолію у диформазан, який чітко візуалізується у вигляді темних гранул у цитоплазмі фагоцитарних клітин (креслення гранули диформазану в цитоплазмі реактивного нейтрофілу секрету молочної залози корів) (фарбування нейтральним червоним, х 2000) Таким чином, виконання способу, що заявляється, дає можливість визначити прояв протимікробної (метаболічної) реактивності нейтрофільних гранулоцитів секрету молочної залози, яке в повній мірі характеризує протимікробний потенціал фагоцитів, що надзвичайно важливо в оцінці стану локального імунітету молочної залози корів при нормі та при діагностиці маститу. 50 ФОРМУЛА КОРИСНОЇ МОДЕЛІ 55 Спосіб оцінки протимікробної реактивності нейтрофілів секрету молочної залози корів, що включає цитологічне дослідження нейтрофільних клітин секрету молочної залози, який відрізняється тим, що нейтрофільні гранулоцити піддаютьсяцитохімічній реакції з нітросинім тетразолієм. 1 UA 73935 U Комп’ютерна верстка І. Скворцова Державна служба інтелектуальної власності України, вул. Урицького, 45, м. Київ, МСП, 03680, Україна ДП “Український інститут промислової власності”, вул. Глазунова, 1, м. Київ – 42, 01601 2