Спосіб очищення 20(s)-камптотецину

1. Спосіб очищення 20(S)-камптотецину, який полягає в тому, що а) спільно завантажують водну основу й вихідний матеріал, який містить 20(S)-камптотецин, при цьому лактонове кільце 20(S)-камптотецину перетворюють у карбоксилатну сіль, б) отриману суміш гідрують у присутності каталізатора на основі перехідного металу, в) водну фазу підкисляють з утворенням кристалів камптотецину, г) додають принаймні один полярний апротонний розчинник і д) виділяють утворені кристали камптотецину. 2. Спосіб очищення 20(S)-камптотецину за п. 1, який відрізняється тим, що вихідний матеріал, який містить 20(S)-камптотецин, являє собою рослинний продукт природного походження. 3. Спосіб очищення 20(S)-камптотецину за п. 1 або 2, який відрізняється тим, що вихідний матеріал, який містить 20(S)-камптотецин, являє собою переважно суміш сполук формули (І) 3 74874 4 а) спільно завантажують водну основу й вихідний де R1 означає вініл, a Met означає метал, матеріал, який містить 20-вінілкамптотецин, з б) отриману суміш гідрують у присутності каталізаутворенням при цьому сполуки формули (II) тора на основі перехідного металу, в) водну фазу підкисляють з утворенням кристалів O N OH камптотецину, N г) додають принаймні один полярний апротонний (II) OMet розчинник і R1 д) виділяють утворені кристали камптотецину. O OH Даний винахід стосується способу очищення 20(S)-камптотецину, який містить як домішку вінілове похідне камптотецину. Передумови створення винаходу 20(S)-камптотецин [далі 20(S)-КПТ] являє собою алкалоїд природного походження формули (І) (І) де R1 означає етил. 20(S)-КПТ і його похідні мають як інгібітори топоізомерази І пригнічувальну дію на пухлини [див., наприклад, B.C.Giovanelle і ін., Cancer Research 51 (1991), стор.302-355, заявки ЕР 0074256, ЕР 0088642, патенти US 4473692, US 4545880, US 4604463 і заявку WO 92/05785]. 20(S)-КПТ можна одержувати як сирий продукт, зокрема з китайського дерева Camptotheca acuminata (Nyssaceae) [див. М.Wall і ін., Joum. Am. Chem. Soc. 88 (1966), стор.3888-3890] або з індійського дерева Nothapodytes foetida (nimmoniana) (колишня назва Mappie foetida Miers [див. T.R.Govindachari і ін., Phytochemistry 11 (1972), стор.3529-3531]. Ці сирі продукти, які насамперед одержують з Nothapodytes foetida, містять 2O(S)-КПТ із домішкою КПТ-похідного формули (І), де R1 означає вініл (далі 20-вініл-КПТ). Звичайно такі сирі продукти доводиться очищати дорогими методами хроматографії або шляхом переведення камптотецину у водну фазу і видалення домішок екстракцією за допомогою нерозчинних у воді розчинників [див., наприклад, заявку WO 94/19353]. Слід, однак, відзначити, що таку домішку, як 20-вініл-КПТ, повністю і ефективно видалити вказаними методами не вдається. Виходячи з вищевикладеного, в основу даного винаходу була покладена задача розробити спосіб, який дозволив би очищати вихідний продукт 20(S)-КПТ без необхідності використовувати в цих цілях дорогі методи хроматографії. При створенні винаходу було встановлено, домішки 20-вініл-КПТ, які присутні в 20(S)-КПТ, несподівано вдається практично повністю видаляти завдяки обробці вихідного матеріалу спочатку водною основою, потім гідруванням і наступним підкисленням, після чого продукт можна виділяти. Об'єктом винаходу відповідно до цього є спо сіб очищення 20(S)-камптотецину, який полягає в тому, що а) спільно завантажують водну основу й вихідний матеріал, який містить 20(S)-камптотецин, при цьому лактонове кільце 20(S)-камптотецину перетворюють у карбоксилатну сіль, б) отриману суміш гідрують у присутності каталізатора на основі перехідного металу, в) водну фазу підкисляють з утворенням кристалів камптотецину, г) додають принаймні один полярний апротонний розчинник і д) виділяють утворені кристали камптотецину. Ще одним об'єктом винаходу є спосіб одержання 20(S)-камптотецину формули (І), де R1 означає етил, з 20-вініл-камптотецину формули (І), де R1 означає вініл, який полягає в тому, що а) спільно завантажують водну основу й вихідний матеріал, який містить 20-вініл-камптотецин, з утворенням при цьому сполуки формули (II) (IІ) де R1 означає вініл, a Met означає метал, б) отриману суміш гідрують у присутності каталізатора на основі перехідного металу, в) водну фазу підкисляють з утворенням кристалів камптотецину, г) додають принаймні один полярний апротонний розчинник і д) виділяють утворені кристали камптотецину. Під використовуваним вище й у наступному понятті "вихідний матеріал, який містить камптотецин," мають на увазі матеріал з домішками, який містить 20(S)-КПТ, сирий камптотецин, рослинні екстракти, які містять камптотецин, синтетичний камптотецин, похідні камптотецину, описані, [наприклад, у заявці WO 92/05785], або продукти відповідних реакцій, у складі яких міститься камптотецин. Переважним вихідним матеріалом є сирий продукт природного походження, отриманий насамперед з Nothapodytes foetida. Як правило, цей продукт являє собою суміш сполуки формули (І), де R1 означає етил, і сполуки формули (І), де R1 означає вініл. У складі суміші міститься, як правило, 0,9-1,5мас.%, переважно 1,0-1,4мас.% вінілової сполуки. Разом з тим вихідний матеріал може містити й інші похідні камптотецину, такі, напри 5 74874 6 клад, як 9-метокси-КПТ, 10-метокси-КПТ, 11цілей мінеральні кислоти, такі як НСl, НВr, HJ, метокси-КПТ, 10-гідрокси-КПТ і 11-гідрокси-КПТ. НNО3, Н3РО4, H2SO4, або аліфатичні карбонові Як правило, вихідний матеріал містить до 1мас.% кислоти, такі як оцтова кислота або трифтороцтоодного або декількох цих додаткових КПТва кислота, або суміші названих кислот, насампепохідних, насамперед 0,2-0,8мас.% 9-метоксиред, однак, концентрована соляна кислота. За КПТ. допомогою використовуваної в кожному випадку Поняття "водна основа", яке використовується кислоти значення pH встановлюють на 3,0-6,0, вище й у наступному на стадії а) запропонованого переважно на 3,5-5,0, насамперед приблизно на у винаході способу очищення, стосується основи, 4,0-4,5. Взаємодію з кислотою здійснюють, як праяка у водному середовищі, переважно в чистій вило, при температурі в інтервалі від 0 до воді, утворює достатню кількість іонів гідроксиду, 100°С, переважно від 30 до 80°С, насамперед при потрібну для повного переведення лактонової гру50-60°С. пи похідних камптотецину, які містяться у вихідноВідповідно до одного з переважних варіантів му матеріалі, у відповідні гідроксикарбоксилати. здійснення винаходу для підкислення на Переважними є гідроксиди металів, насамперед 1мас.частину вихідного матеріалу використовують гідроксиди лужних або лужноземельних металів, від 2 до 20мас.частин, переважно від 4 до такі як гідроксид літію, гідроксид натрію, гідроксид 9мас.частин і насамперед 6-8мас.частин конценткалію або гідроксид кальцію. Найбільш переважрованої соляної кислоти. ний з них гідроксид натрію. При дотриманні вказаних умов процес лактоніГідроксид металу доцільно застосовувати у зації з утворенням КПТ, як правило, повністю завигляді розведеного водного розчину, переважно у вершується після закінчення 10-180хв., переважвигляді 1-25%-ного, насамперед 3-10%-ного водно 15-60хв., насамперед після закінчення ного розчину. Як правило, гідроксид металу застоприблизно 30хв. совують у такій кількості, яка потрібна для повного Отримана в результаті підкислення реакційна розчинення похідних камптотецину; переважно на суміш являє собою, як правило, чисту суспензію. 1моль вихідного матеріалу використовувати 1Для більш ефективної кристалізації на стадії г) цю 20молів, особливо переважно 5-15молів, насамсуспензію змішують з одним або декількома поляперед 7,5-12,5моля гідроксиду металу. рними апротонними розчинниками. Як такі придатДо отриманої таким шляхом суміші на стадії б) ні серед інших переважно сульфоксиди, такі, надодають каталізатор на основі перехідного метаприклад, як диметилсульфоксид (ДМСО), або лу, переважно гетерогенний каталізатор на основі аміди і похідні сечовини формули перехідного металу, як який використовують насамперед платину, оксид платини, нікель, паладій або родій на носії, такому як активоване вугілля або оксид алюмінію. Переважний з переліку названих паладій на активованому вугіллі, де його де вміст становить від 1 до 15мас.%, переважно від 2 R2 означає водень або С1-C4алкільну групу, до 10мас.%, насамперед порядку 5мас.%. насамперед водень або метил, Кількість каталізатора на основі перехідного R3 і R4 кожен незалежно один від одного ознаметалу вибирають з таким розрахунком, щоб зачає С1-C4алкільну групу, насамперед метил, або безпечити повне гідрування вінілового похідного R2 і R3 разом утворюють групу -(СН2)m або – камптотецину. Переважно при цьому на 5 NR -(CH2)n, при цьому 1мас.частину вихідного матеріалу використовуваR5 означає С1-C4алкільну групу, ти 0,01-0,50мас.частини, насамперед 0,02m означає 3 або 4, насамперед 3, і 0,10мас.частини вказаного каталізатора (включаn означає 2 або 3, ючи носій). насамперед розчинники, вибрані з групи, яка Отриману таким шляхом суміш переважно при включає Ν,Ν-диметилформамід (ДМФ), Ν,Νтемпературі в інтервалі від -20 до +100°С, насамдиметилацетамід (ДМА), N-метилпіролідон (Νперед від 10 до 40°С, найбільш переважно прибΜΠ), Ν,Ν-диметилетиленсечовину (ДМЕМ) і Ν,Νлизно при кімнатній температурі, обробляють гадиметилпропіленсечовину (ДМПМ) або суміші цих зоподібним воднем. розчинників, найбільш переважним з яких є ДМФ. Тиск водню не відіграє істотної ролі, гідруванЯк правило, на 1мас.частину застосовуваного ня доцільно проводити при нормальному або тровихідного матеріалу використовують від 10 до хи підвищеному тиску, насамперед при тиску від 100мас.частин, переважно від 20 до 80мас.частин, 0,9 до 5,0бар, найбільш переважно при тиску принасамперед від 30 до 50мас.частин полярного близно 1бар. апротонного розчинника. Обробку полярним апроПри дотриманні вказаних умов процес гідрутонним розчинником можна здійснювати при будьвання, як правило, повністю завершується після якій температурі. Переважно перемішувати реакзакінчення 1-20год., переважно 4-15год., насампеційну суміш при температурі в інтервалі від 30 до ред 6-10год. 120°С, насамперед від 80 до 100°С, і потім повільПісля завершення процесу гідрування каталіно охолоджувати до кімнатної температури. затор на основі перехідного металу переважно Отримані таким шляхом КПТ-кристали можна видаляють шляхом фільтрації і потім отриману потім без проблем на стадії д) відділяти від рідкої реакційну суміш підкисляють на стадії в). Таке підфази, переважно відділяти їх шляхом декантуванкислення можна проводити за допомогою неорганя, центрифугування, відцентровим методом, нічної або органічної кислоти. Переважні для цих 7 74874 8 шляхом віджимання або шляхом фільтрації, наремішують протягом 2,5год. при 90-100°С. Далі самперед шляхом фільтрації. Як правило, отримаотриману суспензію повільно охолоджують до кімні КПТ-кристали промивають спиртом, переважно натної температури і фільтрують. Отримані КПТметанолом, етанолом або ізопропанолом, насамкристали промивають 100мл метанолу і сушать під перед метанолом, і на завершення сушать. вакуумом при 55°С. Таким шляхом одержують Перевага запропонованого у винаході способу 9,85г (94,2% від вихідного матеріалу) 20(S)полягає в тому, що він забезпечує високий вихід за камптотецину, що містить менше 0,05% 20-вінілодиницю часу на одиницю об'єму, так само як і КПТ і 0,11% 9-метокси-КПТ. високі вихід і чистоту одержуваного 20(S)Приклад 2 камптотецину практично без присутності в ньому 10,45г сирого продукту, який містить камптодомішок, які містять вінілові групи, і без застосутецин, отриманого з Nothapodytes foetida з 1,33%вання для їх видалення хроматографічного очиним вмістом 20-вініл-КПТ і 0,47%-ним вмістом 9щення. метокси-КПТ розчиняють у 260мл 2н. їдкого натрію Представлені нижче приклади служать лише і змішують з 0,6г паладію (5%-ного) на активовадля ілюстрації і більш докладного пояснення деному вугіллі. Потім суміш протягом 8год. обробляяких можливих варіантів способу очищення кампють при кімнатній температурі і тиску 1бар воднем. тотецину, які не обмежують обсяг винаходу. Після цього реакційну суміш фільтрують і при 50Приклад 1 60°С змішують з 300мл 10%-ної сірчаної кислоти і 10,45г сирого продукту, який містить камптозначення pH установлюють на 4,0-4,5. До утворетецин, отриманого з Nothapodytes foetida з 1,33%ної суспензії домішують 500мл ДМФ і перемішують ним вмістом 20-вініл-КПТ і 0,47%-ним вмістом 9протягом 2,5год. при 90-100°С. Далі отриману суметокси-КПТ розчиняють у 260мл 2н. їдкого натрію спензію повільно охолоджують до кімнатної темі змішують з 0,6г паладію (5%-ного) на активоваператури і фільтрують. Отримані КПТ-кристали ному вугіллі. Потім суміш протягом 8год. обробляпромивають 100мл метанолу і сушать під вакуують при кімнатній температурі і тиску 1бар воднем. мом при 55°С. Таким шляхом одержують 9,67г Після цього реакційну суміш фільтрують і при 50(92,6% від вихідного матеріалу) 20(S)60°С змішують з 80мл концентрованої соляної камптотецину, що містить 0,09% 9-метокси-КПТ, кислоти і значення pH установлюють на 4,0-4,5. До вміст же 20-вініл-КПТ знаходиться при цьому нижутвореної суспензії примішують 400мл ДМФ і пече меж виявлення. Комп’ютерна верстка Т. Чепелева Підписне Тираж 26 прим. Міністерство освіти і науки України Державний департамент інтелектуальної власності, вул. Урицького, 45, м. Київ, МСП, 03680, Україна ДП “Український інститут промислової власності”, вул. Глазунова, 1, м. Київ – 42, 01601