3-(5-аміноурацил)-5,6-бензокумарину гідробромід та препарат на його основі

1. 3-(5-аміноурацил)-5,6-бензокумарину гідробромід формули: Винахід стосується нової сполуки, одержаної шляхом хімічного синтезу 3-(5-аміноурацил)-5,6бензокумарину гідроброміду (БКУ) та ліпосомальної форми зазначеної речовини, які можуть використовуватись як протипухлинні засоби при хіміотерапії онкологічних захворювань. Відомо, що похідні урацилу володіють протипухлинною активністю [1]. Найближчими за своєю структурною дією до даної сполуки є гетероциклічні ансамблі, що поєднують у собі структури кумарину і 5,6-бензокумарину та гетероциклів з вузловим атомом азоту, які виявляють високу активність до клітин лейкемії, а також володіють антимікробною дією [2]. Недоліки таких гетероциклічних ансамблів: низька ефективність протипухлинної дії та висока токсичність щодо солідних пухлин, відсутність антиоксидантної активності, двостадійний метод синтезу, погана розчинність препаратів у воді. Подолання зазначених недоліків можливе шляхом створення протипухлинних препаратів, що володіють протипухлинною активністю, поряд з низькою токсичністю при дії на солідні пухлини, які містять гетероциклічні ансамблі та поєднують у своїй структурі фрагменти урацилу та 5,6бензокумарину. Задача винаходу - створення протипухлиного препарату з низькою токсичністю. Задача вирішується шляхом синтезу нової сполуки -3-(5аміноурацил)-5,6-бензокумарину гідроброміду (БКУ), що проявляє протипухлинну активність. Відповідність критерію "новизна" полягає в тому, що ніде з літературних джерел не виявлено використання зазначеної речовини. З відомого рівня техніки не випливає можливість використання синтезованої речовини як протипухлиного агенту. Ця обставина забезпечує відповідність критерію "винахідницький рівень". "Промислова придатність" забезпечується можливістю впровадження в промислове вироб O (13) . 2. Препарат, що містить як активну сполуку 3-(5аміноурацил)-5,6-бензокумарин гідробромід в ліпосомальній формі. C2 O 75784 N H (11) O NH UA O C N H2 HBr H (19) O 3 75784 4 ництво, використовуючи традиційні методи синтеДля цього брали лецитин-стандарт, холестерин і зу та обладнання. водний розчин маніту у концентрації 0,15 М. БКУ одержують взаємодією 5-аміноурацилу з Суміш ліпідів висушували на роторному ви3-(со-бромацетил)-5,6-бензокумарином в парнику до утворення плівки. Хімічний лікарський середовищі органічних розчинників при нагріванні. засіб розчиняли у диметилсульфоксиді (DMSO). До розчину 0,35г (0,0025 моль) 5-аміноурацилу в До плівки ліпідів додавали 10% розчин БКУ і суміш 100мл ДМФА при температурі 100°С додають роздиспергували на механічній мішалці типу GFL чин 0,8г (0,0025 моль) 3-(о)-бромацетил)-5,63015. Суспензію ліпосом обробляли на ультразвукумарину в 50 мл толуолу. Реакційну суміш витриковому диспергаторі УЗДН 2Т із зануреним мують при температурі 120°С протягом 0,5 години випромінювачем у режимі 44 кГц 20-30 мкА протяі залишають на ніч. Оранжево-коричневі кристали гом 3 хвилин. фільтрують, промивають спиртом і висушують при Отримані бішарові ліпосоми у закритій температурі 80-90°С. Вихід: 0,7 г (60%) (Тпл 265пробірці швидко заморожували у рідкому азоті (267°С, розклад.). ДМ80: вода, 1:6. 195°С) й зразу поміщали пробірку у водяну баню Речовина добре розчинна в ДМ80, ДМФА, (20-25°С). Розморожену суміш знову заморожуваводних розчинах лугів. ли і процедуру повторювали 5 разів. Після останнього заморожування суміш розморожували при O кімнатній температурі. Після ультрафільтрації O зразки ліпосом продивлялися під мікроскпом. C N NH Як видно з фігури 1, в результаті дослідження H2 HBr дозування 3-(5-аміноурацил)-5,6-бензокумарину H O O N O (БКУ) було встановлено, що напівлегальною доH зою препарату є 14,8±4,2 мг/кг. При цьому оптиЗнайдено %: С 48.92, 48.84; Н 3.10; N 9.77, мальна ефективна доза препарату становить 6 9.68; Br 18.80, 18.68. мг/кг, яка поряд з проявом протипухлинної C19H14BrN3O5 активності володіла найнижчою токсичністю, що Вираховано %: С 48.49; Н 3.36; N 10.00; Br демонструвалася зменшенням темпів росту пух19,06. лини і збільшенням тривалості життя на 19%. -1 ІЧ спектр (табл. KBr), v, см : 1730, 1720(с) Аналіз показників протипухлинної активності (C=O); 3400, 3090 (NH). досліджуваних препаратів показав, що серед обСпектр ПМР v м.д. (DMSO-D6) 4,48 с. (2Н, Nраних хіміотерапевтичних засобів найвищою CH2), 4,82 с. (1Н, NH), 6,41 д. (1Н, I=6 Гц), 7,66 м. активністю володіє ліпосомальна форма 3-(5(2Н, Наром), 7,8 т. (1Н, Наром I = 8 Гц), 9,4 с. (1Н, Нааміноурацил)-5,6-бензокумарину (лБКУ). Виявлена ром), 10,21 д. (1Н, NH, I = 5 Гц), 11,24 с. (1Н, NHімід) протипухлинна активність лБКУ, що показана на Отримана речовина при введенні фігурі 2, кількісно та якісно переважала над цитопухлиноносіям у вигляді водної емульсії проявляє статичною дією немодифікованого 3-(5протипухлинну активність та володіє токсичністю. аміноурацил)-5,6-бензокумарину (БКУ) та 5З метою підвищення протипухлинної активності та фторурацилу (де, К - щури з карциномою Герена, зниженя токсичності синтезованої речовини прояким не вводили препарат; БКУ - пухлиноносії, водили конструювання ліпосомального препарату яким вводили 3-(5-аміноурацил)-5,6-бензокумарин БКУ. (БКУ); лБКУ - пухлиноносії, яким вводили 3-(5Для приготування лецитин-холестеринових аміноурацил)-5,6-бензокумарин (БКУ) в ліпосомах; ліпосом використовували кристалічний холестерин Ф - пухлиноносії, яким вводили 5-фторурацил). Це (фірми "Синбиас", Россия) та яєчний лецитин у підсумку виражалося найвищими показниками стандарт (фірми "Біолік", Харків) у мольному гальмування росту пухлини (ГРП) і збільшенням співвідношенні 7:3. Ліпосоми отримували методом тривалості життя (ЗТЖ) дослідних тварин. заморожування-відтаювання, який дозволяє залучити у ліпосоми 80% лікарського препарату [3]. Таблиця 1 Вплив похідних урацилу на ріст карциноми Герена Доба Контроль (об'єм, см3) 7 10 14 17 21 26 28 30 35 0,32±0,056 2,59±0,38 6,72+0,66 9,61±1,42 9,86±1,63 10,32±1,84 Примітка: 5-фторурацил (об'єм, см3) 0,331±0,092 0,121±0,036* БКУ(об'єм, см3) лБКУ (об'єм, см3) 0,348±0,102 1,86±0,28 4,71±0,57* 6,61±0,68* 6,82±0,93* 7,44±1,32* 7,68±1,43* 7,44±1,38* 0,369±0,103 1,62±0,21 4,21±0,65* 3,72±0,46 * 2,52±0,31 * 1,17±0,23* 0,734±0,092 * 0,592±0,064 * 0 5 75784 6 ЧКУ- 3-(5-аміноурацил)-5,6-бензокумарину; лБКУ- ліпосомальний препарат БКУ. Результати досліджень показали, що препарат загибелі дослідних тварин. В той час, як БКУ володіє протипухлинною активністю, оскільки ліпосомальний препарат БКУ поряд з його висопри його введенні спостерігалося гальмування ким рівнем цитостатичної активності не зумовлюросту пухлини дослідних тварин впродовж всього вав загибелі організму пухлиноносія. експерименту. Отже, пролонгований протипухлинний ефект Поряд з цим відмічалася варіація показника лБКУ заслуговує особливої уваги, а властивість гальмування росту пухлини (ГРП) в межах 28-31%, ліпосом створювати депо протипухлинного препаа у 10% спостерігалася повна регресія новоутворату в організмі відкриває нові перспективи для рення. З отриманих результатів видно, що БКУ зниження дози цитостатика, а також моделювання володіє протипухлинною активністю, проте ця режиму його введення. активність фіксується на сталому рівні протягом Виражена м'якша дія лБКУ проявляється і у усього експерименту. Таку відносно невисоку показниках збільшення тривалості житя (ЗТЖ) активність БКУ можна пояснити тим, що його дія (рис. З, табл. 2). Зокрема, щоденне per os введенне є пухлинне спрямованою (пасивна), а розподіл ня лБКУ збільшувало тривалість життя дослідних препарату відбувається по усіх тканинах тварин на 71 %. Це вказує на його низьку організму. токсичність у порівнянні з 5-фторурацилом, при З метою подолання пасивного розподілу БКУ в введенні якого показник збільшення тривалості організмі пухлиноносія та підвищення його житя зменшувався на 60%. активності, шляхом збільшення концентрації у Отже, ліпосомальна модифікація БКУ пухлині, препарат було введено у ліпосоми. Завдозволяє вирішити дві проблеми застосування дяки своїм колоїдним властивостям, невеликим похідних урацилу для лікування злоякісних новорозмірам, поверхневій активності, утворень, оскільки дана форма БКУ збільшує його мембранотропності та біосумісності ліпосоми зацитостатичну активність поряд зі зниженням безпечують доставку препаратів у кров'яне русло з токсичної дії препарату. мінімальними змінами його структури та Джерела інформації: активності. Проникаючи через кровоносні капіляри 1. Экспериментальная оценка противоопухоновоутворення, вони потрапляють безпосередньо левых препаратов в СССР и США / под ред. 3. П. у пухлину, "звільняючи" там свій вміст. Це пояснює Софьиной, А. Б. Сыркина (СССР), А. Голдина, А. високий рівень цитостатичної активності Кляйна (США). - М.: Медицина, 1979. - 296 с. ліпосомального БКУ (лБКУ), що проявляється у 2. Ансамбли циклов с кумариновым звеном // зростанні відсотку гальмування росту пухлини Фізіологічне активні речовини. - 2001. - № 3. - С. 25 (ГРП) до 89 % на 26-у добу експерименту, а також - 28. повною регресією карциноми Герена у 50% 3. Будкер В.Г., Вахрушева Т.Е., Кеселева Е.В., дослідних тварин. Христолюбова Н.Б. Получение липосом с лекарГальмування росту пухлини (90%) ственными препаратами // Химикоспостерігалося і при введенні 5-фторурацилу, але фармацевтический журнал. - 1987. - № 1. - С. 347 висока токсичність препарату призводила до 352. Таблиця 2 Протипухлинна активність різних форм БКУ у порівнянні з 5-фторурацилом Препарат БКУ ЛБКУ 5-фторурацил Доза, мг/кг 6 6 7,5 10 29 37 95 ГРП,% (доба) 14 17 21 30 31 30 38 62 74 Примітка: БКУ- 3-(5-аміноурацил)-5,6-бензокумарину; лБКУ - лыпосомальний препарат БКУ, ГРП - гальмування росту пухлини; ЗТЖ - збільшення тривалості життя. ЗТЖ,% 26 28 89 19 71 -60% Загибель від токсичності% 0 0 100 Регресія пухлини,% 10 50 100 7 Комп’ютерна верстка М. Клюкін 75784 8 Підписне Тираж 26 прим. Міністерство освіти і науки України Державний департамент інтелектуальної власності, вул. Урицького, 45, м. Київ, МСП, 03680, Україна ДП “Український інститут промислової власності”, вул. Глазунова, 1, м. Київ – 42, 01601