Спосіб розмноження проса лозоподібного (panicum virgatum l.)

Реферат: Спосіб розмноження проса лозоподібного (Panicum virgatum L.) включає стерилізацію насіння, культивування на модифікованому середовищі Мурасіге і Скуга та укорінення на модифікованому середовищі Мурасіге і Скуга. Стерилізацію насіння здійснюють розчином Білизни. Для розмноження у середовище Мурасіге і Скуга додають БАП та цукрозу, для укорінення у середовище Мурасіге і Скуга додають ІОК та НОК і цукрозу. Культивування проводять при 16-годинному фотоперіоді при температурі 22±2 °C з інтенсивністю освітлення 4000-4500 лк, відносній вологості 70-80 %. UA 76599 U (54) СПОСІБ РОЗМНОЖЕННЯ ПРОСА ЛОЗОПОДІБНОГО (PANICUM VIRGATUM L.) UA 76599 U UA 76599 U 5 10 15 20 25 30 35 40 45 50 55 60 Корисна модель належить до галузі сільського господарства і може бути використана для отримання розсади проса лозоподібного. В даний час просо лозоподібне - (Panicum virgatum L.) є новою перспективною енергетичною культурою, що належить до багаторічних злакових культур. За сукупністю ознак та спільних етапів близьким до корисної моделі, є отримання рослин проса лозоподібного за допомогою сегментів міжвузлів (Alexandrova К. S., Dencher P. D., and Conger B. V. (1996 b) Micropropagation of switchgrass by node culture. Crop Sci. 36, 1709-1711). Відомий спосіб передбачає введення у стерильну культуру сегментів міжвузлів рослин проса лозоподібного, використовуючи хлорамін 35 % та експозицію 60 хвилин. В подальшому стерильні експлантати висаджують на модифіковане живильне середовище за прописом Мурасіге і Скуга (БАП (бензиламінопурин) 12 мк-моль і мальтоза - 30 г/л) для клонального мікророзмноження, що дає змогу отримати п'ять нових пагонів від одного при температурі культивування 29 °C та довжині фотоперіоду 16 годин. При досягненні достатньої кількості рослин, їх в подальшому висаджують для укорінення на модифіковане живильне середовище Мурасіге і Скуга, яке містить НОК (нафтилоцтова кислота) - 1,0 мг/л та 30 г/л мальтози. На 14 добу відбувається укорінення рослин, які потім висаджують у ґрунт. Відомий і пропонований способи вегетативного розмноження мають спільні ознаки: стерилізація експлантатів, живильні середовища для розмноження та укорінення, пересадка укорінених рослин у ґрунт. Така суттєва ознака, як отримання розсади проса лозоподібного за допомогою культури in vitro, співпадає з суттєвою ознакою пропонованого способу. Проте, відомий спосіб клонального мікророзмноження проса не забезпечується достатньої стерильності експлантатів, високого коефіцієнту розмноження і ризогенезу та потребує більшого терміну культивування рослин до пересадки у ґрунт. В основу корисної моделі поставлена задача удосконалити спосіб розмноження проса лозоподібного для отримання високого виходу стерильних життєздатних експлантатів і збільшення коефіцієнта розмноження рослин, оптимізувавши склад живильного середовища шляхом введення в нього для розмноження 6-Бензиламінопурину (БАП), для укорінення індолілоцтову (ІОК) і нафтилоцтову (НОК) кислоти та використавши цукрозу. Поставлена задача вирішується тим, що у відомому способі розмноження проса лозоподібного із міжвузлів, що включає стерилізацію сегменти міжвузлів хлораміном 35 % за експозиції 60 хвилин, приготування модифікованого середовища Мурасіге і Скуга для розмноження, доповненого БАП 12 мк-моль і мальтоза - 30 г/л і укорінення доповненого НОК1,0 мг/л та 30 г/л мальтози та культивування стерильних пагонів за температури 29 °C та довжини фотоперіоду 16 годин. Згідно з корисною моделлю для стерилізації насіння використовують Білизну - 35 %, що забезпечує 85-90 % виходу стерильних життєздатних експлантатів, в середовище для розмноження додається БАП 0,5-1,0 мг/л та цукроза 30 г/л при культивуванні при температурі 22±2 °C та довжині фотоперіоду 16 годин. У середовище для укорінення додається НОК та ІОК 0,5-0,8 мг/л та цукроза 30 г/л, що забезпечує високий відсоток укорінених рослин, придатних для пересадки у польові умови на 10-12 добу. Новими, відмінними від існуючого прототипу ознаками є: - введення в стерильну культуру насіння; - використання для стерилізації Білизни - 35 %; - експозиція 40-45 хвилин; - додавання у середовище для розмноження БАП-0,5-1,0 мг/л та цукрози 30 г/л; - використання цукрози; - для укорінення рослин додавання НОК та ІОК 0,8-1,0 мг/л; - знижена температура при культивуванні 22±2 °C; - висаджування рослин у ґрунт на 10-12 добу. Відмінні від прототипу ознаки при взаємодії з відомими дають можливість забезпечити високий вихід стерильних життєздатних експлантатів і збільшити коефіцієнт розмноження рослин, оптимізувати склад модифікованого живильного середовища. Ефективність нового способу розмноження проса лозоподібного у культурі in vitro вивчався на насінні таких сортів: Kanlow, Dacotach, Nebraska, Sunburst, Alamo, Forestburg, Shelter, Cavein-Rock, Carthage. Дослідженнями установлено, що використання 35 % Білизни експозицією 40-45 хвилин забезпечує стерильність експлантатів на 85-90 % їх життєздатності. Зниження температури до 22±2 °C при культивуванні та додавання при розмноженні БАП- 0,5-1,0 мг/л та цукрози 30 г/л дозволило збільшити коефіцієнт розмноження та отримати 8-10 додаткових пагонів. При укоріненні додають у живильне середовище гормони НОК та ІОК 0,5-0,8 мг/л та цукрози 30 г/л, 1 UA 76599 U 5 10 що дає можливість пришвидшити їх укорінення і отримати рослини, які можна висаджувати у польові умови на 10-12 добу. Спосіб розмноження проса лозоподібного здійснюється при виконанні таких етапів: насіння миють у проточній та мильній воді, експлантати поверхнево стерилізують розчином 35 % Білизни експозицією 40-45 хвилин і поміщають на модифіковане живильне середовище за прописом Мурасіге і Скуга для індукції пагоноутворення. Для розмноження додають у середовище БАП- 0,5-1,0 мг/л та цукрозу 30 г/л, що забезпечує отримання 8-10 нових пагонів. В подальшому рослини пересаджують для укорінення додаючи в живильне середовище Мурасіге і Скуга НОК та ІОК 0,5-0,8 мг/л та цукрози 30,0 г/л. Рослини культивують при температурі 22±2 °C, 16-годинному фотоперіоді з інтенсивністю освітлення 4000-4500 лк, відносній вологості 70-80 %. Укорінені рослини пересаджують у польові умови на 10-12 добу. Таблиця Показники ефективності використання запропонованого способу розмноження проса лозоподібного Показники Стерилізація Експозиція, хвилин Експлантат Стерильність експлантатів, % Мінеральна основа середовища для розмноження і укорінення Гормони БАП мг/л ІОК мг/л НОК мг/л Кількість новоутворених пагонів, шт. Вуглеводи, г/л Довжина фотоперіоду, годин Температура культивування, °C Коефіцієнт розмноження 15 Відомий спосіб хлорамін - 35 % 60 сегменти міжвузля 50-62 Запропонований спосіб білизна - 35 % 40-45 насіння 85-90 MS MS 12 мк-моль 1,0 5 мальтоза, 30 г/л 16 29 5 0,5-1,0 мг/л 0,5-0,8 мг/л 0,5-0,8 мг/л 8-10 цукроза, 30 г/л 16 22±2 8-10 Впровадження запропонованої корисної моделі дає змогу отримати 85-90 % стерильних життєздатних експлантатів, збільшити коефіцієнт розмноження вдвічі та зменшити термін культивування рослин. ФОРМУЛА КОРИСНОЇ МОДЕЛІ 20 25 Спосіб розмноження проса лозоподібного (Panicum virgatum L.), що включає стерилізацію насіння, культивування на модифікованому середовищі Мурасіге і Скуга та укорінення на модифікованому середовищі Мурасіге і Скуга, який відрізняється тим, що стерилізацію насіння здійснюють 35 % розчином Білизни експозицією 40-45 хвилин, для розмноження у середовище Мурасіге і Скуга додають БАП 0,5-1,0 мг/л та цукрозу 30 г/л, для укорінення у середовище Мурасіге і Скуга додають ІОК 0,5-0,8 мг/л та НОК 0,5-0,8 мг/л і 30 г/л цукрози, культивування проводять при 16-годинному фотоперіоді при температурі 22±2 °C з інтенсивністю освітлення 4000-4500 лк, відносній вологості 70-80 %. Комп’ютерна верстка І. Скворцова Державна служба інтелектуальної власності України, вул. Урицького, 45, м. Київ, МСП, 03680, Україна ДП “Український інститут промислової власності”, вул. Глазунова, 1, м. Київ – 42, 01601 2