Спосіб індукції калюсогенезу у міскантусу

Реферат: UA 79981 U UA 79981 U 5 10 15 20 25 30 35 40 45 50 55 60 Корисна модель належить до галузі сільського господарства і може бути використана в сільськогосподарській біотехнології, селекції, зокрема для створення, розмноження і отримання розсади цінних селекційних матеріалів. Калюс - щільна тканина різних відтінків, що складається з паренхімних клітин різного розміру, розташованих неупорядковано. Клітини калюса мають крупні ядра та відносно товсті клітинні стінки. Морфогенний калюс може дати початок будь-якій тканині або органу рослини. В калюсі можуть закладатися додаткові корені та бруньки. Також калюс використовують для отримання культури ізольованих тканин. Відомим і найбільш близьким до корисної моделі є спосіб здатності експлантів черешків і листкових пластинок цукрових буряків до калюсогенезу та прямої регенерації (Редько В.І., Роїк MB., Бех Н.С., Недяк Т.М., Слуцька Н.П. //Збірник наукових праць. "Досягнення і проблеми генетики, селекції та біотехнології ". Т.2. - К.: Логос, 2007. - С. 556-560. За даного способу проводять введення в стерильну культуру рослинного матеріалу цукрових буряків. Для стерилізації використовують 0,04-0,2 % сулему та експозицію протягом 30-40 хвилин, потім промивають стерильною водою та висаджують їх на модифіковане живильне середовище Гамборга і Евелега (В5), доповнене БАП- 0,5 мг/л, НОК - 2,0 мг/л, цукроза - 30,0 г/л. Культивування відбувається упродовж 40 діб за температури 24±2 °C та при 16 годинному фотоперіоді з інтенсивністю освітлення 4000-4500 лк. Індукція калюсу із листкових пластинок і черешків цукрових буряків становить - 2-14 %. Відомий і пропонований способи індукції калюсогенезу мають спільні ознаки: введення в стерильну культуру експлантів, стерилізація вихідного матеріалу, розмір експлантів, приготування живильних середовищ, культивування та довжина фотоперіоду. Проте, спосіб здатності експлантів черешків і листкових пластинок цукрових буряків до калюсогенезу та прямої регенерації не забезпечує індукцію калюсу у міскантусу та не дає можливості отримати достатньою кількість стерильного матеріалу. В основу корисної моделі поставлена задача удосконалити спосіб індукції калюсогенезу у міскантусу, що дозволить удосконалити стерилізацію вихідного матеріалу і склад живильного середовища та отримати індукцію калюсу із листкових пластинок міскантусу. Поставлена задача вирішується тим, що у відомому способі здатності експлантів черешків і листкових пластинок цукрових буряків до калюсогенезу та прямої регенерації використовують для введення в стерильну культуру цукрових буряків. Для стерилізації використовують 0,040,2 % розчин сулеми та експозиції 30-40 хвилин та проводять промивання насіння стерильною водою. Стерильність експлантів становить 70,0 %. В подальшому висаджують проростки на модифіковане живильне середовище Гамборга і Евелега (В5), доповнене: БАП - 0,5 мг/л, НОК 2,0 мг/л, цукроза - 30,0 г/л. На стерильних листових пластинках або черешках розміром 5-6 мм робили насічки для індукції калюсогенезу. Індукція калюсу із листкових пластинок і черешків цукрових буряків становить - 2-14 %. Культивування відбувається упродовж 40 діб за температури 24±2 °C та при 16 годинному фотоперіоді з інтенсивністю освітлення 4000-4500 лк. У запропонованому способі проводять матеріалу міскантусу та його клональне мікророзмноження. Використовують для стерилізації розчин Білизни - 35 % за експозиції 35 хвилин і промивають дистильованою водою. На живильне середовище за прописом Мурасіге і Скуга модифіковане БА - 0,8-1,0 мг/л, ІОК - 0,8 мг/л, НОК - 0,8 мг/л та кінетик - 1,0 мг/л. Культивування проводили за температури 24±2 °C при 16 годинному фотоперіоді з інтенсивністю освітлення 4000-4500 лк. Індукція калюсу становила 15-25 %. Новими відмінними від існуючого прототипу ознаками є: - введення в стерильну культуру міскантусу; - використання для стерилізації розчину Білизни 35 %; - експозиція 35 хвилин; - додавання у середовище БА - 0,8-1,0 мг/л, ІОК - 0, 8 мг/л, НОК -0, 8 мг/л та кінетину 1,0 мг/л. Відмінні від прототипу ознаки при взаємодії з відомими дозволяють отримати індукцію калюсу із черешків та листкових пластинок міскантусу, підібрати і удосконалити стерилізацію вихідного матеріалу і склад живильного середовища, знизити затрати на отримання морфогенного калюсу і наступну регенерацію із нього рослин, збільшити відсоток індукції калюсу до 25 %. Ефективність нового способу отримання калюсу міскантусу вивчали на п'яти сортах: New, Late, Sinensis, Sachariflorus, Early. Згідно з результатами досліджень видно, що використання у відомому способі для стерилізації матеріалу розчину 0,04-0,2 % сулеми упродовж 30-40 хвилин забезпечує стерильність експлантів, але не забезпечує їх життєздатність. Використання 35 % розчину 1 UA 79981 U 5 10 15 Білизни за експозиції 35 хвилин для міскантусу, дозволяє отримати не тільки стерильний, а й життєздатний матеріал на 90,0 %. Зміна та модифікування живильного середовища за прописом Мурсіге і Скуга з додаванням БА - 0,8-1,0 мг/л, ІОК - 0,8 мг/л, НОК - 0,8 мг/л та кінетину 1,0 мг/л дозволили отримати індукцію калюсогенезу у міскантусу із листкових пластинок від 15 до 25 %. Важливим є для зниження собівартості живильного середовища зменшення концентрації БА до 0,8-1,0 мг/л від 5,0 мг/л. Спосіб індукції калюсогенезу у міскантусу здійснюється таким чином: за вихідний матеріал використовують насіння міскантусу. Проводять стерилізацію 35 % розчином Білизни за експозиції 35 хвилин і промивають дистильованою водою, що дозволяє отримати 90,0 % стерильного матеріалу. Пересаджування проростків проводять на модифіковане живильне середовище за прописом Мурасіге і Скуга доповнене БА - 0,8-1,0 мг/л, ІОК - 0,8 мг/л, НОК - 0,8 мг/л та кінетином 1,0 мг/л. Стерильні листкові пластинки розміром 5-6 мм із насічками культивують упродовж 40 діб за температури 24±2 °C при довжині фотоперіоду 16 годин з інтенсивністю освітлення 4000-4500 лк, відносній вологості 70-80 %. Індукція калюсу становить 15-25 % (табл. 1.). Таблиця 1 Показники ефективності використання запропонованого способу індукції калюсогенезу у міскантусу Показники Стерилізація Експозиція, хвилин Експлант Розмір експланту, мм Стерильність експлантів, % Мінеральна основа середовища БАП мг/л БА мг/л ІОК мг/л НОК мг/л Кінетин, мг/л Цукроза, г/л Маса глобули, мг Культивування, діб Довжина фотоперіоду, годин Температура культивування, °C 20 Відомий спосіб Запропонований спосіб Сулема 0,04-0,2 % Білизна 35 % 30-40 35 черешки та листові листові пластинки пластинки 5-6 5-6 70,0 90,0 В5 MS 5,0 0,8-1,0 0,8 2,0 0,8 1,0 30,0 30,0 2-14 15-25 40 40 16 16 24±2 24±2 Впровадження запропонованої корисної моделі дає можливість отримати індукцію калюсу із листкових пластинок міскантусу, підібрати і удосконалити стерилізацію вихідного матеріалу і склад живильного середовища, знизити затрати на отримання морфогенного калюсу і наступну регенерацію із нього рослин. ФОРМУЛА КОРИСНОЇ МОДЕЛІ 25 30 Спосіб індукції калюсогенезу у міскантусу, що включає введення в стерильну культуру експлантів, стерилізацію вихідного матеріалу, розмір експлантів, приготування живильного середовища, культивування та довжину фотоперіоду, який відрізняється тим, що як експлант використовують міскантус, який стерилізують 35 % розчином Білизни за експозиції 30 хвилин, для індукції морфогенезу у модифіковане живильне середовище за прописом Мурасіге і Скуга додають БА - 0,8-1,0 мг/л, ІОК - 0,8 мг/л, НОК - 0,8 мг/л та кінетин - 1,0 мг/л. Комп’ютерна верстка Д. Шеверун Державна служба інтелектуальної власності України, вул. Урицького, 45, м. Київ, МСП, 03680, Україна ДП “Український інститут промислової власності”, вул. Глазунова, 1, м. Київ – 42, 01601 2