Спосіб отримання калюсу із пиляків міскантусу у культурі in vitro
Номер патенту: 79701
Опубліковано: 25.04.2013
Автори: Роїк Микола Володимирович, Недяк Татьяна Миколаївна, Войтовська Вікторія Іванівна, Бех Наталія Степанівна
Формула / Реферат
Спосіб отримання калюсу із пиляків міскантусу у культурі in vitro, що включає попередню холодову обробку вихідного матеріалу при температурі +4 °C, стерилізацію матеріалу, приготування живильних середовищ, який відрізняється тим, що як експлант використовують пиляки міскантусу, які стерилізують ультрафіолетовим опроміненням за експозиції 30 хвилин, для індукції морфогенезу у модифіковане живильне середовище за прописом Мурасіге і Скуга додають БА - 0,8 мг/л, ІОК - 0,8-1,0 мг/л, дроп - 0,5 мг/л і 30 г/л цукрози.
Текст
Реферат: Спосіб отримання калюсу із пиляків міскантусу у культурі in vitro включає попередню холодову обробку вихідного матеріалу, стерилізацію, приготування живильних середовищ. При цьому як експлант використовують пиляки міскантусу, які стерилізують ультрафіолетовим опроміненням, а для індукції морфогенезу у модифіковане живильне середовище за прописом Мурасіге і Скуга додають БА, ІОК, дроп і цукрозу. UA 79701 U (54) СПОСІБ ОТРИМАННЯ КАЛЮСУ ІЗ ПИЛЯКІВ МІСКАНТУСУ У КУЛЬТУРІ IN VITRO UA 79701 U UA 79701 U 5 10 15 20 25 30 35 40 45 50 55 60 Корисна модель належить до галузі сільського господарства і може бути використана в сільськогосподарській біотехнології, селекції, зокрема для створення, розмноження і отримання розсади цінних селекційних матеріалів. Гаплоїди мають одинарний набір хромосом і для їх отримання необхідно не соматичні, а статеві клітини, які є у рослин в чоловічому або жіночому гаметофіті. Отримувати гаплоїди можливо різними шляхами, як в культурі in vitro так і в in vivo. У селекційно-генетичних дослідженнях гаплоїдні рослини використовують для вирішення таких питань: отримання гомозиготних диплоїдних ліній в гетерозисній селекції шляхом подвоєння гаплоїдів; для створення ряду анеуплоїдів; для отримання тетраплоїдів у поліплоїдних видів рослин; для подолання міжвидової несумісності; для декоративного квітникарства; для мутаційної селекції; для генетичного аналізу. Відомим і найбільш близьким до корисної моделі є спосіб (Редько В.І., Роїк М.В., Недяк Т.М., Бех Н.С. Одержання гаплоїдних рослин цукрових буряків з ізольованих недозрілих зачатків // Цукрові буряки. - К., 2006.- № 6. - С. 23-26). За цього відомого способу проводять попередню холодову обробку квіткових пагонів при температурі +4 °C до 8 діб. Для стерилізації пагонів з пуп'янками використовують 5-10 % розчин хлораміну протягом 30 хвилин, потім промивають стерильною водою. Ізолювання насіннєвих зачатків із закритих пуп'янків проводять в асептичних умовах під стереоскопічним мікроскопом МБС-1 або збільшуваною лупою, відриваючи пінцетом пуп'янок від пагона і руйнуючи голкою шар паренхімних клітин нижньої частини зав'язі та висаджують їх на модифіковане живильне середовище Гамборга і Евелега (В5), доповнене біотином 10,0 мг/л, НОК - 0,5 мг/л, дроп 1,0 мг/л. Культивування незапліднених насіннєвих зачатків відбувається упродовж 2-3 тижнів у темряві за температури 27-33 °C, а потім при 16 годинному фотоперіоді з інтенсивністю освітлення 2000-3000 лк. Відомий і пропонований способи отримання гаплоїдних рослин мають спільні ознаки: попередня холодова обробка вихідного матеріалу за температури +4 °C, стерилізація матеріалу, приготування живильних середовищ. Проте, спосіб одержання гаплоїдних рослин цукрових буряків з ізольованих недозрілих зачатків не забезпечує індукцію гаплоїдних рослин у міскантусу та не дає можливості отримати достатню кількість стерильного матеріалу. В основу корисної моделі поставлена задача удосконалити спосіб отримання гаплоїдних рослин міскантусу, що дозволить отримати індукцію гаплоїдних рослин міскантусу із пиляків та удосконалити стерилізацію рослинного матеріалу і склад живильного середовища. Поставлена задача вирішується тим, що у відомому способі стерилізують пагони з пуп'янками, використовуючи 5-10 % розчин хлораміну протягом 30 хвилин, потім промивають стерильною водою. Попередньо проводять холодову обробку квіткових пагонів при температурі +4 °C до 8 діб. Ізолювання насіннєвих зачатків із закритих пуп'янків проводять в асептичних умовах під стереоскопічним мікроскопом МБС-1 або збільшуваною лупою, відриваючи пінцетом пуп'янок від пагона і руйнуючи голкою шар паренхімних клітин нижньої частини зав'язі та висаджують їх на модифіковане живильне середовище Гамборга і Евелега (В 5), доповнене біотином 10,0 мг/л, НОК 0,5 мг/л, дроп 1,0 мг/л. Культивування відбувається упродовж 2-3 тижнів у темряві за температури 27-33 °C, а потім при 16 годинному фотоперіоді з інтенсивністю освітлення 2000-3000 лк. У запропонованому способі використовують пагони міскантусу, із яких вилучають пиляки, яким попередньо проводять холодову обробку при температурі +4 °C до 2 діб та стерилізують їх ультрафіолетовим опроміненням за експозиції 30 хвилин і промивають дистильованою водою, що дозволяє отримати 87,5 % стерильного матеріалу. Використовують модифіковане живильне середовище Мурасіге і Скуга з доданням БА - 0,8 мг/л, IOК - 0,8-1,0 мг/л, дроп - 0,5 мг/л та цукрози 30 г/л. Культивування за температури 24±2 °C у темряві упродовж 2 тижнів, а потім при 16 годинному фотоперіоді з інтенсивністю освітлення 2000-3000 лк. Новими відмінними від існуючого найближчого аналога ознаками є: введення в стерильну культуру пиляків міскантусу; використання для стерилізації ультрафіолетового опромінення; експозиція 30 хвилин; додавання у середовище БА - 0,8 мг/л та цукрози 30 г/л, ІОК - 0,8-1,0 мг/л, дроп - 0,5 мг/л; цукроза - 30,0 г/л. 1 UA 79701 U 5 10 15 20 Відмінні від найближчого аналога ознаки при взаємодії з відомими дозволяють отримати індукцію гаплоїдних рослин міскантусу із пиляків, удосконалити та знизити витрати на стерилізацію вихідного матеріалу і склад живильного середовища. Ефективність нового способу отримання гаплоїдних рослин міскантусу вивчали на п'яти сортах: New, Late, Sinensis, Sachariflorus, Early. Результати досліджень вказують, що використання 5-10 % розчину хлораміну протягом 30 хвилин забезпечує стерильність експлантів, але не забезпечує їх життєздатність. Використання ультрафіолетового опромінення за експозиції 30 хвилин для таких невеликих експлантів як пиляки, дозволяє отримати не тільки стерильний, а й життєздатний матеріал на 87,5 %. Зміна та модифікування живильного середовища за прописом Мурсіге і Скуга з додаванням БА - 0,8 мг/л, дроп - 0,5 мг/л, цукрози 30,0 г/л, ІОК - 0,8-1,0 мг/л дозволили отримати індукцію гаплоїдних рослин міскантусу із пиляків. Слід відзначити, що холодову обробку матеріалу зменшили до 2 діб. Спосіб отримання калюсу із пиляків міскантусу у культурі in vitro здійснюється таким чином: вихідним матеріалом слугують сегменти волоті, із яких вилучають пиляки міскантусу. Їх піддають холодовій обробці при температурі +4 °C до 2 діб. Стерилізацію здійснюють ультрафіолетовим опроміненням за експозиції 30 хвилин і промивають дистильованою водою, що дозволяє отримати 87,5 % стерильного матеріалу. Пересаджування матеріалу проводять на модифіковане живильне середовище за прописом Мурасіге і Скуга (БА 0,8 мг/л, ІОК - 0,8-1,0 мг/л, дроп - 0,5 мг/л, цукроза - 30,0 г/л) та культивують за температури 24±2 °C у темряві упродовж 2 тижнів, а потім при довжині фотоперіоду 16 годин з інтенсивністю освітлення 20003000 лк (таблиця). Таблиця Показники ефективності використання запропонованого способу отримання калюсу із пиляків міскантусу у культурі in vitro Показники Відомий спосіб Стерилізація Хлорамін - 10 % Експозиція, хвилин Експлант Холодова обробка, діб Стерильність експлантів, % Мінеральна основа середовища БА мг/л ІОК мг/л НОК мг/л Дроп, мг/л Біотин, мг/л Цукроза, г/л Індукція калюсу, % Температура холодової обробки, °C Довжина фотоперіоду, годин Температура культивування, °C 25 30 пагони 8 53,0 В5 0,5 1,0 10,0 63,0 4 16 24±2 Запропонований спосіб Ультрафіолетове опромінення 30 пиляки 2 87,5 MS 0,8 0,8-1,0 0,5 30,0 63,0 4 16 24±2 Впровадження запропонованої корисної моделі дає можливість отримати калюс із пиляків міскантусу у культурі in vitro, підібрати і удосконалити склад живильного середовища, зменшити затрати на індукцію гаплоїдних рослин. ФОРМУЛА КОРИСНОЇ МОДЕЛІ 30 35 Спосіб отримання калюсу із пиляків міскантусу у культурі in vitro, що включає попередню холодову обробку вихідного матеріалу при температурі +4 °C, стерилізацію матеріалу, приготування живильних середовищ, який відрізняється тим, що як експлант використовують пиляки міскантусу, які стерилізують ультрафіолетовим опроміненням за експозиції 30 хвилин, для індукції морфогенезу у модифіковане живильне середовище за прописом Мурасіге і Скуга додають БА - 0,8 мг/л, ІОК - 0,8-1,0 мг/л, дроп - 0,5 мг/л і 30 г/л цукрози. 2 UA 79701 U Комп’ютерна верстка І. Мироненко Державна служба інтелектуальної власності України, вул. Урицького, 45, м. Київ, МСП, 03680, Україна ДП “Український інститут промислової власності”, вул. Глазунова, 1, м. Київ – 42, 01601 3
ДивитисяДодаткова інформація
Назва патенту англійськоюMethod for obtaining callus with miscanthus' anthers in culture in vitro
Автори англійськоюVoitovska Viktoria Ivanivna, Roik Mykola Volodymyrovych, Bekh Natalia Stepanivna, Nediak Tetiana Mykolaivna
Назва патенту російськоюСпособ получения каллюса с пыльниками мискантус в культуре in vitro
Автори російськоюВойтовская Виктория Ивановна, Роик Николай Владимирович, Бех Наталья Степановна, Недяк Татьяна Николаевна
МПК / Мітки
МПК: A01G 31/00, A01H 4/00
Мітки: vitro, калюсу, міскантусу, пиляків, спосіб, культури, отримання
Код посилання
<a href="https://ua.patents.su/5-79701-sposib-otrimannya-kalyusu-iz-pilyakiv-miskantusu-u-kulturi-in-vitro.html" target="_blank" rel="follow" title="База патентів України">Спосіб отримання калюсу із пиляків міскантусу у культурі in vitro</a>
Попередній патент: Спосіб визначення каріотипу у культуральних рослин міскантусу
Наступний патент: Спосіб отримання поліплоїдних форм світчграсу
Випадковий патент: Спосіб переобладнання та реконструкції трамвайного вагона