Спосіб отримання діагностичної гіперімунної сироватки крові до метапневмовірусу в птахівництві

Реферат: Спосіб отримання діагностичної гіперімунної сироватки крові до метапневмовірусу в птахівництві шляхом підшкірного введення тваринам-продуцентам антигену і наступного відбору крові із серця. Тваринами-продуцентами є кролі, яким на 1, 8, 15 та 29 добу вводять суміш антигену польового ізоляту МПВ-PV-3 з неповним ад'ювантом Фрейда у рівних об'ємах в 3 ділянці стегон та лопаток в об'ємі 1 см та додатково - сполуку супроводу з імуномодулюючою активністю піперидинію 2-(5-(піридил-4-іл)-1,2,4-тріазол-3-ілтіо) ацетат внутрішньом'язово по 1 3 см . Відбір крові здійснюють через 14 діб після останнього введення антигену. UA 83752 U (12) UA 83752 U UA 83752 U 5 10 15 20 25 30 35 40 45 50 55 Корисна модель стосується ветеринарної імунології, вірусології, епізоотології та біотехнології, зокрема, способів одержання специфічних імунних сироваток, і може використовуватися у діагностиці метапневмовірусної інфекції (МПВІ) птиці. На сьогодні у ветеринарії та птахівництві серологічні методи оцінки здоров'я птахів залишаються головними діагностичними тестами поряд із епідеміологічними, клінічними та іншими діагностичними методиками. Проведення таких діагностичних досліджень необхідно для визначення можливих спалахів захворювання, а також для оцінки ефективності специфічної профілактики захворювань сільськогосподарських птахів. Відомий спосіб отримання діагностичної гіперімунної сироватки крові, який описаний у роботі Данко Л.Ю. (Культуральные и антигенные свойства метапневмовируса птиц / Автореф. Дис. на соискание ученой степени канд. вет. наук. Санкт-Петербург. - 2011. - 24 с.). Спосіб полягає у тому, що гіперімунні сироватки до вакцинних штамів метапневмовірусу 8455 і VC-03 отримували на 20-денних СПФ курчатах шляхом введення культуральної рідини в 5 дозі 10 ТЦД50 підшкірно в ділянці середньої третини шиї двічі з інтервалом 10 діб. Наступні ін'єкції проводили через 20 днів антигеном, сорбованим на 0,3 % гідроокисом алюмінію підшкірно в об'ємі 1 мл. Кров відбирали із серця на 28-30 добу після останнього введення, зберігали при температурі мінус 15-20 °C. Індекс нейтралізації отриманих сироваток крові в культурі клітин до гомологічних штамів склав 2,25 lg ТЦД50 і 1,77 ТЦД50 відповідно штаму. Спільними суттєвими ознаками прототипу і корисної моделі, що заявляється, є наступні: - підшкірне введення антигену, - відбір крові із серця. Але такий спосіб має певні вади. Отримання гіперімунних сироваток на курчатах 20-денного віку пов'язане з трудомісткістю виконання маніпуляцій, особливо відбору крові із серця. У курей маса крові у відсотковому відношенні до маси тіла складає від 6 до 10 %, в залежності від віку, що знижує можливість отримання достатньої кількості сироватки крові від донора. При введенні метапневмовірусу курчатам, які є чутливими природними господарями для цього вірусу, можливе виникнення клінічних проявів захворювання. В основу корисної моделі поставлено задачу удосконалення способу отримання діагностичної гіперімунної сироватки крові до метапневмовірусу (МПВ) в птахівництві шляхом використання як антигену епізоотичного штаму МПВ PV-3 із додатковим одночасним введенням сполуки триазолінового ряду піперидинію 2-(5-(піридил-4-іл)-1,2,4-тріазол-3-ілтіо) ацетат як такої, що має імуномодулюючу активністю, під час імунізації тварин-продуцентів та використанні як тварин-продуцентів - кролів, що забезпечить підвищення діагностичної ефективності отриманої сироватки внаслідок підвищення титру преципітуючих антитіл, більший вихід сироватки та скорочення термінів її отримання. Поставлена задача вирішується тим, що у способі, який полягає у підшкірному введенні тваринам-продуцентам антигену і наступному відборі крові із серця, новим є те, що тваринамипродуцентами є кролі, яким на 1, 8, 15 та 29 добу вводять суміш антигену польового ізоляту МПВ - PV-3 з неповним ад'ювантом Фрейда у рівних об'ємах в ділянці стегон та лопаток в об'ємі 3 1 см та додатково - сполуку супроводу з імуномодулюючою активністю піперидинію 2-(53 (піридил-4-іл)-1,2,4-тріазол-3-ілтіо) ацетат внутрішньом'язово по 1 см , а відбір крові здійснюють через 14 діб після останнього введення антигену. Причинно-наслідковий зв'язок між сукупністю ознак, що заявляються, та технічним результатом полягає у такому. Сполука супроводу піперидинію 2-(5-(піридил-4-іл)-1,2,4-тріазол-3-ілтіо) ацетат має імуномодулюючу активність, завдяки чому зменшується необхідність у додатковому навантаженні тварин антигенами. Гіперімунна сироватка, отримана запропонованим способом, має високий титр преципітуючих антитіл та скорочує термін гіперімунізації на 6-8 тижнів. Піперидинію 2-(5-(піридил-4-іл)-1,2,4-тріазол-3-ілтіо) ацетат додатково впливає на підвищення неспецифічної резистентності організму, таким чином взагалі підвищується стійкість організму до вірусних захворювань. Використаний польовий ізолят МПВ (метапневмовірусу) та сполуки триазолінового ряду підвищують як титр преципітуючих специфічних антитіл, так і якість реакції імунної дифузії. Використання кролів для отримання гіперімунних сироваток до метапневмовірусу птахів з використанням імуномодулятору тріазолінового ряду запобігає можливому погіршенню клінічного стану тварин-продуцентів і забезпечує більший вихід гіперімунної сироватки. Запропонований спосіб отримання сироватки дає змогу прискорити термін її отримання. Спосіб здійснюють таким чином. 1 UA 83752 U 5 10 15 20 25 Приклад. Ізолят МПВ PV-3 після культивування в культурі клітин Vero піддавали очищенню та концентрації сульфатом амонію та ПЕГ-600. Як тварин-продуцентів використовували кролів. Гіперімунізацію кролів проводили очищеним антигеном МПВ - PV-3. Вірусний матеріал змішували з неповним ад'ювантом Фрейда (НАФ) у 3 рівних об'ємах і вводили кролям підшкірно в дозі 1 см у ділянці лопаток та стегон, а сполуку супроводу піперидинію 2-(5-(піридил-4-іл)-1,2,4-тріазол-3-ілтіо) ацетат вводили 3 внутрішньом'язово по 1 см . Зазначені субстанції уводили на 1, 8, 15 та 29 добу. Через 14 діб після останнього введення антигену кролів знекровлювали і отриману сироватку зберігали за температури -20 °C. Визначення рівня антигену у гіперімунній сироватці та індикацію МПВ у вірусутримуючих зразках проводили у реакції дифузної преципітації (РДП) в агаровому гелі, використовуючи 1,5 % концентрацію агару, пофарбованого метилоранжем та консервованого мертіолятом натрію. Розплавлений на водяній бані агар заливали у чашки Петрі завтовшки 3 мм, після чого пробійником в агарі робили отвори діаметром 5 мм. Інкубацію проводили за температури +37 °C у вологій камері впродовж 24 годин. За позитивну реакцію вважали утворення смуги преципітації між лунками в агарі з антигеном і сироваткою, що мала вигляд прямої одинарної лінії. Відсутність лінії вважали за негативний результат. Специфічність сироватки крові, отриманої до МПВ, встановлювали у перехресній РДП із вакцинним штамом Ла-Сота, вірусу Ньюкаслської хвороби та неінфікованими зразками екстраембріональної рідини куриних ембріонів, культуральної рідини клітин Vero та фібробластах перепелиних ембріонів. Гіперімунна сироватка, отримана на фоні використання сполуки супроводу піперидинію 2-(5(піридил-4-іл)-1,2,4-тріазол-3-ілтіо) ацетату, специфічно реагувала із антигеном МПВ PV-3, виявляючи його титр на рівні 5 Iog2. Таким чином, спосіб є високоефективним і дозволяє виявляти вірус як у нативному вірусутримуючому матеріалі, так і після культивування у різних біологічних системах. ФОРМУЛА КОРИСНОЇ МОДЕЛІ 30 35 Спосіб отримання діагностичної гіперімунної сироватки крові до метапневмовірусу в птахівництві, що здійснюють шляхом підшкірного введення тваринам-продуцентам антигену і наступного відбору крові із серця, який відрізняється тим, що тваринами-продуцентами є кролі, яким на 1, 8, 15 та 29 добу вводять суміш антигену польового ізоляту МПВ-PV-3 з 3 неповним ад'ювантом Фрейда у рівних об'ємах в ділянці стегон та лопаток в об'ємі 1 см та додатково - сполуку супроводу з імуномодулюючою активністю піперидинію 2-(5-(піридил-4-іл)3 1,2,4-тріазол-3-ілтіо) ацетат внутрішньом'язово по 1 см , а відбір крові здійснюють через 14 діб після останнього введення антигену. Комп’ютерна верстка Л. Литвиненко Державна служба інтелектуальної власності України, вул. Урицького, 45, м. Київ, МСП, 03680, Україна ДП “Український інститут промислової власності”, вул. Глазунова, 1, м. Київ – 42, 01601 2