Спосіб визначення антигенної новими вірусу грипу

СОЮЗ СОВЕТСНИХ СОЦИАЛИСТИЧЕСКИХ РЕСПУБЛИК / 3(51) q 1 2 N , 7 Р ° ГОСУДАРСТВЕННЫЙ НОМИТЕТ СССР ПО ДЕЛАМ ИЗОБРЕТЕНИЙ И ОТКРЫТИЙ И АВТОРСКОМУ СВИДЕТЕЛЬСТВУ (21) 3228215/28-33 (22) 2 4 . 1 1 . 8 0 (46) 1 5 . 0 8 . 8 3 . Бюл. № 30 (72) Г.С.Скрипченко, И.М.Безброж, А.Г.Власова и Т.М.Рыбакова (71) Одесский научно-исследовательский институт вирусологии и эпидемиологии им. И.И.Мечникова (53)Д 616-07(038.8) (56) 1 . Такачи Дж., Варб К. Новый метод выбора штамма вируса гриппа.• В к н . : Эпидемиология и профилактика гриппа в социалистических с т р а н а х , с т р . 140-145, 1975 ( п р о т о т и п ) . ( 5 4 ) ( 5 7 ) СПОСОБ ОПРЕДЕЛЕНИЯ АНТИГЕН-| НОЙ НОВИЗНЫ ШТАММОВ ВИРУСА ГРИППА путем обработки суспензий и с с л е ц у е мых вирусоЕ а н т и т е л а м и с последующим и н к у б и р о в а н и е м п о л у ч е н н о й смеси и определением специфического связывания а н т и т е л , о т л и ч а ю щ и й с я т е м , ч т о , с целью упрощения способа, суспензии вирусов обрабатывают п л а ц е н т а р н і ї г а м м а - г л о б у л и н о м , п о с л е и н к у б и р о в а н и я отделяют о б р а зовавшийся комплекс вирус-антитела и антигенную новизну вируса гриппа определяют по степени репродукции связанного с антителами вируса. СЛ 1 1035061 Изобретение относится к вирусолоП р и м е р 1, Аллантоисную гии и касается определения антигенжидкость, содержащую вирус А (Гонной новизны и эпидемичности вируса конг ) 1/68, соединяют Б равных колигриппа. чествах с пулами гамма-глобулина Известен способ определения анти1973-1979 годов производства (пул генной новизны штаммов вируса грип5 каждого года готовят раздельно). па путем обработки суспензий исслеСмеси инкубируют при 4 °С 2 4 ч. Задуемых вирусов антителами ко всем тем центрифугируют при 4x10-у 2 ч. исследуемым вирусам с последующим Осадки ресуспендируют в мединал-веинкубированием полученной смеси и роналовом буфере рН 8,6 в объеме, определением специфического связыва- 10 равном половине объема смеси. Полуния антител [ 1 ] . ченной после центрифугирования надОднако известный способ является осадочной жидкостью и ресуспендиротрудоемким. ванным осадком в разведениях Ю" 1 - . Цель изобретения - упрощение спо10~6заражают фрагменты Х О ( фрагменА соба. 15 ты хорионаллантоисных оболочек Поставленная цель достигается куриного эмбриона}.Инкубацию провотем, что согласно способу определе-* дят при 3 5,5°С 4 8 ч, наличие вируса ния антигенной новизны штаммов виопределяют в реакции гемагглютинаруса; гриппа, включающему обработку ции с 1%-ной взвесью куриных эритсуспензий исследуемых вирусов анти- 20 роцитов. В надосадочной жидкости телами с последующим инкубированием установлено отсутствие вируса. Виполученной смеси и определением рус перешел в осадок вместе с антиспецифического связывания антител, телами и находится с ними в прочной суспензии вирусов обрабатывают пласвязи, которая не разрушается при центарным гамма-глобулином, после ^с разведении комплекса. Вирус прочно инкубирования отделяют образовавсвязывается и полностью нейтрализушийся комплекс вирус-антитела и анется антителами, находящимися в тигенную новизну вируса гриппа опреплацентарном гамма-глобулине 1973деляют по степени репродукции свя1979 годов производства и, следозанного с антителами вируса. вательно, не обладает антигенной Способ осуществляют следующим 3" новизной. образом, Аллантоисную жидкость, содержаП р и м е р 2 . применяя методищую вирус, соединяют в равных колику, описанную в примере 1, опредечествах с пулами гамма-глобулина ляют антигенную новизну штаммов разных лет, смеси инкубируют при 35 вируса гриппа А ( Виктория) 3 5/72, '4°С 24^,4, центрифугируют при штамма вируса гриппа А ( Виктория) 4 х 10 Ь 2 ч. Осадки ресуспендируют 3/7 5, штамма вируса гриппа А (Тев мединал-вероналовом буфере хас) 1/77, штамма вируса гриппа А рН 8,6 в объеме, равном половине (Одесса ) 3/79. объема смеси. Надосадочной жидкостью 40 и ресуспендированным осадком в разВ таблице представлены данные о * ведениях Ю""1 - 10~б заражают кульпрочности комплекса штаммов вируса туру клеток, инкубируют при 35,5°С гриппа с антителами плацентарного 48 ч и наличие вируса определяют гамма-глобулина различных лет полув реакции гемагглютинации с 1%-ной 45 чения. взвесыо куриных эритроцитов. Если Антигенную специфичность испытуев надосадочной жидкости установлено мых вирусов определяют на осно- отсутствие вируса, то вирус не ха'-вании предварительного типирования % рактеризуется антигенной новизной. их в РТГА с коммерческими диагностиЕсли вирус не прочно связывается с ческими сыворотками. антителами одних лет и прочно с ан- -^, Специфичность антител оценивают тителами последующих лет и не обнапо наличию антигемагглютининов к руживается в надосадочной жидкости, испытуемым вирусам в плацентарном то он является антигенно более ногамма-глобулине. < вым по сравнению с первым, но не перспективным для отбора, так как 55 Использование изобретения позвохорошо связывается антителами посляет просто и быстро проводить опреледующих лет. Последовательно проводеление эпидемической актуальности дя эту процедуру со всеми вирусами, ( , вновь выделенных вирусов гриппа, отопределяют какой вирус обладает наибор штаммов для производства вакцин