2-(2,7-діацетоксіфлуореніліден-9-гідразоно)-5гептілідентіазолідон-4, що виявляє протигрипозну дію відносно віруса грипу а та а-2

ДЛЯ СЛУЖЕБНОГО ПОЛЬЗОВАНИЯ ЭКЗ N" Ь *J "к, СОЮЗ СОВЕТСНИХ СОЦИАЛИСТИЧЕСКИХ РЕСПУБЛИК (50 4 С 07 D 277/54, А 61 К 31/425 ГОСУДАРСТВЕННЫЙ КОМИТЕТ СССР ПО ДЕЛАМ ИЗОБРЕТЕНИЙ И ОТНРЫТИЙ ОПИСАНИЕ ИЗОБРЕТЕНИЯ К АВТОРСКОМУ СВИДЕТЕЛЬСТВУ (21) 4076052/28-04 (22) 09 в 06„86 (71) Львовский государственный медицинский институт (72) Л.И.Маслова, Л.В.Лозюк и Б 0 С 0 Зименковский (53) 5 4 7 о 7 8 9 о З о 0 3 ( 0 8 8 0 8 ) (56) Машковский М,Д0 Лекарственные средства,, Мо: Медицина, т . 2 , 1986, Со 380 0 Авторское свидетельство СССР № 1279217, кл 0 С 07 D 277/54, 1985 (непубликуемое) (5,4) 2-(2\7'-ДИАЦЕТОКСИФЛУОРЕНИЛИДЕН9' -ГИДРА30Н0)-5-ГЕПТИЛИДЕНТИА30ЛИДОН4, О Л Д Ю И ПРОТИВОГРИППОЗНЫМ ДЕЙБАА Щ Й СТВИЕМ В ОТНО0ІЕНИИ ВИРУСА ГРИППА А и А-2 О (57) Изобретение относится к г е т е р о циклическим соединениям, в частности к 2 - ( 2 ' , 7 '-диацетоксифлуоренилиден-9 гидразоно)-5-гептилидентиазолидону 5-88 4 О ) , обладающему противогриппозным действием в отношении вируса гриппа А и А-2, Цель изобретения - выявление новых соединений с указанным действием среди соединений указанного к л а с са,, Получение соединения Т ведут из смеси тиосемикарбазона 2,7-дигидрок*сифлуоренона-9, монохлоруксусной кислоты, гептилового альдегида и б е з водного ацетата натрия кипячением 10 ч в смеси ледяной уксусной кислоты и уксусного ангидрида (в соотношении 8 : 1 ) о Продукт выделяют и з в е с т ными приемами„ Выход 43,5%, т о п л 6 220-221°С. Брутто-формула C ( 7 H 2 7 N j O t & Испытания показывают, что соединение Т обладает высоким антигриппозным • действием в отношении РНК-геномных вирусов штамма A (WSN) и А (Англия) 42/72 (H3N2), увеличивает среднюю продолжительность жизни животных и процент выживаемости при LD 5 0 1000 мк/кг о 3 табл 0 О 1372888 Изобретение относится к новым химическим веществам, а именно к 2(2'.У'-диацетоксифлуоренилиден-Э' гидразоно)-5-гептилидентиазолидону-4, обладающему противогриппозным действием в отношении вируса гриппа А и A-2D Указанное свойство предполагает возможность применения этого соедине- 10 кия в качестве противогриппозного средства в медицине,, Цель изобретения - выявление противогриппозного действия произU водных 2-(фиуоренилиден-9 - г и д р а з о но)-5-тиазолидона-4, П р и м е р о Получение 2 - ( 2 ' , 7 ' диацетоксифлуоренилиден-9'-гидраэоно)5-гептшшдентиаэолидона-4 (соедине- t ниє ї } . 20 Смесь 2,85 г (0,1 моль) тиосемикарбазона 2,7-дигндроксифлуоренона-9, 1,03 г (О,011 моль) монохлоруксусной кислоты, 1,14 г (0,01 моль) гептило2 5 вого альдегида, 1,00 г безводного ацетата натрия кипятят 10 ч в 90 мл смеси ледяной уксусной кислоты и у к сусного ангидрида (в соотношении 8:1)о Затем реакционную массу кипя Установлено, что соединение Т оказывает сильное влияние на репродукцию вирусов гриппа типа А и А-2 . в системах in v i t r o , I n ovo, i n vivo I n v i t r o (инфицированные системы клетка-вирус; вирусом гриппа A (WSN) в дозе 10 ТЦД-50) показатели защиты составляют для ремантадина , 5,0 (до инфицирования)и 3,5 (после инфицирования), для соединения Т 3,5 (до инфицирования) и 3,2 (после инфицирования). Штамм А (Англия) 42/72 (H3N2), доза 10 ТЦД-50: показатели защиты ( l o g 2 ) составляет для • ремантадина 3,0 (до инфицирования) и 2,5(после инфицирования); для соединения Т 3,5 (до инфицирования) и 3,0 (после инфицирования)л ' I n ovo (инфицированные вирусом гриппа эмбрионы, штамм A (WSN), и н фицирующая доза 10 ЭИД-50) показатели 3amHTbi(log2.) составляют для ремантадина до инфицирования 3 , 2 , после инфицирования 2 , 7 ; для соединения Г до инфицирования 5,8, после инфицирования 4 , 5 0 Штамм А (Англия) 42/72 (H3N2), инфицирующая доза 10 • ЭИД-50: показатели защиты ( I o g 2 ) c o c тят с активированным углем, фильтруют,30 тавляют для ремантадина до инфицирок фильтрату прибавляют дистиллирования 2 , 9 , после инфицирования 2 , 0 ; ванную воду, осажденный продукт выдедля соединения 1 до инфицирования ляют известными приемами, сушат и п о 3,8, после инфицирования 3,2, лучают 2,2 г (43,5%) продукта в виде Результаты исследований представсветло-желтого мелкокристаллическо35 лены в табл.1-2 о го nopoDiKa, т о п л о 220-221 °С (этанолвода) с Соединение Г ингибирует репродукНайдено,%: С 6 4 , 4 6 ; Н 5,50'; цию вирусов А и А-2 в системе " к л е т N 8,49; S 6 , 1 0 . к а - в и р у с " , но активнее по сравнению CulH27N5S?Oe 40 с ремантадином в отношении штамма А Вычислено,%: С 6 4 , 1 4 ; Н 5 , 3 8 ; (Англия) 42/72 (H3N2), причем как N 8,31; S 6,34. до инфицирования системы вирусом, Максимумы поглощения в УФ-спектре так и после инфицирования (табл»1)» (в метаноле): изгиб 220-225 нм, В системе развивающихся куриных 239-240 им ( l g C 4 , 5 7 ) , изгиб 26545 эмбрионов, i n ovo соединение Т значи270 нм, 275-280 нм ( l g £ 4 , 4 2 ) , 325тельно превышает активность реманта345 нм широкая полоса. дина в отношении изученных штаммов ** Испытания соединения Т на наличие вирусов ( т а б л . 2 ) . противовирусной активности и опредеУстановлено, что соединение Т окаление его токсичности. 50 зывает профилактическое действие на Испытания противовирусной активмодели пневмонии мышей, вызванной ности соединения 1. адаптированным к легким вирусам Испытания проведены на вирусах гриппа А Англия/42/72 (H3N2) в инфигриппа штамм A (WSN) и штамм А(Ангцирующей дозе V, 10 и 100 ЛД Т О . Эфлия) 42/72 (H3N2) в сравнении с р е - 55 Фект зависит от времени введения и мантадином - эталоном сравнения продолжительности лечения. Результаты наиболее эффективным в настоящее в р е исследований представлены в т а б л . З , мя противогриппозным лекарственным Курс из пяти введений является более препаратом,, оптимальным, чем трехкратное внутри 37'2888 бркшинное применение. Запретный эффект штамма A(WSN)H А (Англия) 42/72 f выражен при использовании 100 мг/кг (H.3N2) в опытах i n v i t r o , i n ovo ( вещества внутримышечно и внутрибркгi n v i v o , увеличивает среднюю продол!йинноя Таксическкх проявлений и угнежительность жизни животных и процент тающего влияния на периферическую их выживаемости; характеризуется низкровь не обнаружено. Общее состояние кой токсичностью, что предполагает мышей опытных групп было хорошим и возможность его практического примене отличалось от "чистого" контроля нения в качестве противогриппозного (т.е. без заражения и лечения). 10 средства в медицинео Определение токсичности соединеФ о р м у л а и з о б р е т е н и я ния т о Токсичность соединения Г изучена 2 - ( 2 , 7 -Диацетоксифпуоренилиденна куриных эмбрионах и на модели "клетка-вирус"о Рабочая доза состав- 15 9 -гидразоно)-5-гептилидентиазолипяла 1/2 МПД (максимально переносидон-4 формулы мой дозы)о Острая токсичность соединения Т определена на белых мытах массой 1618 г по методу пробит-анализа» При внутрибрншинном и внутримышечном введении она составляет 1000 мг/кг, т»е» соединение Т характеризуется низкой токсичностью. Таким образом» соединение Т обла- 25 обладающий противогриппозным действидает высоким антйтриппозным действием в отношении вируса гриппа А и ем в отношении РНК-геномных вирусов A-2d Т а б л и ц а 1 Сравнительная антивирусная активность соединения Т и ремантадина в системе " к л е т к а - в и р у с " , доза 1/2 М Ц Ц Вещество Концентрация вещества, мгл/кг Штамм (AWSN), in vitro, 10 ТЦПД-50 Штамм А (Англия) 42/72 (H3N2), in vitro, 10 ТІЩ-50 Ремантадин (до инфицирования) 350,0 5,0 3,0 Ремантадин (после инфицирования) 350,0 3,5 2,5 Соединение Т (до инфицирования) 450,0 Соединение Г (после инфицирования) 450,0 3,5 3,2 П р и м е ч а н и е , , результаты представлены разницей логарифмов между показателями сравниваемых групп0 3,0 372888 6 Т а б л и ц а Сравнительная антивирусная активность соединения Г и ремантадина в системе развивающихся куриных эмбрионов, доза 1/2 М Д Д Концентрация вещества, мг/эмб Штамм A(WSN), i n ovo, 10 ЭИД-50 Ремантадин (до инфицирования) 2,5 3,2 2,9 Ремантадин (после инфицирования) 2,5 2,7 2,0 10,0 5,8 3,8 Вещество Соединение Г (до инфицирования) Соединение Г (после инфицирования ] 4 Штамм А/Англия/ 42/72 (H3N2) in ovo, 10 ЭИД-50 3,2 10,0 П р и м е ч а н и е . , Результаты представлены разницей логарифмов между показателями сравниваемых групп. Т а б л и ц а 3 Воздействие соединения Г и. ремантадина на органиэм инфицированных мишей в зависимости от схемы опыта и инфицирующей дозы вируса (представлены средние данные опытов)„ Длительность опыта 14 дней Вариант Инфицирующая доза вируса (ЛД-50) % выживаемости мышей Средняя продолжительность жизни, дни (М+ш) t критерий ДО СТО" і Р 1 верности 1 10 Контроль инфекции Соединение 1 пятикратно Способ введения — 30,0 0 4,8±0,16 4,0£0,20 100 0 3,2-0,32 1 10 100 До з а р а жения в/м 100,0 100,0 75,0 14,0 14,0 13,7+0,25 32,50 35,40 38,70 *0,001 *0,001 «0,001 1372888 Продолжение таблицы Вариант Соединенне Т трехкратно Инфицирующая доза вируса (ЛД-50) Способ введения % выживаемости МЛЙЄЙ Средняя продолжительность жизни, дни (Mtm) 4 t критерий достоверности Р До заражения в/6 100 100,0 60,0 1А,0 12,5±0,64 32,50 12,75 *0,001