Штамм бактерій васіllus suвтіlіs для одержання препарату проти збудників гнилі яблук та винограду при зберіганні

СОЮЗ СОВЕТСНИХ СОЦИАЛИСТИЧЕСКИХ РЕСПУБЛИК (51)5 А 01 N 63/00, С 12 N 1/20 ГОСУДАРСТВЕННЫЙ КОМИТЕТ ПО ИЗОБРЕТЕНИЯМ И ОТНРЫТИЯМ ПРИ ГННТ СССР 1 (21) ^787528/13 (22) 30.01.90 23.01 92, Бюл. N1 З Украинский научно-исслеловательский институт садоводства Южного отделения ВАСХНИЛ (72) A.M.Лапа, С.Р.Резник, С.В.Лапа, В.А.Фа районов и И.Н.Сорокулова (53) 57б.8:632.У51(088.8) (56) Кудряшова £.А.Микробиологические основы сохранения плодов и овощей. 1986, с . 1 6 7 - 1 7 6 . Справочник по хранению плол° в > ягод и винограда. ' (51*) ШТАММ БАКТЕРИЙ BACILLUS SUBTTLIS ЛЛЯ ПОЛУЧЕНИЯ ПРЕПАРАТА ПРОТИВ 803БУЛИТЕЛЕЙ ГНИЛЕЙ ЯБЛОК И ВИНОГРАДА ПРИ ХРАНЕНИИ Изобретение относится к /ликроГиогг-гической промышленности и сельскому хозяйству, в частности к получению средств защиты плодовой пролукции от возбудителей гнилей яблок и винограда при хранении и касается нового штамма бактерий для получения вышеуказанного средства . Известны способы защиты продукции при закладке ее на /ранение предуборочной обработкой Фунгицидами (каптан, фолнет) дезинфекцией плодохранилищ и тары парами формалина, серы, обработкой плодов антисептиками. Однако использование этих лрепаратпа, гидроО лизует крахмал, желатину. Не растет Штамм B a c i l l u s s u b t i l i s В И С М 131 Н И Х в анаэробных условиях, не обладает явпяется антагонистом следующих виаргининлигидрола.юй, лецитиназой ^ , дов фитопатогенных грибов, вызываюНе образует газ из N0^ в анаэробщих гнили плодов яблок и винограда, а ных условиях. Продуцирует индол без именно Monilia f r u c t i g e n a , Rhizopus 15 образовании сероводорода. n i g r i c a u s , P e n i c i l l i u m expansum, Из органических источников азота P e n i c i l l i u m c l a v i f o r m e . Штамм яепоштамм B a c i l l u s s u b t i l i s ВНИИСХМ 131 нирован в коллекции культур В И сельН И можег использовать следующие оргаскохозяйственной микробиологии под нические соединения: гидролиззт каномером 131 в качестве активного ан- 20 зеина, дрожжеэой автолизат, пептон, тагониста возбудителей гнилей яблок неорганические соединения нитраты и винограда. NaNOj), аммонийные соли Штами выделен из почвы Киевской области в 1976 г , идентифицирован по Минимальная температура роста "Краткому определителю бактерии 25 штамма Bacillus suhtilis ВНИИСХМ Берджи". 131 -7°С, максимальная +55°С, опМорфолого-культуральные п р и з н а к и тимальная 28 до 37°С. B a c i l l u s s u b t i l i s ВНИИСХМ 131 - к у л ь Значение РН среды минимальное S, тура спороносная, аэробная, граммаксимальное 8^ оптимальное 6-7. положительная, 30 Штамм но патогенен для растений В мазках и з к о л о н и й , "выросших на и теплокровных животных. МПА, через 18 ч обнаруживаются п р я Получение препарата против возбумые палочковидные к л е т к и 1 , 9 - 2 , 1 * дителей гнипей яблок и виногpapa при х0,3~0.** м к м , расположенные одиночно, хранении на основе штамма бактерий изредка ц е п о ч к о й . Клетка при спорообBacillus subtilis ВНИИСХМ 131. 35 разовании не р а з д у в а е т с я , после р о ! с т а на гпюкозном а г а р е в п р о т о п л а з Основные ЭТРПЫ изготовления преме глобулы не обнаруживаются. На парата следующие: подготовка штамМПБ культура о б р а з у е т п л е н к у . ма - засев на косячки с сусло-агаЧерез 2** ч роста при Т - +37 С ^о ром, инкубирование при Т = 37°С в на среде с у с л о - а г а р и Громыко к у л ь течение 18-2*4 ч. Пересев на бактетура имеет вид п л о с к и х , складчатых риологические матрацы. ИнкуЬировакожистых колоний диаметром А-5 мм с ние при Т = 37°С в течение 7-Ю сут изрезанными краями с е р л в а т о - т е л е с н о для получения спор, Контроль спорог о ц в е т а , хорошо снимаемые петлей с ^ образования проводим микроскопически. поверхности а г а р а . С агариэованной среды культуру смыЧерез ?М ч роста при т = +37 С вают физиологическим раствором, з а на стрептомицетном а г а р е культура тем вносят в суспензию наполнитель имеет вид мелких колоний диаметром сахарозо-желатиновую среду (*• и ]% 0 , ^ - 1 , 0 мм. с в е т л о - с е р о г о ц п е т а с и з соответственно к общему объему). Тарезанным к р а е м , с центром в н у т р и , ким образом полученную суспензию дос л е г к а приподнимающимся над п о в е р х водят до 10 млрд.спор в 1 мл (с поностью а г а р а , п а с т о о б р а з н о й к о н с и с мошью оптического стандарта мутнот е н ц и и , хорошо снимается с п о в е р х н о с сти) . Для дпительного хранения преЇИ агара . парата полученную смесь разливают в Через 2't ч роста при Т=+37 на м я ампулы или лотки из нержавеющей со-пептомнои а г ^ р е к у л ь т у р а инеет вид стали и помещаем в морозильную камескладчатых п л о с к и х колоний диаметром ру при Т не выше -20 С на ^8 ч. За0,2 - 0 , 5 ми от с в е т л о - с е р о г о по тем проводят лиоАилизацию в вакуум 1/06504 ных сушильных камерах в течение 36 ч . при температуре от -20 до +36 С. Контроль бактериальной чистоты препарата проводят методом рассева на агаризовачные питательные с р е ды (МПА, Громыко, Гаузе Г 2, Картофельный лгар, стрептомицетный а г а р ) . Антагонистическую активность полученного препарата на основе штамма 10 B a c i l l u s s u b t i l i s ВНИИСХМ 131 опредеЛЙЮТ метолом радиальных штрихов ( (Егоров, 1% 3) . Антагонистическая активность опытных серий препарата на основе штамма B a c i l l u s s u b t i l i s ВНИИСХМ 131 (после лиофильной сушки) показана в таблице. П р и м е р 1, Препарат для обработки плодов пблок и винограда получают наращиванием штамма B a c i l l u s s u b t i l i s РНИИСХМ 131 на твердой среде сусло-агар, при Т = +37 С в течение 7-10 сут для получения спор. Культуру смывают физиологическим раствором, затем вносят в суспензию наполнитель - сахароза-желатиновую среду Сі И ]% соответственно к общему объему). Готовят рабочую суспензию с концентрацией 5 - Ю 6 и 1 1 0 7 спор/мл из расчета 1 л на 100 кг яблок. Обработку препаратом проводят в условиях хранения (Т ~ +2-8 С, относительной влажности 85-95%), при естественном инфекционном Лоне Контролем служат плоды, которые обычно закладывают не хранение, обработанные перед уборкой фунгицидом поликарбацином 60Д с . п . с нормой расхода Z к г / г а на 20 дн до уборки урожая. При использовании суспензии штамма B a c i l l u s s u b t i l i s В И С М 131 с Н И Х № опытной серии 1 2 3 4 5 6 20 30 35 титром от 5 до 10 млрд.споо постигается 100%-ная сохранность плогов яблок в течение 90 д н , в т о время как в контроле уже на 7 сут наблюдаются развитие гнилей яблок. Увеличение нагрузки спор более 10 млрд, не ведет к улучшению результатов. П р и м е р 2. В 1989 г в хранилище совхоза "Зеленый Гай" Николаевской области приведена обработка препаратом на основе штамма B a c i l l u s s u b t i l i s ЗНИИСХМ 131 с титром 1 млрд спор в Q 1 г сухого лиофильно высуженного препарата. Норма расхода 1.г препарата на 1 кг ягод винограда. Условия хранения : Т = +1-7°П, относительная влажность воздуха 85-90% „Контролем служат гроздья винограяа,обработанные перед .хранением медьсодержащими препаратами (купрозан 80% с . п . 4 - 6 к г / г а ) . Через 2 мес. после обработки установлено, что количество пораженных гроздей еинограл? возбудителями гни-} лей уменьшается на 55»^^ по сравнению с контролем. Таким образом, применение штамма B a c i l l u s s u b t i l i s ВНИИСХМ 131 против возбудителей гнилей яолок и винограда позволяет уменьшить скорость развития гнилей во время хранения в 3-4 раза, а также снизить поражение возбудителями гнилей плолов яблок и виноградг на 23,6-66,69;. ! Ф о р м у л а и з о Ь р е т е н и я Штамм бактерий B a c i l l u s s u b t i l i s В И С М 131 для получения препарата Н И Х АО против возбудителей гнилей яблок и винограда при хранении. Зона лизиса Monilia Penici]lium fructigena expansum 21 19 20 21 18 19 17 19 15 18 19 20 Penicillium I Pbizopus claviforme I nigricaus 16 18 1Г 1 , 9 18 19 17 18 19 21 20 170650** Редактор 0.Головач Заказ ШЬ Составитель Л.Шкурская Техрел м.Дидык Тираж Корректор И.Зрлейи Погписное ВНИИПИ Государственного комитета по изобретениям и открытиям при ГКНТ СССР ИЗО35, Москва, Ж-35,1 Раушская наб., д. k/S Производственно-издательский комбинат "Патент", г.Ужгород, ул. Гагарина,101