Спосіб приготування контрольного матеріалу для зовнішньої оцінки якості досліджень виявлення антитіл до віл

Реферат: Спосіб приготування контрольного матеріалу для зовнішньої оцінки якості досліджень виявлення антитіл до ВІЛ, за яким відбирають зразки сироваток крові з наявністю та/або відсутності антитіл до ВІЛ, готують 1:1000 розчин зеленого харчового барвника шляхом розведення 1 мкл барвника в 1 мл зразка сироватки крові, що містить або не містить антитіл до ВІЛ, вносять по 20 мкл забарвленого зразка сироватки у пластикові пробірки об'ємом 2 мл та висушують протягом 7-10 годин, після висушування закривають пробірки кришками і зберігають. Зберігання здійснюють при температурі +4-8 °C протягом 1-45 днів до використання, а перед використанням в пробірки вносять по 200 мкл стерильного фізіологічного розчину і залишають на 2 години при кімнатній температурі. UA 92935 U (54) СПОСІБ ПРИГОТУВАННЯ КОНТРОЛЬНОГО МАТЕРІАЛУ ДЛЯ ЗОВНІШНЬОЇ ОЦІНКИ ЯКОСТІ ДОСЛІДЖЕНЬ ВИЯВЛЕННЯ АНТИТІЛ ДО ВІЛ UA 92935 U UA 92935 U 5 10 15 20 25 30 35 40 45 50 55 60 Корисна модель належить до медицини і стосується вірусології, а саме до способу і набору для проведення лабораторних діагностичних досліджень для зовнішньої оцінки якості досліджень виявлення антитіл до ВІЛ. Відомій спосіб приготування контрольного матеріалу для зовнішньої оцінки якості досліджень виявлення антитіл до ВІЛ (див. A simple and cost-effective method for preparation of HIV proficiency testing panels and quality control materials for use in resource-limited settings" Bharat S. Parekha, Juliana Anyanwua, Hetal Patela, Marie Downera,c, Mireille Kaloua, Catherine Gichimub, Bera Steven Keipkerichb, Nelly Clementb, Michael Omondia, Oren Mayera, Chin-Yih Oua, John N. Nkengasonga // Journal of Virological Methods 163 (2010) 295-300), що включає підготовку фосфатно-сольового буферу з Твином-20 (PBS/Tween-20) шляхом розчинення пакету Sigma забуферованого фосфатом фізіологічного розчину з Tween 20, рН 7,4 в 1 л деіонізованій води, фільтрують отриманий розчин через 0,2  фільтр, готують 1,8 мл аліквоти в попередньо маркованих пробірках на 2 мл з кришкою, що загвинчується, маркують пробірки, як "ФСТ-буфер" і зберігають у холодильнику при 4 °C протягом 1 року; відбирають зразки сироваток крові, з наявністю та/або відсутністю антитіл до ВІЛ, готують 1:1000 розчин зеленого харчового барвника шляхом розведення 1 мкл барвника в 1 мл зразка сироватки, вносять по 20 мкл забарвленого зразка сироватки у пластикові пробірки об'ємом 2 мл та залишають незакритими для висихання протягом ночі; наступного дня закривають пробірки кришками и зберігають при температурі 4 °C до використання, потім готують контрольні зразки для дослідження, при цьому в пробірки вносять по 200 мкл "ФСТ-буфер" і залишають на ніч при кімнатній температурі, а наступного дня перед проведенням дослідження зразки обережно перемішують. Недоліком такого способу є його складність, багатостадійність, а також те, що необхідно застосовувати, закуповувати, приготувати, фільтрувати та подальшому зберігати аліквоти спеціального буферу PBS/Tween-20. Другим недоліком є те, що після розведення зразків, дослідження мають бути здійснені лише наступного дня, що суттєво подовжує термін проведення дослідження. Задачею корисної моделі є створення способу приготування контрольного матеріалу для зовнішньої оцінки якості досліджень виявлення антитіл до ВІЛ, в якому за рахунок застосування нових дій та речовин та режимів та параметрів виконання дій забезпечується спрощення способу та прискорення здійснення дослідження. Поставлена задача вирішується тим, що спосіб приготування контрольного матеріалу для зовнішньої оцінки якості досліджень виявлення антитіл до ВІЛ включає відбір зразків сироваток крові з наявністю та/або відсутності антитіл до ВІЛ, готують 1:1000 розчин зеленого харчового барвника шляхом розведення 1 мкл барвника в 1 мл зразка сироватки крові, що містить або не містить антитіл до ВІЛ, вносять по 20 мкл забарвленого зразка сироватки у пластикові пробірки об'ємом 2 мл та висушують протягом 7-10 годин, після висушування закривають пробірки кришками и зберігають. Новим у способі є те, що зберігання здійснюють при температурі +4-8 °C протягом 1-45 днів до використання, а перед використанням в пробірки вносять по 200 мкл стерильного фізіологічного розчину і залишають на 2 години при кімнатній температурі. Застосування у способі нових дій речовин, режимів та параметрів виконання дій забезпечує спрощення способу та прискорення здійснення дослідження Спосіб ілюструється прикладом його здійснення. Для приготування контрольного матеріалу відбирають нативні зразки сироваток крові, охарактеризовані щодо наявності або відсутності антитіл до ВІЛ (кожна сироватка має свій індивідуальний номер). За допомогою автоматичного дозатору зі змінним об'ємом від 100 до 1000 мкл у мікропробірки об'ємом 2,0 мл типу Еппендорф з кришками вносять по 1 мл зразка сироватки. Для приготування 1:1000 розчину в сироватку крові за допомогою автоматичного дозатору зі змінним об'ємом від 0,5 до 10 мкл додають 1 мкл харчового барвника, отриманий розчин зеленого кольору ретельно перемішують піпетуванням для уникнення згустків барвника. Готують необхідну кількість мікропробірок об'ємом 2,0 мл типу Еппендорф з кришками (кількість мікропробірок визначають в залежності від передбачуваної кількості подальших досліджень від 10 до 50 на кожний розведений зразок сироватки) та маркують їх відповідно до вихідного номеру сироватки. В чисті мікропробірки автоматичним дозатором зі змінним об'ємом від 10 до 50 мкл вносять по 20 мкл отриманого розчину сироватки зеленого кольору та залишають незакритими для висихання протягом ночі (7-10 годин) при температурі +18-25 °C. Наступного дня закривають мікропробірки кришками і зберігають до використання при температурі +4-8 °C у камері побутового холодильника. Перед проведенням дослідження (протягом 1-45 днів від початку зберігання) в мікропробірки зі сухими зразками сироваток за допомогою автоматичного дозатору зі змінним об'ємом або пластикової піпетки з градуюванням вносять по 200 мкл 1 UA 92935 U 5 10 15 20 25 30 стерильного фізіологічного розчину і залишають на 2 години при температурі +18-25 С. Отриманий розчин ретельно перемішують піпетуванням і використовують для проведення дослідження відповідно до інструкції з використання швидких тестів для виявлення антитіл до ВІЛ. Результати дослідження оцінюють візуально протягом терміну часу, визначеного інструкцією до використовуваного швидкого тесту. Зразки сироваток крові, які містили антитіла до ВІЛ, мають бути оцінені як позитивні, ті, що не містили антитіл до ВІЛ, - як негативні. Визначення ефективності способу. Ефективність виявлення антитіл до ВІЛ у сухих зразках сироваток крові оцінювали безпосередньо після висушування зразків та після зберігання мікропробірок з сухими зразками при температурі +4-8 °C у камері побутового холодильника через 1, 3, 5, 7 та 30 діб. Додатково вивчали вплив температури +45 °C протягом 60 хвилин та +25 °C протягом трьох діб на стабільність виявлення антитіл до ВІЛ у сухих зразках сироваток. Дослідження проводили з використанням п'яти видів швидких імунохроматографічних тестів для виявлення антитіл до ВІЛ в зразках цільної крові, сироватки або плазми, зареєстрованих в Україні, - "Alere™ Determine™ HIV-1/2", виробництва Alere, Японія; "Швидкий тест для визначення антитіл до ВІЛ 1/2, тесткартки (цільна кров/сироватка/плазма), виробництва InTec Products.Inc, Китай; "SD Bioline HІV ½", виробництва Standart Diagnostics, Корея; "Double Check Gold TM HIV 1&2 Whole Blood", виробництва Orgenics, Ізраїль; "Cito Test HIV 1/2/0", виробництва TOB "Фармаско", Україна. В якості контролю використовували ті самі нативні сироватки крові, підготовлені відповідно до "A simple and cost-effective method for preparation of HIV proficiency testing panels and quality control materials for use in resource-limited settings" Bharat S. Parekha, Juliana Anyanwua, Hetal Patela, Marie Downera,c, Mireille Kaloua, Catherine Gichimub, Bera Steven Keipkerichb, Nelly Clementb, Michael Omondia, Oren Mayera, Chin-Yih Oua, John N. Nkengasonga // Journal of Virological Methods 163 (2010)295-300". Результати проведених досліджень показали, що сухі зразки сироваток зберігають стабільність протягом 30 діб при температурі +4-8 °C у камері побутового холодильника, 60 хвилин при температурі +45 °C та трьох діб при температурі +25 °C. Суттєвої різниці з контролем при візуальній оцінці результатів тестування зразків, виготовлених запропонованим способом, зареєстровано не було. Перевагами запропонованого способу є відсутність необхідності закупівлі, приготуванні, фільтруванні та подальшого зберігання аліквот спеціального буферу PBS/Tween-20 та швидкість проведення дослідження після розведення сухої сироватки крові. ФОРМУЛА КОРИСНОЇ МОДЕЛІ 35 40 Спосіб приготування контрольного матеріалу для зовнішньої оцінки якості досліджень виявлення антитіл до ВІЛ, за яким відбирають зразки сироваток крові з наявністю та/або відсутності антитіл до ВІЛ, готують 1:1000 розчин зеленого харчового барвника шляхом розведення 1 мкл барвника в 1 мл зразка сироватки крові, що містить або не містить антитіл до ВІЛ, вносять по 20 мкл забарвленого зразка сироватки у пластикові пробірки об'ємом 2 мл та висушують протягом 7-10 годин, після висушування закривають пробірки кришками і зберігають, який відрізняється тим, що зберігання здійснюють при температурі +4-8 °C протягом 1-45 днів до використання, а перед використанням в пробірки вносять по 200 мкл стерильного фізіологічного розчину і залишають на 2 години при кімнатній температурі. 45 Комп’ютерна верстка Д. Шеверун Державна служба інтелектуальної власності України, вул. Урицького, 45, м. Київ, МСП, 03680, Україна ДП “Український інститут промислової власності”, вул. Глазунова, 1, м. Київ – 42, 01601 2