Модифіковане бактеріологічне транспортне гелеве середовище для діагностики трихомонад та інших найпростіших

Реферат: Модифіковане бактеріологічне транспортне гелеве середовище для діагностики трихомонад та інших найпростіших містить дефібринізовану плазму донорської людської крові, розчин Рінгера, 15 % розчин тіосечовини, антибіотик, розчин харчового желатину та розчин барвника, агар, гліцерин, воду очищену. Як антибіотик використовують стрептоміцин та гентаміцин, а як барвник - 5 % розчин жовтого барвника. UA 107385 U (12) UA 107385 U UA 107385 U 5 10 15 20 25 30 35 40 Корисна модель стосується медицини, а саме лабораторної бактеріологічної діагностики інфекцій, які передаються статевим шляхом, та інших, в сфері дерматовенерології, урології, гінекології, оториноларингології та стоматології. Середовище, що пропонується, призначене для забору та транспортування діагностичного матеріалу, отриманого від хворих. Актуальність проблеми полягає в тому, що натепер інфекції, що передаються статевим шляхом, широко розповсюджені серед різних вікових груп, які мають статеві контакти. Багато збудників різних захворювань внаслідок частого самостійного і невірного лікування набули асоційовані форми у вигляді мікст-інфекцій. Також при асоціації тієї чи іншої інфекції з іншими мікроорганізмами утруднюється повна діагностика і виявлення збудника захворювання внаслідок утворення L-форм (трансформ) бактерій через конкуренцію одного із збудників. Повноцінне бактеріологічне дослідження і вірна ідентифікація мікроорганізмів потребують спеціального, більш ретельного підходу не тільки під час взяття матеріалу від хворого, а й також максимально сприятливих умов при транспортуванні отриманого діагностичного матеріалу до лабораторії. Найбільш близьким за технічною суттю та результатом, що досягається, є рідке транспортне середовище (за патентом України № 56406, МПК (2011.01) C12N1/20, C12Q1/04, опубл. 10.01.2011, бюл. № 1), яке містить наступні компоненти при такому співвідношенні: дефібринізована плазма донорської людської крові 12 мл бульйон з бичачих сердець 100 мл розчин Рінгера 300 мл 15 % розчин тіосечовини 7 мл пеніцилін 500000 ОД 10 % розчин харчового желатину 15 мл 10 % розчин неконсервованої гемолізованої еритроцитарної маси донорської людської крові 7 мл 5 % розчин харчового зеленого барвника Е 102 0,05 мл. Спільними суттєвими ознаками прототипу і середовища, що пропонується, є наявність в їх складі наступних компонентів: дефібринізована плазма донорської людської крові; розчин Рінгера; 15 % розчин тіосечовини; антибіотик; розчин харчового желатину; розчин барвника. Однак таке середовище не завжди в змозі зберігати свої фізичні властивості під час транспортування отриманого біологічного матеріалу. Таке середовище може виливатись з пробірок та забруднювати інші пробірки або транспортний бокс з пробірками при необережному їх транспортуванні. Також суттєвим недоліком є те, що під час транспортування будь-яке струшування або вібрація можуть спричинювати збовтування середовища та виникнення бульбашок, що змінює властивості середовища і негативно впливає на найпростіших, яким потрібні безкисневі умови. Все це в цілому знижує діагностичні властивості середовища. В основу корисної моделі поставлено задачу удосконалення середовища шляхом зміни його складу та введення додаткових компонентів, що забезпечить покращення властивостей середовища при використанні його для транспортування зразків для дослідження та його діагностичних властивостей. Поставлена задача вирішується тим, що у середовищі, яке містить дефібринізовану плазму донорської людської крові, розчин Рінгера, 15 % розчин тіосечовини, антибіотик, розчин харчового желатину та розчин барвника, новим є те, що середовище додатково містить агар, гліцерин, воду очищену, як антибіотик використовують стрептоміцин та гентаміцин, а як барвник - 5 % розчин жовтого барвника при такому співвідношенні компонентів: дефібринізована плазма 25 мл донорської людської крові розчин Рінгера 300 мл 15 % розчин тіосечовини 60 мл стрептоміцин 100000 ОД 1 UA 107385 U 5 10 15 20 25 30 35 40 45 50 4 % розчин гентаміцину 20 мл 7 % розчин харчового 15 мл желатину 5 % розчин харчового 0,05 мл жовтого барвника Е 110 агар 7,0 г гліцерин 50,0 мл вода очищена 928 мл. Причинно-наслідковий зв'язок між сукупністю ознак, що заявляються, та технічним результатом полягає у такому. Для зменшення в'язкості до середовища введено гліцерин, який дозволяє забезпечити м'якість і драглистість середовища, що, в свою чергу, дозволяє уникнути пересихання і загустіння середовища в період зберігання перед використанням, а також при транспортуванні така форма середовища дає змогу уникнути виливання з пробірки. При струшуванні середовище залишається в незмінному гелеподібному стані і добре зберігає свої фізичні та хімічні властивості. Використання води очищеної забезпечить необхідну розчинність і розподіл поживних компонентів в гелеподібній масі пропонованого середовища, тим самим запобігаючи висиханню під час роботи з середовищем. Заміна пеніциліну стрептоміцином та гентаміцином дасть змогу ефективно забезпечити пригнічення інших мікроорганізмів, які від хворого попадають до середовища, та запобігти бурхливого зростання їх в середовищі та, внаслідок цього, виснаження середовища та конкуренції бактерій, які можуть чинити негативний вплив на результати діагностики тим, що вони знижують та пригнічують зростання і збереженість найпростіших в такому середовищі. Зменшення до 7 % концентрації желатину забезпечить специфічну в'язкість і стабільність гелеподібного стану середовища. Крім цього, екстрагований колаген, амінокислоти, мікроелементи тваринного походження, які містяться в желатині, при такій концентрації можуть бути поживними елементами для кращого зростання найпростіших. Використання жовтого барвника має перевагу в тому, що гелеподібне середовище набуває специфічного яскраво-жовтого відтінку, в результаті чого лаборанту або лікарю буде краще розглядати і оцінювати середовище при його незначному підсиханні, або порушенні структури чи попаданні в неї інших небажаних компонентів. Середовище готують таким чином. Порошок агар (7 мг) розчиняють в воді очищеній (928 мл). Розливають у стерильні флакони по 500,0 мл і стерилізують під тиском 1 атм. (121 °C±1) 20 хвилин. Готовий агар остуджують до 60 °C і обережно додають 50 мл гліцерину і 15 мл 7 % розчину желатину на 1 л води. Флакони із середовищем зберігають в холодильнику (термін зберігання до 1 місяця). Для отримання готового транспортного середовища отриману основу підігрівають до 40 °C і, обережно розмішуючи, додають 300 мл розчину Рінгера, 25 мл плазми донорської крові, порційно 60 мл 15 % розчину тіосечовини. Суміш ретельно перемішують і додають 1 флакон стрептоміцину 100000ОД до повного розчинення порошку, та додають 20 мл 4 % розчину гентаміцину. Останнім додають харчовий 5 % розчин жовтого барвника (Е110) в об'ємі 0,05 мл до отримання яскраво-червоного кольору. При правильному приготуванні такого середовища осаду, каламуті не спостерігається. Розливають по 2 мл в стерильні пробірки з вмонтованим ватним тампоном. Середовище використовують відразу ж після виготовлення. Пробірки, що остигли до кімнатної температури, зберігають для подальшого використання, не виймаючи тампон. Середовище використовують таким чином. Із стерильної пробірки із середовищем виймають тампон на металевому стрижні, забирають на тампон матеріал, що буде досліджуватись (гній, виділення з статевих органів, змиви з горла, носа тощо) і матеріал на тампоні вводять глибоко в пробірку із середовищем до повного занурення тампона в середовище до дна пробірки. Після цього така пробірка маркується і транспортується до бактеріологічної лабораторії. В бактеріологічній лабораторії лаборант в стерильному боксі дістає з пробірки тампон на металевому стрижні і переносить матеріал з тампона методом змивання матеріалу з тампона в іншій пробірці із спеціальним готовим рідким середовищем для зростання і виділення найпростіших СКМ-1. Готовий змив з тампону в рідкому поживному середовищі СКМ-1 доводять цим же середовищем до об'єму 2-3 мл і зверху 2 UA 107385 U 5 нашаровують на поверхню середовища 0,5-1,0 мл стерильного вазелінового масла, закривають ватно-марлевою пробкою, маркують і поміщують до термостату для інкубування (росту) при температурі 37,0 °C на 5-7 діб. Проводять ідентифікацію осаду, що утворився на дні пробірки. Його відсмоктують петлею Пастера на предметне скельце и проводять мікроскопію нативного матеріалу на наявність рухомих форм найпростіших в темному полі мікроскопа при 40- або 80кратному збільшенні. Пробірки із середовищем та тампоном на металевому стрижні після стерилізації в автоклаві зберігають при температурі 20-25 °C протягом 10-12 діб. При температурі 4 °C середовище може зберігатись тривалий термін (до 2-3 місяців). 10 ФОРМУЛА КОРИСНОЇ МОДЕЛІ 15 Модифіковане бактеріологічне транспортне гелеве середовище для діагностики трихомонад та інших найпростіших, що містить дефібринізовану плазму донорської людської крові, розчин Рінгера, 15 % розчин тіосечовини, антибіотик, розчин харчового желатину та розчин барвника, яке відрізняється тим, що середовище додатково містить агар, гліцерин, воду очищену, як антибіотик використовують стрептоміцин та гентаміцин, а як барвник - 5 % розчин жовтого барвника, при такому співвідношенні компонентів: дефібринізована плазма 25 мл донорської людської крові розчин Рінгера 300 мл 15 % розчин тіосечовини 60 мл стрептоміцин 100000 ОД 4 % розчин гентаміцину 20 мл 7 % розчин харчового 15 мл желатину 5 % розчин харчового жовтого 0,05 мл барвника Е 110 агар 7,0 г гліцерин 50,0 мл вода очищена 928 мл. Комп’ютерна верстка Л. Ціхановська Державна служба інтелектуальної власності України, вул. Василя Липківського, 45, м. Київ, МСП, 03680, Україна ДП “Український інститут інтелектуальної власності”, вул. Глазунова, 1, м. Київ – 42, 01601 3