Спосіб визначення злоякісності та агресивності пухлин щитоподібної залози людини

Реферат: Спосіб визначення злоякісності та агресивності пухлин щитоподібної залози людини полягає у тому, що проводять визначення кількості ядерного антигену проліферуючих клітин (PCNA) у біопсійному матеріалі щитоподібної залози та розраховують співвідношення кількості антигену у нормальній та пухлинній тканинах. UA 115605 U (12) UA 115605 U UA 115605 U 5 10 15 20 25 30 35 40 45 50 55 60 Корисна модель належить до галузі медицини, зокрема до способів діагностування злоякісності та агресивності пухлин щитоподібної залози людини. Проліферативний потенціал ракових клітин - один з найважливіших факторів розвитку пухлини. Для діагностики раку щитоподібної залози (ЩЗ) необхідно розробляти нові підходи, щоб отримати характерні для залози показники проліферації на основі вивчення експресії генів, продукти яких беруть участь у підготовці і здійсненні поділу клітин. Ядерний антиген проліферуючих клітин (PCNA) є висококонсервативним білком, необхідним для правильної організації компонентів, що беруть участь у процесах реплікації та репарації ДНК. Білки поєднуються в межах міждоменної сполучної петлі PCNA, і значна частина регуляторних впливів є результатом конкурування за цей стикувальний сайт. Якщо цей сайт PCNA модифікується, наприклад, в ракових клітинах, реплікація ДНК і процес репарації можуть змінюватись. В такому випадку з'являється можливість для таргетної терапії деяких типів раку [1]. Прогноз щодо раку щитовидної залози значно різниться між випадками з наявністю та відсутністю метастазів. Для визначення біомаркерів, корисних для діагностики раку щитовидної залози, та встановлення панелі маркерів для раннього виявлення метастатичних карцином ЩЗ, було проведено ряд досліджень, які, зокрема, показали, що у метастазуючих пухлинах рівень PCNA вище майже в 2 рази, ніж у неметастазуючих [2]. Відомий спосіб діагностування і лікування гіперпроліферативних розладів, який полягає у визначенні рівня експресії та/або локалізації білка, який містить фрагмент, який взаємодіє з PCNA і діагностичним критерієм є аберантний рівень та/або локалізація білка вказує на даний розлад або стан [5]. Недоліком даного винаходу є те, що будь-яке аберантне значення та/або локалізація вважаються діагностичними критеріями. Отже, вивчення експресії PCNA та розробка методів його блокування є надзвичайно актуальною задачею. В основу корисної моделі ставилося порівняння експресії PCNA в нормальних тканинах, доброякісних та злоякісних (метастазуючих та неметастазуючих) пухлинах ЩЗ людини. Дослідження проводилися на біопсійному та післяопераційному матеріалі хворих, одержаному у хірургічному відділенні інституту. Всі пацієнти перед оперативним втручанням підписали інформовану згоду на подальші сучасні методи діагностики та дослідження. Одразу ж після видалення, тканину ЩЗ поміщали на лід і швидко заморожували при -80 °C. Тканину гомогенізували в гомогенізаторі TissueLyser II фірми Retsch (Німеччина) у спеціальному буфері з набору для імуноферментного аналізу QIA59, що містив суміш інгібіторів протеаз та фосфатаз, для збереження інтактності та активності білків. Гомогенат зберігали до подальшого використання при -80 °C. Для визначення кількості PCNA використовували набори для імуноферментного аналізу QIA59 фірми Calbiochem (США). Дослідження проводили в триплетах. Концентрацію білка в лізаті визначали за допомогою наборів на основі бісінхонінової кислоти (ВСА protein assay kit) фірми Novagen (США). Планшети з PCNA зчитували на рідері фірми Bio-tek Instruments (США). Одержані дані опрацьовані статистично з використанням t-критерію Стьюдента і представлені у вигляді М±SD. Вірогідними вважали відміни при Р3) - про агресивність пухлини. Приклади. 1 UA 115605 U 5 10 15 20 25 30 35 40 45 50 Приклад 1. Пацієнтка М., 31 рік, історія хвороби № 1365, госпіталізована у хірургічну клініку Інституту ендокринології: 31.03.2014. Діагноз при направленні: лівобічний вузловий зоб, еутиреоїдна форма. Тонкоголкова аспіраційна пункційна біопсія проводилась під контролем ехографії голкою 21G: новоутворення, локалізованого у нижній третині лівої частки ЩЗ діаметром 31 мм. Кількість пункцій: 3. Висновок обстеження: вузол лівої частки розміром 31 мм - пухлина переважно мікрофолікулярного будови з певним поліморфізмом і атипією фолікулярного будови. Визначення PCNA методом імуноферментного аналізу: нормальна тканина - 1,443 од/мг білка; пухлина - 3,551 од/мг білка. Висновок: Інкапсульована папілярна карцинома щитоподібної залози pT2NxMx. Приклад 2. Пацієнтка Л., Вік: 41, історія хвороби № 2931. Госпіталізована у клініку 15.07.2014. Доопераційний діагноз: Папілярна карцинома щитовидної залози з метастазами в лімфатичні вузли шиї. Під контролем ехографії голкою 21G проведена тонкоголкова аспіраційна пункційна біопсія: утворення, локалізованого в середній третині правої частки ЩЗ діаметром 29 мм. Кількість пункцій: 3; лімфовузла локалізованого у верхньо-яремній ділянці справа діаметром 7 мм. Кількість пункцій: 1. Висновок обстеження: Папілярна карцинома щитовидної залози з метастазом в л/в. Визначення PCNA: нормальна тканина - 1,539 од/мг білка; пухлина - 6,215 од/мг білка. Висновок: Неінкапсульована оксифільноклітинна папілярна карцинома щитовидної залози pT3mN1abMx. Приклад 3. Пацієнтка Б., 21 рік, історія хвороби № 3825. Госпіталізована в клініку Інституту ендокринології 20.10.2014 року з попереднім діагнозом: Правобічний вузловий зоб. Еутиреоїдна форма. Тонкоголкова аспіраційна пункційна біопсія проведена під контролем ехографії голкою 21G утворення, локалізованого в нижній третині правої частки ЩЗ діаметром 40 мм. Кількість пункцій: 4. Висновок обстеження: Вузол правої частки розміром 40 мм - цитологічні ознаки кістозно-дегенеруючого аденоматозного вузла. Визначення PCNA: нормальна тканина - 1,377 од/мг білка; пухлина - 1,430 од/мг білка. Висновок: Правобічний вузловий зоб. Еутиреоїдна форма. Як видно з представлених прикладів в нормальній тканині та тканині зобу кількість PCNA приблизно одинакова і складає - 1,4 од/мг білка. У інкапсульованій пухлині кількість PCNA більш ніж у 2 рази вище - 3,551 од/мг білка. У агресивних, неінкапсульованих пухлинах з метастазами в лімфовузли або легені - кількість PCNA вище майже у 4 рази - 6,215 од/мг білка. Таблиця В таблиці наведено кількість PCNA в різних типах пухлин щитовидної залози, де позначено: ІРТС - папілярна карцинома (інкапсульовані пухлини), NPTC - папілярна карцинома (неінкапсульовані пухлини), MNG - багатовузловий зоб. М±SD, n=3-6; * - відмінності між умовнонормальною і пухлинною тканинами вірогідні, Р