Спосіб діагностики схильності до хронічного генералізованого катарального гінгівіту у дітей, хворих на муковісцидоз

Реферат: Спосіб діагностики схильності до хронічного генералізованого катарального гінгівіту у дітей, хворих на муковісцидоз, включає забір біологічного зразку, виділення ДНК та типування поліморфізму гена MUC5B. Також беруть зразок букального епітелію, виділяють ДНК, типування VNTR поліморфізму гена MUC5B виконують з використанням праймерів для ампліфікації MUC5B F - 5'-AGTGTGCAGTGACTGGCGAG-3', та MUC5B R - 5'CTAGAGTTGCAGGTGGCAGG-3', візуалізують в агарозному гелі інтрон 36 гена MUC5B з наступним визначенням повторів 59 пар нуклеотидів і при виявлені 6 або 9 повторів діагностують схильність до хронічного генералізованого катарального гінгівіту. UA 118860 U (12) UA 118860 U UA 118860 U 5 10 15 20 25 30 35 40 45 50 55 60 Корисна модель належить до медицини, а саме до дитячої стоматології, і може бути використана для діагностики схильності до хронічного генералізованого катарального гінгівіту у дітей, хворих на муковісцидоз. Хвороби пародонту - одна з важливих проблем сучасної стоматології, особливо у дітей, які мають соматичне захворювання. На сьогодні особливої актуальності набуває визначення генетичної обумовленості розвитку патологічних процесів. Генетичні чинники доповнюють перелік факторів ризику захворювань, що реалізуються під впливом несприятливих обставин. Вивчення поліморфізму генів, асоційованих із захворюваннями, зокрема органів ротової порожнини, дозволяє пояснити патогенетично пов'язані механізми та використовувати результати досліджень як прогностичні маркери хвороби [Особливості морфологічної будови ясен у нормі та при хронічних гінгівітах: навч. посіб. /П.А. Гасюк, Н.В. Гасюк. - Тернопіль: ТДМУ, 2014. - 92 с.; Исамулаева А.З. Клинико-генетический анализ как метод прогнозирования развития патологий пародонта у пациентов с язвенной болезнью желудка и двенадцатиперстной кишки / А.З. Исамулаева, А.А. Кунин // Институт стоматологии. - 2015. - № 2 (67). - С. 54-57]. При виникненні соматичної патології, зокрема захворювань дихальної системи, або під дією певних видів мікроорганізмів відбувається гіперсекреція муцинів та зміна компонентного складу слизу. У порожнині рота найбільш значимим підтипом родини муцинів є ген MUC5B. Доведено, що продукція муцину MUC5B залозами підслизового шару посилюється у хворих на муковісцидоз. Ці процеси призводять до утворення слизу підвищеної в'язкості, порушення його функцій та порушення евакуації. У хворих розвиваються вторинні зміни у багатьох органах і системах. Особливості структури гена MUC5B можуть бути маркерами діагностики схильності до хвороб пародонту [Коваленко С.В. Вплив персистувального запалення при хронічному обструктивному захворюванні легень на стан слизових бар'єрів бронхів і кишечнику (огляд літератури) /С.В. Коваленко // Буковинський медичний вісник. - 2014. - Т. 18, № 4. - С 200-204; Rose M.C. Respiratory tract mucin genes and mucin glycoproteins in health and disease / M.C. Rose, J.A. Voynow // Physiol Rev. - 2006. - Vol. 86. - P. 245-278]. Даний спосіб діагностики схильності до хвороб пародонту є найбільш близьким до того, що запропоновано, за технічною суттю і результатом, що досягається, тому його вибрано як найближчий аналог. Відомо, що продукція муцину MUC5B залозами підслизового шару посилюється у хворих на муковісцидоз, з іншого боку, особливості структури гена MUC5B можуть бути маркерами ранньої діагностики схильності до хвороб пародонту. Однак, при оцінці рівня медицини автори не виявили способу діагностики схильності до катарального генералізованого гінгівіту у дітей, хворих на муковісцидоз, на підставі аналізу генетичного поліморфізму гена МUС5В. В основу корисної моделі поставлена задача розробки способу діагностики схильності до хронічного генералізованого катарального гінгівіту у дітей, хворих на муковісцидоз. Поставлена задача вирішується тим, що у способі діагностики схильності до хвороб пародонту, що включає забір біологічного зразку, виділення ДНК та типування поліморфізму гена MUC5B, відповідно корисній моделі, для діагностики схильності до хронічного катарального генералізованого гінгівіту у дітей, хворих на муковісцидоз, беруть зразок букального епітелію, виділяють ДНК, типування VNTR поліморфізму гена MUC5B виконують з використанням праймерів для ампліфікації MUC5B F-5'AGTGTGCAGTGACTGGCGAG-3' та MUC5B R-5'CTAGAGTTGCAGGTGGCAGG-3', візуалізують в агарозному гелі інтрон 36 гена MUC5B з наступним визначенням повторів 59 пар нуклеотидів і при виявлені 6 або 9 повторів діагностують схильність до хронічного генералізованого катарального гінгівіту. Технічний результат досягається за рахунок, синергізму ознак, що характеризують запропоновану корисну модель. Спосіб виконують наступним чином: беруть зразок букального епітелію, виділяють ДНК, типування VNTR поліморфізму гена MUC5B виконують з використанням праймерів MUC5B F5'AGTGTGCAGTGACTGGCGAG-3' та MUC5B R-5'-CTAGAGTTGCAGGTGGCAGG-3' для ампліфікації, візуалізують в агарозному гелі інтрон 36 гена MUC5B з наступним визначенням повторів 59 пар нуклеотидів і при виявлені 6 або 9 повторів діагностують схильність до хронічного генералізованого гінгівіту. Структурний ген білка MUC5B локалізований у 11р15.5 хромосомі. Сам білок суттєво варіює 6 6 за розміром (від 210 kDa до 3010 kDa) та представляє собою масу переплетених філаментоподібних структур. Ген MUC5B складається з 48 екзонів та 47 інтронів. Він містить достатньо великий центральний екзон 30 (10713 п.н.) та низку прямих послідовних повторів 59 п.н. (послідовність - cctgtgcggt gagtgggggc ggccccgggc cccccagacc cctcggcctc tctgagtgt) у інтроні 1 UA 118860 U 5 10 15 20 25 30 35 40 36 [Desseyn J.-L. Fifty-nine bp repeat polymorphism in the uncommon intron 36 °F the human mucin gene MUC5B / J.-L. Desseyn, K. Rousseau, A. Laine // Electrophoresis. - 1999. - V. 20. - P. 493-496]. Саме останній поліморфізм може бути використаний як потенційний маркер. Ефективність способу доведена клініко-лабораторними дослідженнями. Забір біоматеріалу для дослідження проводили під час стоматологічного обстеження за допомогою стерильного одноразового зонду в індивідуальному пакуванні з маркуванням. Для проведення генотипування з клітин букального епітелію виділяли ДНК за допомогою комерційного набору Diatom ™ DNA Prep 100 (Російська Федерація), відповідно до інструкції виробника. Типування VNTR поліморфізму в інтроні 36 гена MUC5B виконували за допомогою полімеразної ланцюгової реакції (ПЛР) з детекцією ампліфікованих фрагментів в агарозному гелі. Для ампліфікації використовували праймери: MUC5B F-5'AGTGTGCAGTGACTGGCGAG-3' та MUC5B R-5'-CTAGAGTTGCAGGTGGCAGG-3'. Для проведення ПЛР алелей гена MUC5B використовували автоматичний термоциклер "Терцик" (Російська Федерація) та комерційні набори реагентів GenPak™ PCR Core (0,5 мл) (Російська Федерація), відповідно до інструкцій виробників. Розміри фрагментів визначали у порівнянні з маркером молекулярної маси pUC19 DNA/Mspl (Hpall) Marker, 23 (Thermo Fisher Scientific Inc.). Розрахунки здійснювали за допомогою програмного забезпечення Statistica 8.0. Можливість використання запропонованого способу для діагностики схильності до хронічного генералізованого катарального гінгівіту на підставі використання поліморфізму гена MUC5B підтверджено результатом спостереження 48 дітей, 25 з яких (основна група), мають діагноз муковісцидоз. За результатами клінічного обстеження 5-й дітям з муковісцидозом встановлено легкий ступінь, 12-ти хворим - середній ступінь, 8-ми хворим - тяжкий ступінь хронічного генералізованого катарального гінгівіту. На наступному етапі дослідження для пацієнтів основної групи встановлювали, чи є асоціація між ступенем тяжкості хронічного генералізованого катарального гінгівіту та наявністю у генотипі певної алелі гена MUC5B. Порівнювали підгрупи з середнім та тяжким ступенем розвитку гінгівіту. Використовували критерій Манна-Уїтні. Встановили, що для пацієнтів з муковісцидозом наявність в генотипі алеля гена MUC5B з 9ма повторами (U=9,5, p