Штам базидіального гриба phellinus igniarius (fr.) quel. 29, який проявляє антибактеріальну активність щодо бактерій escherichia coli

Реферат: Штам базидіального гриба Phellinus igniarius (Fr.) Quel. 29 у формі нативного міцелію та культуральної рідини, що виявляє високу антибактеріальну активність відносно бактерій Escherichia coli. UA 121324 U (12) UA 121324 U UA 121324 U 5 10 15 20 25 30 35 40 45 50 55 60 Корисна модель належить до біотехнології. Описано штам базидіального гриба Phellinus igniarius (Fr.) Quel. 29, у формі нативного міцелію та культуральної рідини, який проявляє антибактеріальну активність відносно бактерій Escherichia colі. Корисна модель може бути використана як основа для отримання біопрепаратів і лікарських засобів, що мають антибіотичну активність по відношенню до патогенних для людини і тварин бактерій Е. соlі. Найближчими серед відомих видів грибів та грибних продуктів, які проявляють антибактеріальну активність відносно бактерій є наступні. Відома антибактеріальна активність метанольних та етилацететних екстрактів плодових тіл Phellinus merrillii та P. swieteniae проти 16 штамів Acinetobacter baumanmi. (Belsare M.H. In-vitro susceptibility testing of some Phellinus species against Acinetobacter baumannii from Maharashtra India / M.H. Belsare, G.S. Bapat, K.R. Ranadive, J.G. Vaidya, S.S. Deokule // J. Med. PI. Res.-2010.4(13).-P. 1335-1338). Антибактеріальну активність міцелію та культуральної рідини Phellinus merrillii (культивували на 5 поживних середовищах для виявлення оптимального) визначали проти: Staphylococcus aureus ATCC25923 та Pseudomonas aeruginosa ATCC27853. Зони інгібування S. aureus культуральною рідиною P. merrillii досягали 30,4 мм, зони інгібування Ps. aeruginosa 10,2 мм. (Siriwattanametanon W. Culture filtrates from laboratory grown Phellinus mushrooms for use as antibacterial agents / W. Siriwattanametanon, W. Kanchanarach, R. Thiwthong, J.L.A. Dodgson // Chiang Mai. J. Sci. -2014. -41(1). - P. 243-247). Недоліки порівняння антибактеріальної активності різних видів грибів та різних грибних препаратів у вищеподаних прикладах та в корисній моделі, що пропонується, однакові та очевидні. Порівняння антибактеріальної активності грибів різних видів недоречне, тому що навіть різні штами одного й того ж виду демонструють різні властивості, в тому числі і антибактеріальну активність. Також впливають на властивості грибів умови культивуванні, перш за все - живильне середовище. Процес культивування плодових тіл (які в більшості випадків є об'єктами патентів та досліджень) грибів потребує особливих мікрокліматичних умов, пов'язаних з матеріальними витратами (вода, електрична енергія), тривалого процесу вирощування (від 3 місяців), додаткового оброблення ґрунту та приміщення. В той же час, наявність біологічно активних речовин плодових тіл грибів суттєво не відрізняється від міцелію грибів (при значно менших витратах ресурсів) за умов поверхневого культивування. Культуральна рідина, отримана в результаті вирощування міцелію, часто виявляє більшу антибактеріальну активність, ніж міцелій. Антибактеріальна активність залежить від форми застосування грибного продукту (гомогенізований нативний подрібнений міцелій, суспензія міцелію, культуральна рідина, різні екстракти з міцелію та плодових тіл). За прототип корисної моделі прийняті результати дослідження антибактеріальної активності водного екстракту плодових тіл Phellinus igniarius, яке показало помірну активність екстракту проти різних штамів Staphylococcus aureus (зона інгібування 8±0,49 17,5±0,74) та повну відсутність антибактеріальної активності проти: Bacillus subtilis, Escherichia coll, Salmonella typhimuriaum, Lactobacillus plantarum тощо [Sittiwet С Anti-staphylococcus aureus activity of Phellinus igniarius aqueous extract / С. Sittiwet, D. Puangpronpitag // Int. J. Pharmac. - 2008. - 4. - P. 503-505]. Антибактеріальна активність культурального міцелію та культуральної рідини Phellinus igniarius (Fr.) Quel. 29 проти Escherichia coli раніше не досліджувалася і однозначно припустити, що Phellinns igniarius буде мати таку активність щодо Escherichia coli було неможливо. В основу корисної моделі поставлена задача виявлення антибактеріальної активності міцелію та культуральної рідини штаму базидіального гриба Phellinus igniarius (Fr.) Quel. 29 проти Escherichia coli, що дозволить використати їх як основу для отримання біопрепаратів і лікарських засобів, що мають антибіотичну активність відносно цих патогенних для людини і тварин бактерій. Поставлена задача вирішується наступним чином. Штам Phellinus igniarius (Fr.) Quel. 29 було отримано з колекції культур шапинкових грибів Інституту ботаніки ім. М.Г. Холодного НАН України [Бухало А.С. Каталог колекції культур шапинкових грибів ІБК / А.С. Бухало, Н.Ю. Митропольская, О.Б. Михайлова. - К.: Алтерпрес, 2011. 100 с.]. Міцелій культивували поверхнево на рідкому глюкозо-пептон-дріжджовому живильному середовищі (ГПД), г/л: глюкоза - 25,0; пептон - 3,0; дріжджовий екстракт - 2,0; KН2РО4-1,0; K2НРО4-1,0; MgSO4  7 Н2О-0,25; вода - 1 л.) та на натуральному середовищі із 1 UA 121324 U 5 10 15 20 борошном із шроту амаранту після СО 2-екстракції (60 г на 1 літр дистильованої води) 14 днів за температури 26±2 °C. Нативний гомогенізований міцелій та відокремлену упарену (в 5 разів) культуральну рідину наносили на стерильні диски з фільтрувального паперу діаметром 8 мм, які розміщували в чашки Петрі на поверхню агаризованого м'ясопептонного середовища, попередньо інокульоване бактеріями. Як тест-культури використовували: Staphylococcus aureus 209, Bacillus subtilis ATCC 6633 та Escherichia coli 06, які були люб'язно надані Кафедрою біотехнології НТУУ "КПІ ім. І. Сікорського" з колекції культур мікроорганізмів. Спорові добові 6 суспензії мікроорганізмів (1,510 КУО/мл) культивували за температури 37 °C. Після інкубування в термостаті (37 °C) протягом доби антимікробну активність грибів визначали вимірюванням діаметра зон затримки росту тест-організму методом дифузії в агар за допомогою паперових дисків [Билай В.И. Методы экспериментальной микологии / В.И. Билай. К.: Наукова думка, 1982. - 552 с.]. Повторність дослідів трикратна, результати експериментів оброблено методами математичної статистики з використанням статистичних функцій Excel з використанням програмного забезпечення Microsoft Office XP, Програма 11.5 Version (SPSS, Inc., 2002). Значення представлені у вигляді середніх значень ± стандартна помилка середнього (SEM). Відмінності при Р 25 мм в діаметрі). Таким чином, перевагою заявленого штаму Phellinus igniarius (Fr.) Quel. 29 у формі міцелію, культивованого на ГПД живильному середовищі, та культуральної рідини є високі антибактеріальні властивості (повне інгібування росту бактерій Escherichia coli) в порівнянні з відомими антимікробними препаратами і вибірковість дії, виражена в активному пригніченні зростання Escherichia coli, не впливаючи при цьому на інші мікроорганізми. Штам може використовуватися для промислового отримання засобу, що має антибактеріальну активність щодо Escherichia coli. ФОРМУЛА КОРИСНОЇ МОДЕЛІ 15 Штам базидіального гриба Phellinus igniarius (Fr.) Quel. 29 у формі нативного міцелію та культуральної рідини, що виявляє високу антибактеріальну активність відносно бактерій Escherichia coli. Комп’ютерна верстка Г. Паяльніков Міністерство економічного розвитку і торгівлі України, вул. М. Грушевського, 12/2, м. Київ, 01008, Україна ДП “Український інститут промислової власності”, вул. Глазунова, 1, м. Київ – 42, 01601 3