Спосіб діагностики дисфункції канальцевого апарату паренхіми нирок у дітей з вродженим міхурово-сечовідним рефлюксом

Спосіб діагностики дисфункції канальцевого апарату паренхіми нирок у дітей з вродженим міхурово-сечовідним рефлюксом, який включає визначення у сечі рівня активності ферменту 3 17442 4 рменту ушкодження проксимальних канальців непним чином: у дітей в сечі із сечового міхура вифрону, у дітей з різним ступенем вираженості значають рівні загальної активності лізосомного останнього. ферменту N-ацетил- -D-глюкозамінідази, для чого Недоліками способу є те, що в сечі дітей з мів пробірку беруть 0,2мл профільтрованої сечі і хурово-сечоводним рефлюксом визначають вірогідодають до них 0,3мл 0,1Μ нитратного буферу рН дні зміни активності N-ацетил- -D-глюкозамінідази 4,15 та 0,2мл субстрату, який включає 10мМ розсечі тільки у хворих з міхурово-сечовідним рефлючин 4-нітрофеніл-2-ацетамідо-2-дезоксі- -Dксом V ступеня, вже у далекосяжній стадії вроджеглюкопіранозиду у 0,1Μ цитратному буфері рН ного патологічного процесу, в той час як у дітей з І 4,15. Проби інкубують 30 хвилин при 37°С, потім - IV стадією захворювання змін загальної активнореакцію зупиняють додаванням 0,8мл 0,1Μ розчисті ферменту порівняно з контролем не виявляну вуглекислого натрію. Оптичну щільність парають, визначають також рівні тільки загальної актинітрофенолу, що утворився, вимірюють на фотоевності N-ацетил- -D-глюкозамінідази, не лектроколориметрі при 400нм проти контрольної проводять індивідуальний аналізу отриманих репроби, у яку розчин субстрату вносять після призультатів, а обмежуються лише обчисленням сепинення ферментативної реакції. Ферментативну редніх даних - середньої арифметичної та її похиактивність N-ацетил- -D-глюкозамінідази сечі розбки (М±m), не враховують при реєстрації раховують у мкмолях пара-нітрофенолу, що утвоконтрольних рівнів активності ферменту в сечі рився протягом 1 години, із розрахунку на 1ммоль середнього квадратичного відхилення ( ) - великреатиніну сечі, вміст якого визначають за кольочину, що дає уявлення про ступінь варіювання ровою реакцією Яффе з пікриновою кислотою. показників та розрахунку на цій підставі відповідЯкщо рівні загальної активності N-ацетил- -Dних меж розподілу між здоровими та хворими діглюкозамінідази сечі реєструються у межах нортьми. мальних величин, тобто у діапазоні від 6,2 до Відомо також, що рівні активності термостабі17,1мкмоль/год/ммоль креатиніну, у дітей в сечі із льного ізоферменту N-ацетил- -D-глюкозамінідази сечового міхура додатково визначають рівні активності її термостабільного ізоферменту N-ацетил- N-ацетил- -D-глюкозамінідази В - мають більш виражені реноспецифічні властивості, ніж рівні -D-глюкозамінідази В, для чого порції сечі інкубузагальної активності цього ферменту, що дуже ють при 50°С на протязі 3 годин, після чого визнаважливо для діагностики прихованих ознак дисфучення ензимологічної реакції проводять за вищеонкції паренхіми нирки. писаним методом. Випадки, коли рівні активності В основу корисної моделі поставлена задача N-ацетил- -D-глюкозамінідази В сечі стало переудосконалити спосіб діагностики дисфункції канабільшують величину 2,3мкмоль/год/ммоль креатильцевого апарата паренхіми нирок у дітей з вроніну, оцінюють як дисфункцію канальцевого апарадженим міхурово-сечоводним рефлюксом шляхом та паренхіми нирок. визначення у сечі дітей рівнів активності її термосАпробація способу діагностики дисфункції катабільного ізоферменту N-ацетил- -Dнальцевого апарата паренхіми нирок у дітей з глюкозамінідази В у тих випадках, коли рівні загавродженим міхурово-сечоводним рефлюксом проведена у відділі дитячої урології та у лабораторії льної активності N-ацетил- -D-глюкозамінідази біохімії Інституту урології АМН України у 103 дітей реєструють у межах нормальних величин, з пода(87 дівчаток та 16 хлопчиків) віком від 1 року до 15 льшою оцінкою канальцевої дисфункції паренхіми років з верифікованим діагнозом - міхуровонирок залежно від рівнів активності ізоферменту сечоводний рефлюкс та у 25 практично здорових N-ацетил- -D-глюкозамінідази В, що дасть можлидітей того ж віку (контрольна група). вість своєчасно діагностувати певні зміни функціоОтримані результати показали, що у сечі здонального стану канальцевого відділу нефрону та рових дітей загальна активність N-ацетил- -Dвикористовувати одержані дані для подальшої глюкозамінідази з урахуванням середньої арифтактики ведення хворих з вродженим міхуровометичної величини та її похибки (М±m) дорівнює сечоводним рефлюксом - спостережливої чи акти11,64±0,72мкмоль/год/ммоль креатиніну, =3,61, вного лікування. Поставлена задача вирішуєтьсятим, що споактивність її термостабільного ізоферменту Nсіб діагностики дисфункції канальцевого апарата ацетил- -D-глюкозамінідази В дорівнює паренхіми нирок у дітей з вродженим міхурово1,56±0,096, =0,48 відповідно. Для визначення сечоводним рефлюксом, який включає визначення меж загальної активності N-ацетил- -Dу сечі рівня активності ферменту N-ацетил- -Dглюкозамінідази та активності N-ацетил- -Dглюкозамінідази, згідно з корисною моделлю, при глюкозамінідази В у сечі здорових дітей дотримурівнях активності N-ацетил- -D-глюкозамінідази валися рекомендацій В.В. Власова (3), який засечі у межах нормальних величин, додатково випропонував для встановлення меж референтних значають рівень активності її термостабільного інтервалів використовувати формулу М±1,5 . З ізоферменту N-ацетил- -D-глюкозамінідази В, та урахуванням величин середнього квадратичного стале збільшення рівня активності N-ацетил- -Dвідхилення (1,5 ) нижня межа загальної активносглюкозамінідази В сечі вище за ті N-ацетил- -D-глюкозамінідази у сечі здорових 2,3мкмоль/год/ммоль креатиніну оцінюють як дисдітей дорівнює 6,2, верхня межа функцію канальцевого апарата паренхіми нирок. 17,1мкмоль/год/ммоль креатиніну, нижня межа Спосіб діагностики дисфункції канальцевого активності N-ацетил- -D-глюкозамінідази В дорівапарата паренхіми нирок у дітей з вродженим мінює 0,8, верхня межа - 2,3мкмоль/год/ммоль креахурово-сечоводним рефлюксом виконують настутиніну. Тобто, якщо загальна активність N-ацетил 5 17442 6 -D-глюкозамінідази сечі реєструється у інтервалі значуще підвищення активності N-ацетил- -Dвід 6,2 до 17,1мкмоль/год/ммоль креатиніну, а акглюкозамінідази В сечі у порівнянні як з контрольною групою (група 3), так і з групою дітей, у яких тивність N-ацетил- -D-глюкозамінідази В сечі відактивність цього ізоферменту реєструвалася у повідно у інтервалі від 0,8 до інтервалі нормальних величин, тобто у діапазоні 2,3мкмоль/год/ммоль креатиніну, то чисельні рівні від 0,8 до 2,3мкмоль/год/ммоль креатині ну (група їх активності відповідають контрольним значен2). Дані наведені у таблиці. ням. Випадки, коли загальну активність N-ацетилЯк свідчать наведені в таблиці дані, порівнян-D-глюкозамінідази визначають у інтервалі від 6,2 ня середніх величин рівнів загальної активності Nдо 17,1мкмоль/год/ммоль креатиніну, а активність ацетил- -D-глюкозамінідази та активності NN-ацетил- -D-глюкозамінідази В у цих же пацієнтів ацетил- -D-глюкозамінідази В у сечі дітей з вроє стало вищою за 2,3мкмоль/год/ммоль креатинідженим міхурово-сечоводним рефлюксом з підвину, розцінюють як дисфункцію канальцевого апарата паренхіми нирок. щеною активністью N-ацетил- -D-глюкозамінідази Індивідуальний аналіз групи дітей з вроджеВ сечі (група 1) з аналогічними показниками з конним міхурово-сечоводним рефлюксом, показав, трольної групи здорових дітей (група 3), а також з показниками дітей з групи, де активність N-ацетилщо загальна активність N-ацетил- -D-D-глюкозамінідази В не відрізнялася від контроглюкозамінідази із 103 пацієнтів у 57 (~55%) визначалася у межах нормальних величин (33 - з льної групи (група 2), виявило статистичнo вірогідоднобічною патологією, 24 - з двобічною), тобто у не підвищення активності тільки термостабільного діапазоні від 6,2 до 17,1мкмоль/год/ммоль креатиізоферменту N-ацетил- -D-глюкозамінідази В у ніну. Індивідуальний аналіз, проведений у дітей з сечі хворих дітей з групи 1, у той час як загальна вродженим міхурово-сечоводним рефлюксом з активність N-ацетил- -D-глюкозамінідази у досліоднобічною патологією (виключення впливу проджуваних групах дітей з вродженим міхуровотилежної нирки на показники ферментативної аксечоводним рефлюксом (групи 1 та 2) не відрізнятивності у сечі з сечового міхура), у яких загальна лася від показників контрольної групи, що підтверактивність N-ацетил- -D-глюкозамінідази реєструджує правильність підходу до встановлення меж валася у межах показників контролю, показав, що розподілу між здоровими та хворими дітьми. із 33 пацієнтів у 23 (~70%) (група 1) мало місце Таблиця Загальна активність N-ацетил- -D-глюкозамінідази (НАГ) сечі та активність її термостабільного ізоферменту НАГ В (в мкмоль/год/ммоль креатиніну) у дітей з однобічним міхурово-сечоводним рефлюксом, у яких загальна активність НАГ реєструвалася у межах нормальних величин (М±m) Групи обстежених 3 загальною активністю НАГ сечі у межах нормальних величин та активністю НАГ В сечі вищою за верхню межу нормальних величин (група 1) n=23 3 загальною активністю НАГ сечі та активністю НАГ В сечі у межах нормальних величин (група 2) п=10 Контрольна група (група 3) n =25 Μ±1,5 p1-2 p1-3 p2-3 Таким чином, якщо у дітей з вродженим міхурово-сечоводним рефлюксом рівні як загальної активності N-ацетил- -D-глюкозамінідази, так і активності її термостабільного ізоферменту Nацетил- -D-глюкозамінідази В відповідають контрольним значенням, то це свідчить про неушкодженість клітинних та лізосомних мембран та про можливість подальшого спостереження та консервативного ведення цих пацієнтів, а у випадках успішного лікування міхурово-сечоводного рефлюксу у подальшому вважати цих дітей практично здоровими. Якщо ж загальна активность N-ацетил- -Dглюкозамінідази реєструється у межах показників Активність загальної НАГ Активність НАГ В (мкмоль/год/ммоль креати- (мкмоль/год/ммоль креатиніну) ніну) 13,83±1,02 4,29±0,44 10,89±1,17 1,62±0,13 11,64±0,72 6,2-17,1 >0,05 >0,05 >0,05 1,56±0,10 0,8-2,3