Спосіб одержання полівалентної аутовакцини для лікування гнійно-септичних захворювань

Спосіб одержання полівалентної аутовакцини для лікування гнійно-септичних захворювань, що полягає у відборі патогенного матеріалу від хворої людини, ізоляції та ідентифікації мікроорганізмів, нарощуванні бактерійної маси та її знезаражуван 3 мікрофлорою. Він заснований на ізоляції чистих культур мікроорганізмів, відборі вірулентних колоній, вирощуванні культури на чашках з целофаном, змиві з чашок культури апірогенною дистильованою водою, титруванні суспензії відповідно до стандарту мутності (ГІСК ім. Л.А.Тарасевича) до 2млрд. в 1,0мл, інактивації патогенного матеріалу кип'ятінням впродовж 45-60 хвилин при +100110°С, розливі індивідуального антигенного матеріалу в ампули. Препарат вводять комбіновано, паралельно в шкіру та у м'язи по 0,5мл через 1-3 дні дозою 2млрд. мікробних клітин в 1мл, курсом 5 одномоментних ін'єкцій. Цей спосіб був обраний прототипом. Зазначений спосіб характеризується такими недоліками: - антигени мікроорганізмів піддають тривалому кип'ятінню, внаслідок чого змінюються антигенні властивості, а це суттєво знижує імуногенну активність аутовакцини; - введення одержаного препарату здійснюють без визначення можливої алергічної дії на введення препарату. У зв'язку з цим в основу способу одержання полівалентної аутовакцини для лікування гнійносептичних захворювань поставлена задача підвищення імуногенних та імуномодулюючих властивостей вакцини введенням до її складу додатково речовин біологічного походження, що виконують роль ад'ювантів, та поряд з цим не призводять до руйнування антигенів. Поставлена задача досягається тим, що запропонований нами спосіб одержання полівалентної аутовакцини для лікування гнійно-септичних захворювань полягає у відборі патогенного матеріалу від хворої людини, ізоляції та ідентифікації мікроорганізмів, нарощуванні бактерійної маси та її знезаражування. Додатково до складу вакцини вводять культуру бактерій Klebsiella pneumonia spp. Осади кожної ізольованої культури бактерій із одержаного патогенного матеріалу від хворого та окремо вирощеної культури Klebsiella pneumonia spp. відмивають фізіологічним розчином. Кожну культуру окремо обробляють гідролізованим риб'ячим жиром (фармпрепаратом „Ектеріцид"), витримують 3-5 діб при 37°С, потім всі одержані антигени об’єднують у рівних об'ємах у полівалентну вакцину та додатково термостатують протягом доби при 37°С. Полівалентну вакцину готують наступним чином. Відбірають патогенний матеріал у хворих: - з гострою або хронічною інфекцією верхніх дихальних шляхів; - з гнійників шкіри (фурункули, карбункули, гнійничкові висипання Acne vulgaris); - із слизових оболонок людини при захворюваннях сечостатевих органів чоловіків та жінок; - із гнійних уражень шкіри та ран після хірургічного втручання. Матеріал від хворого одержують за допомогою стерильних бавовняних тампонів. Тампони поміщають у пробірки з стерильним глюкозним бульйоном та розміщують у термостат при +37°С на 24 години. Роблять посіви на агарові диференціально-діагностичні середовища (кров'яний агар, сере 17912 4 довище Ендо, сольовий агар, живильний агар), вирощують посіви впродовж 24 годин при +37°С. Відбирають колонії характерні для коків, грамнегативних мікроорганізмів, готують мазки з колоній, фіксують матеріал на предметному склі, забарвлюють по Граму. Колонії характерні для патогенних та умовно-патогенних мікроорганізмів відсівають на живильний бульйон та після витримки впродовж 24 годин у термостаті при +37°С висівають на щільний живильний агар, та на щильне живильне середовище для визначення чутливості до антибіотиків, культури знову вирощують 24 години при +37°С. Окремо, за тих же умов, вирощують культуру бактерій Klebsiella pneumonia spp. Газони кожної зрослої культури із патогенного матеріалу та бактерій Klebsiella pneumonia spp. змивали 5,0-7,0мл забуференого стерильного фізіологічного розчину (рН 7,2-7,4) у пробірки. Відповідно до стандарту мутності (ГІСК) концентрацію мікроорганізмів фізіологічним розчином доводили до 107 мікробних клітин в 1,0мл. Відбирали по 5,07,0мл кожної суспензії в окремі пробірки. Суспензії мікроорганізмів центрифугували при 2,5-3,0тис./хв. 15 хвилин. Окремо до кожного осаду мікроорганізмів приливали 5,0-7,0мл гідролізованого риб'ячого жиру (ектерициду). Біологічну речовину ектерицид використовували для інактивації мікроорганізмів та їх токсинів [Ectericidium - виробник ЗАТ "Біолік", м.Харьків, Помірки, наказ МОЗ України від 11.12.2001р.№495]. Суспензії кожного мікроорганізму, включаючи суспензію Klebsiella pneumonia spp., з доданим до суспензій ектерицидом, в окремих пробірках,розміщували у термостат на 3 доби при +37°С, кожної доби струшували, контролювали стерильність. Через 3 доби стерильні суспензії об'єднували в одній ємності у рівних об'ємах, знову розміщували в термостат на одну добу, контролювали стерильність. Стерильну полівалентну вакцину вносили в ампули по 1,0мл, запаювали, контролювали цілість ампул, підписували та використовували за призначенням. Імуногенну активність полівалентної вакцини вивчали на 2-х групах білих щурів (по 10 тваринок в кожній). В першій групі (дослідній) на білих щурах досліджували імуногенну активність полівалентної вакцини за накопиченням антитіл проти Staphylococus aureus та Streptococcus gr.DStr.faecalis, а також до ад'юванту Klebsiella pneumoniae, обробленого ектерицидом. Вакцину в об'ємі 5,0мл на одну ін'єкцію вводили двічі з однотижневим інтервалом внутрішньочеревним методом. Паралельно другій (контрольній) групі білих щурів вводили антигени, до яких у якості ад'юванту додавали культуру Escherichiae coli, також оброблену ектерицидом. Через 10 діб після введення вакцини, щурів під етером забивали, відбирали кров та оглядали внутрішні паренхіматозні органи, лімфатичні вузли. Визначення рівня антитіл проводили у об'ємній реакції аглютинації. У якості антигенів використовували культури, що брали для імунізації. Культуру Klebsiella pneumoniae перед постановкою реакції аглютинації прогрівали при +100°С 15 хвилин. Рівень специфічних аглютинуючих антитіл у 5 17912 сироватках крові білих щурів до антигенів Staphylococus aureus, та Streptococcus gr.DStr.faecalis, та до ад'ювантів Klebsiella pneumoniae, 6 Escherichiae coli, отриманих при обробці їх ектерицидом та об'єднаних у полівалентні антигени наведено у Таблиці 1. Таблиця 1 Титри антитіл у сироватках крові імунізованих білих щурів Титри антитіл до Титри антитіл до St.gr.Dгр.1 №№ Staph. aureus + гp.2 №№ St.gr.DStr.faecalis + Kl.pneum. Staph. aureus щурів Kl. pneum. щурів Str.faecalis Kl.pneum. 1 1:640 1:640 1:640 1 1:160 1:80 2 1:320 1:320 1:640 2 1:320 1:80 3 1:160 1:160 1:320 3 1:80 1:80 4 1:640 1:640 1:640 4 1:40 1:40 5 1:80 1:80 1:160 5 1:160 1:160 6 1:320 1:640 1:640 6 1:160 1:80 7 1:320 1:320 1:320 7 1:80 1:40 8 1:320 1:320 1:320 8 1:80 1:40 9 1:160 1:160 1:160 9 1:160 1:80 10 1:160 1:160 1:320 10 1:160 1:80 Середньо геометричні титри 367,6 259,9 367,6 121,3 69,6 Інтервальні величини від 248,5 від 162,3 від 248,5 від 79,8 від 50,9 до 543,8 до 416,3 до 543,8 до 184,3 до 95,3 Середньогеометричні титри антитіл до Staph. aureus та St.gr.D- Str.faecalis з високою ступінню достовірності (р