Спосіб зниження рівня оксиду азоту в організмі людини і тварин

Изобретение относится к области медицины, а именно, к способам снижения уровня оксида азота, гиперпродукция которого в организме приводит к развитию ряда тяжелых патологических состояний. Известен способ снижения уровня оксида азота в организме заключающийся в том, что двухвалентное железо, находящееся в организме в составе гемовых и негемовых белков и лабильных соединений, включающих цистеин или восстановленный глютатион, связывает оксид азота [Ванин А.Ф., Мордвинцев П.И. Динитрозильные комплексы железа с тиолсодержащими лигандами и их обратимое превращение в нитрозотиолы. Биохимия. - 1993. - Т. 58. - Вып. 7. -С. 1094-1103]. Однако этот способ не позволяет при определенных патологических состояниях предотвратить избыточное накопление оксида азота в силу нестабильности образующихся комплексов в физиологических условиях и ограниченного количества компонентов, способных их формировать. Наиболее близким к заявляемому является способ снижения уровня оксида азота путем введения в организм низкомолекулярного соединения с SH-группами, а именно, диэтилдитиокарбамата (C5H10NS2Na). Это соединение образует комплекс с находящимся в организме двухвалентным железом, который связывает оксид азота [Галаган М.Е., Орановский Е.В., Ванин А.Ф. Гипотензивный эффект динитрозильных комплексов железа в опытах на бодрствующих животных//Бюл. ВКНЦ АМН СССР. -1988. Т. 12 - №2.- C.75-80]. Однако значительная токсичность диэтилдитиокарбамата ограничивает его использование и не позволяет нормализовать содержание оксида азота в организме. Задачей изобретения является разработка способа снижения уровня оксида азота, позволяющего путем введения в организм нового комплексного соединения эффективно связывать оксид азота в физиологических условиях без вредных последствий для организма. Для этого способ снижения уровня оксида азота в организме человека и животных путем введения низкомолекулярного соединения с SH-группами предусматривает введение его в комплексе с соединениями двухвалентного железа. В качестве низкомолекулярного соединения с SH-группами используют унитиол. В качестве соединений двухвалентного железа используют сульфат железа или железо-аскорбиновую кислоту. Способ осуществляется в такой последовательности. 1. Приготовляют комплекс унитиола с сульфатом железа или железо-аскорбиновой кислотой. Для этого в стеклянный стакан вносят сухие навески по 0,1 моля унитиола (C3H7S3O3Na) и сульфа та железа (FeSO4 ×7Н2О) гидрата или железо-аскорбиновой кислоты (С6Н8О6 ×FeO)×1 /2FeSO4 ×4Н2О), растворяют и х в воде и доводят pH раствора до 7,3 раствором 7,5%-ного бикарбоната натрия (NaHCO3). Получают прозрачный темно-малинового цвета раствор без запаха. 2. Измеряют спектр оптического поглощения на спектрофотометре Specord M-40 (Carl Zeiss Jena). Образование комплекса подтверждается появлением характерных максимумов поглощения. Для комплекса унитиола с сульфатом железа это максимумы на 355 нм и 540 нм, а для комплекса унитиола с железо-аскорбиновой кислотой - на 265, 355 и 540 нм (фиг. 1,2). 3. Полученный комплекс вводят в организм животных. 4. Отбирают пробы крови, ткани печени и мочи. Биоматериалы, замораживают в жидком азоте и помещают в резонатор ЭПР спектрометра "Varlan E 109" (USA). При этом наблюдается сигнал, характерный для нитрозильного железотиолового комплекса с введенным препаратом. Способность комплекса унитиола с соединениями двухвалентного железа эффективно связывать оксид азота в условиях In vitro подтверждают следующие примеры. Пример 1. Получают лиэат эритроцитов крови крыс суспендированием эритроцитов в дистиллированной воде (Vэр/Vвод 1:10). В две пробирки вносят по 2 мл полученного лизата. В одну из пробирок добавляют 0,5 мл комплекса унитиола с железо-аскорбиновой кислотой (опыт), а в другую 0,5 мл воды (контроль). Через содержимое обеих пробирок в течение 5 минут продувают газовую смесь, состоящую из 1% NO и 99% N2. Отбирают по 0,5 мл из каждой пробирки, замораживают в жидком азоте и помещают в резонатор ЭПР спектрометра "Varian Е 109" (USA). Измерения проводят при следующи х параметрах: диапазон изменения магнитного поля 2500-3500 Тл; частота СВЧ поля 9,3-9,8 GГц; мощность 5 мВт. В контроле наблюдается сигнал ЭПР, характерный для комплекса оксида азота с гемоглобином (g=2.03) (фиг. 3), а в опыте - сигнал ЭПР, характерный для нитрозильного комплекса с введенным препаратом (g=2.005) (фиг. 4). Полученные результаты указывают на то, что введенный комплекс унитиола с железо-аскобиновой кислотой связывает оксид азота более эффективно, чем гемоглобин. Таким образом, заявляемый способ позволяет устранить отрицательное действие оксида азота в организме, в частности, предотвратить окисление гемоглобина. Пример 2. Получают гомогенат печени крыс гомогенизированием ткани печени в физиологическом растворе (W/V 1:10). Полученный гомогенат вносят по 2 мл в две пробирки. В одну из пробирок добавляют 0,5 мл комплекса унитиола с сульфатом железа (опыт), а в др угую - 0,5 мл воды (контроль). Через содержимое обеих пробирок в течение 5 минут продувают газовую смесь, состоящую из 1% NO и 99% N2. Затем отбирают по 0,5 мл гомогенета из каждой пробирки, замораживают в жидком азоте и помещают в резонатор ЭПР спектрометра "Varian E 109" (USA). Измерения проводят при тех же параметрах, что и в примере 1. В контроле наблюдается сигнал ЭПР, характерный для нитрозильного комплекса негемового железа с SH содержащими белками печени (g=2.037) ( фиг. 5), а в опыте - сигнал ЭПР нитрозильного комплекса с введенным препаратом (g=2.005) (фиг. 6). Результаты опыта указывают на то, что введенный по заявляемому способу комплекс унитиола с сульфатом железа связывает оксид азота, эффективно конкурируя с белками ткани, В качестве примера осуществления заявляемого способа снижения уровня оксида азота в организме приводим результаты следующего эксперимента. Проведены опыты на крысах линии Вистар весом 150-180 гр. Животных разделили на три группы. Крысам 1-ой и 2-ой групп (опытные) подкожно вводили по 0,4 мл комплекса унитиола с железоаскорбиновой кислотой. Через 15 минут после этого внутрижелудочно ввели раствор нитропруссида натрия (Na2[Fe(CN)2NO] ×2H2O), в количестве 30 мг/кг веса. Последний служит источником оксида азота в организме. Крысам 3-ей группы (контроль) ввели только раствор нитропруссида натрия. У животных 1-ой группы в течение полутора часов собирали мочу. Животных 2-ой и 3-ей группы умертвили декапитацией через 20 минут после введения нитропруссида натрия, отобрали кровь и ткань печени. Биоматериалы заморозили в жидком азоте, поместили в резонатор ЭПР спектрометра "Varian E 109" (USA) и произвели измерения. В крови и печени контрольных животных зарегистрированы сигналы ЭПР нитрозильных комплексов гемового (g=2.03) и негемового железа с SH- группами белков (g=2.037). В крови и печени опытных животных 2-ой гр уппы наблюдали снижение уровня сигналов относительно контрольных величин до 30%. В моче опытных крыс 1-ой группы обнаружены значительные количества введенного препарата и его комплекса с оксидом азота. Отсутствие вредных для здоровья последствий при использовании предлагаемого метода подтверждают следующие данные. 1. ЛД50 указанных выше препаратов используемых в предлагаемом способе снижения уровня оксида азота в организме составило для мышей 1350 мг/кг массы тела, а для крыс - 820 мг/кг массы тела, что указывает на их малую токсичность. 2. Применение предлагаемого способа у крыс в субхроническом эксперименте в течение двух месяцев путем введения как одного, так и второго препарата в терапевтической дозе (1/100 ЛД50) не приводит к изменению массового коэффициента, а также таких биохимических показателей, как содержание малонового диальдегида, активности ацетилхолинэстеразы, монооксигеназной системы, аланин и аспартатаминотрансфераз, а также содержание метгемоглобина и мочевины в крови. При этом происходит возрастание уровня ретикулоцитов на (15±2)% (N=6)и естественных киллеров (43±9)% (N=6) в периферической крови, что указывает на усиление эритропоэза и резистентности организма. Таким образом, заявляемый способ позволяет эффективно связывать оксид азота в физиологических условиях и выводить избыток его из организма, что, в свою очередь, будет способствовать выживаемости различных типов клеток, в том числе клеток иммунной системы, лечению иммунодефицитов, шоков различной этиологии, диабета и други х патологических состояний.