Спосіб виявлення похідних барбітурової кислоти

1 Спосіб виявлення похідних барбітурової кислоти, що включає нанесення на пробу, що аналізується, індикатора, який складається з розчину 1 і розчину 2 та встановлення присутності похідних барбітурової кислоти у пробі візуально через зміну кольору, який відрізняється тим, що готують розчин 1, який містить в мас % 3 2 сульфат МІДІ 8,2 х Ю - 2 , 6 х Ю 1 поверхнево-активну (2,1 -7,0) х Ю речовину у середовищі ацетатного буферного розчину з рН 6,8 -7,0, та готують розчин 2, який містить в мас % хромазурол s (1,1-5,4) х 1 0 2 дифенілкарбазон у (1,2- 2,4) х 10 2 диметилформаміді 2 Спосіб за п 1, який відрізняється тим, що при виявленні похідних барбітурової кислоти у сухих пробах у розчин 1 додають (1,0-1,2) х 10 мас % фториду амонію Винахід, що передбачається, має бути віднесений до розділу аналітичної хімії, а саме до способів виявлення похідних барбітурової кислоти, і може бути застосований при якісному визначенні похідних барбітурової кислоти у субстанціях, готових фармацевтичних сумішах, скринінгу психотропних речовин ПОХІДНІ барбітурової кислоти входять у велику групу психотропних речовин Неконтрольоване споживання психотропних речовин зростає У зв'язку з цим зростає необхідність у розробці все нових швидких та чутливих методів для виявлення та ідентифікації барбітуратів у позалабораторних умовах Найбільш поширеними засобами для такого виявлення є тести, дія яких заснована на кольорових ХІМІЧНИХ реакціях розчинів реактивів із дослідними об'єктами ЗОВНІШНІЙ ефект - зміна кольору - використовується як показник можливої присутності барбітуратів Відомо спосіб виявлення похідних барбітурової кислоти з саліциловим альдегідом Під час нагрівання барбітуратів з розчинами їдкого лугу та гіпохлориту барбітурати розкладаються до пдразіну, який негайно реагує з індикатором саліциловим альдегідом Саліцилальдазин, який утворився, флуоресціює жовто-зеленим кольором в ультрафіолетовому освітленні Щоб здійснити тестування, необхідно до дослідного розчину до дати по краплі розчин гіпохлориту натрію та їдкого лугу Суміш нагрівають 3 хвилини на бані, що кипить, додають концентровану оцтову кислоту, декілька краплин спиртового розчину саліцилового альдегіду Спосіб застосовано для зразків фенобарбіталу та барбіталу Межа визначення барбітурату 20-25мкг [Ф Файгль Капельный анализ органических веществ, М ГХИ, 1962, С 712] Спосіб виявлення барбітуратів, який описано, незручний під час проведення аналізу у позалабораторних умовах, тому що для його здійснення потрібно мати лабораторне обладнання та посуд Відомий спосіб ідентифікації барбітуратів з родаміном 6Ж Коли взаємодіють аніони барбітуратів з катіонами основного барвника, утворюється сполука світло-оранжевого або оранжевочервоного кольору Щоб здійснити тестування, необхідно до водного розчину, який вміщує речовину, що аналізується, додати хлороформний розчин родамшу 6Ж У присутності барбітуратів хлороформний шар забарвлюється Нижня межа визначення барбамілу та етамшал-натрію дорівнює 40мкг у пробі, а гексеналу - ЗОмкг [Попова В И , Крамаренко В П , Фармацевтический журнал, 1981, № 1 , С 76] Способу притаманні такі недоліки - тест придатний для виявлення тільки солі барбітурату у розчинах, 1 О о 44007 - спосіб не можливо застосувати для швидкого визначення похідних барбітурової кислоти у порошках, - використовується токсичний розчинник хлороформ Найбільш близьким до винаходу, що передбачається, є спосіб виявлення похідних барбітурової кислоти, який застосовують при визначенні барбітуратів під час ідентифікації наркотиків та інших психотропних речовин [Патент США 41040027, G 01 №33/16,108 78] У способі використовують індикатор - реактив Dille-Koppanji Спосіб полягає утому, що подрібнену пробу (близько 2-Змг) поміщають на пластинку та змочують пробу розчинами реактиву Dille-Koppanji у КІЛЬКОСТІ близько 0,5мл Реактив Dille-Koppanji складається з розчину 1 та розчину 2 Розчин 1 вміщує 2,8г ацетату кобальту, 7,6мл оцтової кислоти, 3095мл ізопропілового спирту, 700мл води Розчин 2 вміщує 190мл ізопропіламіну, 3595мл ізопропілового спирту Розчини 1 та 2 реактиву містяться у скляних ампулах, що запаяні (при тестуванні ампули розбивають) За 1 хвилину, як додали і другу частину реактиву Dille-Koppanji - розчин 2 - спостерігають за зміною кольору У присутності барбітуратів заявляється світлопурпуровий колір Якщо тестуванню підлягає розчин, то розчин заздалегідь випарюють Недоліками прототипу є - реагент Dille-Koppanji має низьку СТІЙКІСТЬ при зберіганні під впливом кисню реагент набуває бурого кольору, який заважає виявленню барбітуратів, - реагент застосовують обмежено - результати, які одержують при тестуванні, достовірні тільки при аналізі сухих проб, - реагент з низькою селективністю - проби, які тестують на виявлення похідних барбітурової кислоти, як у присутності барбітуратів, так і у присутності інших речовин змінюють колір однаково, - повільна швидкість реакції між реагентом та пробою, що аналізується, - колір, який змінюється у присутності похідних барбітурової кислоти, нестійкий - увесь час колір змінюється Завданням винаходу, що передбачається, була розробка способу виявлення похідних барбітурової кислоти, який би дозволив за рахунок застосування нових компонентів підвищити СТІЙКІСТЬ реагенту під час зберігання, збільшити можливість застосування способу для різних агрегатних станів проб, підвищити селективність виявлення барбітуратів, новий спосіб має бути застосований як кваліфікованим, так і некваліфікованим персоналом Рішення задачі, що була поставлена, досягнуто тим, що у способі виявлення похідних барбітурової кислоти, що включає нанесення на пробу, що аналізується, індикатору, який складається з розчину 1 і розчину 2 та встановлення присутності похідних барбітурової кислоти у пробі візуально через зміну кольору, згідно з винаходом, готують розчин 1, який містить в мас %, сульфат МІДІ 8,2 10 3 - 2,6 10 2, поверхнево-активну речовину (2,1 - 7,0) 10 1 у середовищі ацетатного буферного розчину з рН 6,8 - 7,0 та готують розчин 2, який містить в мас % хромазурол S (1,1 - 5,4) 10 2 , дифенілкарбазон (1,2 - 2,4) 10 2 у диметилформаміді При виявленні барбітуратів у сухих пробах у розчин 1 додають (1,0 - 1,2)10 мас % фториду амонію Сульфат МІДІ спільно з дифенілкарбазоном (ДФК) та хромазуролом S (ХА) призводить до утворення забарвленої змішаної комплексної сполуки типу іонного асоціату Си-ДФК-ХА Досліди, які були проведені, показали, що барбітурати руйнують червоно-фіолетовий асоціат При цьому колір розчину змінюється з червоно-фіолетового до жовтого У зв'язку з тим, що дифенілкарбазон не розчиняється у воді, застосовують розчин дифенілкарбазону в органічному розчиннику, який змішується з водою-диметилформаміді Неюногенна або анюногенна поверхневоактивна речовина запобігає випадінню асоціату, який утворився при взаємодії ІОНІВ МІДІ З ДФК та ХА, прискорює розчинення сухої проби, яка аналізується, завдяки кращому змочуванню Фторид амонію - маскуючий агент, який усуває вплив баластних речовин, які заважають сполук кальцію, магнію, алюмінію та інших, які містяться у сухих пробах і призводить до підвищення зміни кольору Процес утворення забарвленого асоціату відбувається у нейтральному середовищі, що утворюють за допомоги ацетатного буферного розчину Вивчено вплив кожного реагенту, щоб досягти поставленої задачі Для сухих сумішей, які тестуються на присутність барбітуратів, доцільно застосовувати концентрації хромазуролу S (4,0 - 5,4) 10 2 %, дифенілкарбазону (1,2 - 2,4) 10 2%, тритону X100 (2,1 -2,5) 10 1%, фториду амонію (1,0- 1,2) 10 2 %, сульфату МІДІ 8,2 10 3% (таблиця 1) Для розчинів, які тестуються на присутність барбітуратів, доцільно застосовувати концентрації хромазуролу S (1,0 - 1,5) 10 2%, дифенілкарбазону (1,2 - 2,4) 10 2 %, тритону X - 100 (6,0 - 7,0) 10 1%, сульфату МІДІ (2,4 - 2,6) 10 2 % Порушення концентраційних меж знижує контрастність зміни кольору розчину, який тестують на виявлення похідних барбітурової кислоти Схема виявлення похідних барбітурової кислоти включає такі етапи - готують індикатор, який складається з розчину 1 та розчину 2, - на пробу, що аналізується, наносять індикатор, чутливий до барбітуратів, - спостерігають за кольором розчину, який змінюється у присутності похідних барбітурової кислоти Таблиця 1 Вплив концентрацій компонентів на результат виявлення 20мкг барбітурату у порошку белатаміналу концентрація компонентів, мас % колір розчину примітка 5 сульфат 6 44007 МІДІ фторид амонію тритон X100 дифеніл кархромазурол S базон 8.2103 1,1 1 0 2 2,1 1 0 1 2.410 2 5.410 3 світло-рожевий поступове знебарвлення за 1-1,5 хв » » » » 1,3 10 2 світло-рожевий також » » » » 2.710 2 » » » » 4.010 2 жовтий » » » » 5.410 2 жовтий » » » » 1,3 10 1 жовто-зелений 8.2103 1,1 1 0 2 2,1 1 0 1 6.010 3 4.010 2 жовто-блакитний » » » 1,2 10 2 » жовтий » » » 2.410 2 » жовтий » » » 6.010 2 » 8.2103 1,1 1 0 2 6.510 2 2.410 2 4.010 2 » » 1,7 10 1 » » жовто-оранжевий » » 2,1 1 0 1 » » жовтий » » 2,5 10 1 » » жовтий (ІНОДІ жов то-рожевий) колір на протязі 20ЗОсек перетворюється у зелений погіршення контражовто-фіолетовий стності зміни кольору погіршення контражовто-оранжевий стності зміни кольору також жовто-зелений (ІНОДІ жовто блакитний) » » 4,5 10 1 » » жовто-оранжевий погіршення кольору » » 6,5 10 1 » » жовто-оранжевий також 3.410 3 2,1 1 0 1 2.410 2 4.010 2 » 5.010 3 » » » жовто-червоний » 1,1 1 0 2 » » » жовтий » 1,2 10 2 » » » жовтий » 1,5 10 2 » » » жовто-червоний погіршення контрастності зміни кольору » 2.410 2 » » » жовто-червоний також 1,1 1 0 2 2,1 1 0 1 2.410 2 4.010 2 жовто-оранжевий погіршення контрастності зміни кольору » » » » жовто-оранжевий також » » » » жовто-зелений колір швидко перетворюється у зелений 8.210 3 2.5103 5.0103 7.0103 зміни погіршення контражовто-фіолетовий стності зміни кольору також 44007 8.210 3 » » » » жовтий 9.010 3 » » » » жовто-сірий » » » » » » » » 1,2 10 2 2.510 2 Приклад 1 Методика проведення тестування для виявлення похідних барбітурової кислоти у порошках лікарських препаратів 1 1 Приготування індикатору Розчин 1 готують розчин, який містить 8,2 10 3 % сульфату МІДІ, 1,1 10 2 % фториду амонію, 2,1 10 1% тритону Х-100 у середовищі ацетатного буферного розчину з рН 6,9 Інші приклади приготування розчину 1 з концентраціями реагентів, які заявляються, наведені у таблиці 1 Розчин 2 готують розчин реагентів, який містить 2,4 10 2% дифенілкарбазону та 4,0 10 1% хромазуролу Sy диметилформаміді Розчин, який приготували, зберігають у темній склянці Термін зберігання розчину не менше 3 МІСЯЦІВ ІНШІ приклади приготування розчину 2 з концентраціями реагентів, які заявляються, наведені у таблиці 1 1 2 Проведення тестування На скло або крапельну пластину розташовують окрему порцію (на кінчику скальпелю близько 0,0010г) сухої проби, яка досліджується Пробу змочують 3 краплинами (об'ємом близько 0,09мл) розчину 1 та додають 1 краплю (об'ємом близько 0,03мл) розчину 2 Колір розчину візуально порівнюють з кольором контрольного розчину, що містить тіж самі КІЛЬКОСТІ розчину 1 та розчину 2, приготування яких наведено у розділі 11 У присутності барбітурату проба, яка досліджується, за 10-15 секунд забарвлюється у жовтий колір При тестуванні порошків можливо виявити не менше 5мкг похідних барбітурової кислоти у 1мг порошку Приклад 2 Методика проведення тестування для виявлення похідних барбітурової кислоти для розчинів лікарських препаратів 2 1 Приготування індикатору Розчин 1 готують розчин, який містить 2,51 2 Проведення тестування На скло або крапельну пластину розташовують окрему порцію (на кінчику скальпелю близько жовто-червоний погіршення контрастності, колір швидко перетворюється у зелений червоноблакитний також 0,0010г) сухої проби, яка досліджується Пробу змочують 3 краплинами (об'ємом близько 0,09 мл) розчину 1 та додають 1 краплю (об'ємом близько 0,03мл) розчину 2 Колір розчину візуально порівнюють з кольором контрольного розчину, що містить тіж самі КІЛЬКОСТІ розчину 1 та розчину 2, приготування яких наведено у розділі 11 У присутності барбітурату проба, яка досліджується, за 10-15 секунд забарвлюється у жовтий колір При тестуванні порошків можливо виявити не менше 5мкг похідних барбітурової кислоти у 1мг порошку Приклад 2 Методика проведення тестування для виявлення похідних барбітурової кислоти для розчинів лікарських препаратів 2 1 Приготування Індикатору Розчин 1 готують розчин, який містить 2,5 10 2 % сульфату МІДІ та 6,5 10 1% тритону Х-100 у середовищі ацетатного буферного розчину з рН 6,9 Розчин 2 готують розчин реагентів, який містить 2,4 10 2 % дифенілкарбазону та 1,3 10 2 % хромазуролу S у диметилформаміді 2 2 Проведення тестування На скло або крапельну пластину розташовують 1 краплину розчину, який досліджується (об'ємом близько 0,03мл), та додають по 1 краплині (об'ємом близько 0,03мл) розчину 1 і розчину 2 Колір розчину візуально порівнюють з кольором контрольного розчину, що містить 1 краплю дистильованої води і тіж самі КІЛЬКОСТІ розчину 1 та розчину 2, приготування яких наведено у розділі 2 1 У присутності барбітурату досліджувана проба за 10-15 секунд забарвлюється у жовтий колір При тестуванні розчинів можливо виявити не менше ЗОмкг похідних барбітурової кислоти в краплині (об'ємом близько 0,03мл) У таблиці 2 наведені результати скринінгу порошків або розчинів фармацевтичних препаратів на присутність похідних барбітурової кислоти за допомогою способу, що пропонується 44007 10 Таблиця 2 Скринінг фармацевтичних препаратів на присутність барбітуратів за допомогою способу, що пропонується група лікарських речовин препарат, який досліджується колір розчину висновок барбітурати фенобарбітал етамшал натрію барбітал барбаміл тепафілін белатаминал пенталгин корвалол еленіум сибазон феназепам жовтий реакція позитивна червоно-фіолетовий реакція негативна фенотіазини пропазин метеразин трифтазин блакитний реакція негативна саліцилати ацетил саліцилова кислота аскофен малиновий реакція негативна ПОХІДНІ антипірина анальгин антипірин червоно-фіолетовий реакція негативна сульфаміди сульфален стрептоцид сульфадимезин світло-червоний червоно-фіолетовий жовтий реакція негативна реакція негативна реакція позитивна ІНШІ димедрол парацетамол новокашамід оротат калію еуфілін но-шпа делапл новокаїн дибазол блакитний червоно-фіолетовий оранжевий жовтий жовтий жовтий жовтий фіолетовий світло-блакитний реакція реакція реакція реакція реакція реакція реакція реакція реакція бенздіазепини Запропонований спосіб виявлення похідних барбітурової кислоти дозволяє - прискорити виявлення барбітуратів в пробах, що аналізуються, - підвищити СТІЙКІСТЬ реагента під час зберігання, - підвищити селективність виявлення барбітуратів, - збільшити можливість застосування для різних агрегатних станів проб Запропонований спосіб може бути застосова негативна негативна негативна позитивна позитивна позитивна позитивна негативна негативна но як у лабораторних, так і позалабораторних умовах, як кваліфікованим, так і некваліфікованим персоналом При тестуванні порошків межа визначення барбітуратів 5мкг в 1 мг порошку, а при тестуванні розчинів межа визначення барбітуратів ЗОмкг в краплині об'ємом 0,03мл Спосіб планується застосувати для швидкої експертизи наявності барбітуратів у фармацевтичних препаратів, при митному контролі, а також в медичних установах ДП «Український інститут промислової власності» (Укрпатент) вул Сім'ї Хохлових, 15, м Київ, 04119, Україна (044) 456 - 20 - 90