Платиновий комплекс, спосіб його одержання, комплекс включення платинового комплексу, спосіб його одержання та фармацевтична композиція

1 Платиновий комплекс зі ступенем окиснення II формули (І) де X являє собою атом галогену, А являє собою групу -NH2-R, де R є трициклічною вуглеводневою частиною, що містить від 10 до 14 атомів вуглецю, яка може бути необов'язково заміщена на трициклічному КІЛЬЦІ однією або двома алкільними групами, що мають від 1 до 4 атомів вуглецю 2 Комплекс включення платинового комплексу зі ступенем окиснення II формули (І) де X являє собою атом галогену, А являє собою групу NH2-R, де R є трициклічною вуглеводневою частиною, що містить від 10 до 14 атомів вуглецю, яка може бути необов'язково заміщена на трициклічному КІЛЬЦІ однією або двома алкільними групами, кожна з яких містить від 1 до 4 атомів вуглецю, з бета- або гамма-циклодекстрином, який може бути необов'язково заміщений пдроксіалкільною групою, що має від 1 до 6 атомів вуглецю З Платиновий комплекс за п 1 загальної формули (І), який відрізняється тим, що А являє собою адамантиламшогрупу, і X має значення, вказане у п 1 4 Платиновий комплекс за п 1 загальної формули (І), який відрізняється тим, що А являє собою 3,5диметиладамантиламіногрупу, і X має значення, вказане у п 1 5 Спосіб одержання платинового комплексу загальної формули (І) за п 1, який відрізняється тим, що розчин солі лужного металу амінтригалогенплатинату (II) у полярному органічному розчиннику або у воді піддають реакції з первинним аміном формули R-NH2, де R є трициклічною водневою частиною, що містить від 10 до 14 атомів вуглецю, яка може бути необов'язково заміщена на трициклічному КІЛЬЦІ ОДНІЄЮ або двома алкільними групами, що мають від 1 до 4 атомів вуглецю, при температурі у межах від 0 до 100°С 6 Спосіб одержання комплексу включення платинового комплексу загальної формули (І) з бета- або гамма-циклодекстрином, який може бути необов'язково заміщений пдроксіалкільною групою, що містить від 1 до 6 атомів вуглецю за п 2, який відрізняється тим, що розчин платинового комплексу загальної формули (І) в органічному розчиннику змішують з водним розчином бета- або гамма-циклодекстрину, який необов'язково заміщують пдроксіалкільними групами, що містять від 1 до 6 атомів вуглецю, після чого розчинники випарюють з отриманого розчину 7 Платиновий комплекс загальної формули (І) або його комплекс включення з бета- або гаммациклодекстрином за п 1 або 2, який відрізняється тим, що застосовується як медикамент 8 Фармацевтична композиція для лікування онкологічних захворювань, яка відрізняється тим, що містить принаймні один платиновий комплекс загальної формули (І) або його комплекс включення з бета- або гамма-циклодекстрином за п 1 або 2 як активну речовину в ефективній КІЛЬКОСТІ, і принаймні один фармацевтичний ексципієнт О C O (О Ю 56314 Винахід стосується нового платинового комплексу зі ступенем окиснення II, який застосовують у медичній практиці для лікування онкологічних захворювань У винаході також описано застосування комплексу як медикаменту та фармацевтичних композицій, що містять цей платиновий комплекс як активну речовину Платинові комплекси, що діють як цитостатики, були запроваджені у медичну практику наприкінці сімдесятих років цього сторіччя Першим фармацевтичним продуктом цього типу був цисплатин (cis-діамшодихлорплатиновий (II) комплекс) Під час подальших розробок, було синтезовано і випробувано десятки платинових комплексів, серед них карбоплатин (cis-д іам і н-/1,1 циклобутандикарбоксилато/платиновий (II) комплекс), який став найважливішим в онкології Крім того, було описано асиметричні комплекси платини, у яких аміно-ліганд було заміщено алкіламінною групою (USP 4,329,299) У публікації J MEDCHEM (1995), 38(16), 3014-24 описано, крім іншого, тетракоординатні транс-платинові (II) комплекси, які несуть галогени та аміногрупи, від яких сполуки даної заявки відрізняються тим, що вони є cis-платиновими (II) сполуками У публікації INORG СНЕМ , (1993), 32(12), 2717-23 описано cisдихлорплатинові (II) комплекси, що несуть одну адамантанамшогрупу та інший амін, якій відрізняються від сполук даної заявки тим, що вони не несуть ніякого МНз ліганду У патенті ЕРА-0 503 830 описано транс-платинові (IV) комплекси, отримані від їхніх ВІДПОВІДНИХ трансплатинових (II) комплексів Жоден з цих комплексів не належить до сполук даної патентної заявки, що мають cis-геометрію У даний час тривають пошуки платинових комплексів, які мають виявляти вищу протипухлинну ефективність і менше побічних ефектів порівняно з відомими платиновими комплексами Завдяки даному винаходові було виявлено деякі нові платинові комплекси, які мають вищу протипухлинну ефективність порівняно з платиновими комплексами існуючого рівня техніки і нижчий небажаний побічний ефект порівняно зі згаданими вже відомими комплексами Ці нові комплекси представляють принцип даного винаходу Першим аспектом даного винаходу є платиновий комплекс зі ступенем окиснення II загальної формули (І) (І) Де X являє собою атом галогену, і А являє собою групу -NH2R, де R трициклічною вуглеводневою частиною, що містить від 10 до 14 атомів вуглецю, яка може бути необов'язково заміщена на трициклічному КІЛЬЦІ ОДНІЄЮ або двома алкільними групами, що мають від 1 до 4 атомів вуглецю Другим аспектом даного винаходу є комплекс включення платинового комплексу зі ступенем окиснення II формули (І) Де X являє собою атом галогену, А являє собою групу NH2-R, де R є трициклічною вуглеводневою частиною, що містить від 10 до 14 атомів вуглецю, яка може бути необов'язково заміщена на трициклічному КІЛЬЦІ ОДНІЄЮ або двома алкільними групами, кожна з яких містить від 1 до 4 атомів вуглецю, з бета- або гамма-циклодекстрином, який може бути необов'язково заміщений пдроксіалкільною групою, що має від 1 до 6 атомів вуглецю Особливо вигідним комплексом даного винаходу є платиновий комплекс загальної формули (І), де А являє собою адамантиламшогрупу, і X має вищевказане значення Крім того, іншим вигідним платиновим комплексом даного винаходу є комплекс загальної формули (І), де А являє собою 3,5диметиладамантиламіногрупу, і X має вищевказане значення Іншим аспектом даного винаходу є спосіб одержання платинового комплексу загальної формули (І), який характеризується тим, що розчин солі лужного металу амштригалогенплатинату(ІІ) у полярному органічному розчиннику або у воді піддають реакції з первинним аміном формули NH2-R, де R є трициклічною водневою частиною, що містить від 10 до 14 атомів вуглецю, яка може бути необов'язково заміщена на трициклічному КІЛЬЦІ ОДНІЄЮ або двома алкільними групами, що мають від одного до чотирьох атомів вуглецю, при температурі від 0 до 100°С Винахід також забезпечує спосіб одержання комплексу включення платинового комплексу формули (І) з бета- або гаммациклодекстрином, який може бути необов'язково заміщений пдроксіалкільними групами, що містять від 1 до 6 атомів вуглецю, вищезгаданий спосіб характеризується тим, що розчин платинового комплексу формули (І) в органічному розчиннику змішують з водним розчином бета- або гаммациклодекстрину, який необов'язково заміщують пдроксіалкільними групами, що містять від 1 до 6 атомів вуглецю, а на наступному етапі розчинники випарюють з отриманого розчину Ще одним аспектом винаходу є вищезгаданий платиновий комплекс формули (І) або його комплекс включення з бетаабо гаммациклодекстрином для застосування як медикаменту 56314 Наступний аспект винаходу забезпечує фармацевтичну композицію для лікування онкологічних захворювань, яка характеризується тим, що вона містить як активну речовину принаймні один платиновий комплекс вищезазначеної формули (І) або його комплекс включення з бета-або гамма циклодекстрином і принаймні один фармацевтичний ексципієнт До того ж, платинові комплекси формули (І) також можуть бути застосовані як ВИХІДНІ речовини для одержання аналогічно заміщених платинових комплексів зі ступенем окиснення IV, які застосовують для перорального введення Платинові комплекси даного винаходу є новими ХІМІЧНИМИ сполуками, оскільки донині у жодному документі існуючого рівня техніки не було ні спеціально описано жодну з цих сполук, ні охарактеризовано їх властивості, ні описано спосіб їх одержання Застосування цих сполук як активних речовин у лікуванні онкологічних захворювань так само є новим і містить ознаки винаходу, оскільки з існуючого рівня техніки неможливо було однозначно зробити висновок, що присутність первинного трициклічного змінного ліганда у двовалентних платинових комплексах має вести до суттєвого підвищення протипухлинної активності нових сполук даного винаходу У наступній частині винахід більш детально описано на прикладах конкретного варіанта втілення Слід розуміти, що ці приклади описуються для пояснення, і вони жодним чином не обмежують обсягу винаходу, який визначається не ними, а формулою Приклад 1 Синтез сі5-(1-адамантиламш)-амшдихлорплатинового (II) комплексу (далі зашифрованого як "LA-9") Розчин 19,55г (54,6 ммоль) амінтрихлорплатинату (II) калію у 84 мл води фільтрували і до фільтрату додавали суміш 84мл води та 45,4г (273,4 ммоль) йодиду калію До суміші додавали 8,27г (54,6 ммоль) 1адамантиламшу в атмосфері азоту Отриману в результаті суміш перемішували без повітря та світла при кімнатній температурі протягом 22 годин Отриманий в результаті осад відфільтровували в атмосфері азоту і промивали водою без розчинених газів Після висушування у вакуумній сушарці отримували проміжний продукт, що містить 3,09% хлору та 33,03% йоду Цей проміжний продукт суспендували у 170мл води і до суспензії додавали 17,75г (104,5 ммоль) нітрату срібла (90% від теоретичної КІЛЬКОСТІ на основі вмісту галогенідів у проміжному продукті) Після перемішування протягом 70 годин при кімнатній температурі без світла та повітря нерозчинену частину фільтрували і промивали невеликою КІЛЬКІСТЮ води До фільтрату поволі додавали концентровану хлористоводневу кислоту (19мл, 205 моль), і суміш перемішували без повітря та світла при кімнатній температурі протягом 20 годин Твердий необроблений продукт відфільтровували і послідовно промивали 0,1 М хлористоводневої кислоти, етанолом та ефіром Після висушування у вакуумній печі отримували 16,46г необробленого продукту (68%, на основі вихідного амін-трихлорплатинату калію) Необроблений продукт (16,36г, 37,7 ммоль) розчиняли у 200мл диметилформаміду, отриманий розчин фільтрували і при охолодженні до фільтрату додавали 600мл 0,1 М хлористоводневої кислоти Отриманий в результаті твердий осад відфільтровували, послідовно промивали 0,1 М хлористоводневої кислоти, етанолом та ефіром і висушували у вакуумній сушарці На виході отримували 14,70г потрібного продукту (89,8% в)д теоретичної КІЛЬКОСТІ, на основі вихідного необробленого продукту) Ідентичність отриманого продукту підтверджувалася ІЧ та 1Н ЯМР спектральним аналізом Кристалічну та молекулярну структуру отриманого платинового комплексу випробували на підготовленому монокристалі шляхом рентгеноструктурного аналізу, завдяки якому було підтверджено результати спектральних способів Чистоту отриманого продукту визначали шляхом рідинної хроматографії високої роздільної здатності Елементний аналіз продукту на Cio Виявлено 27,75 4,55 6,37 16,25 Розраховано 27,66 4,64 6,45 16,33 Приклад 2 Синтез cis-(1-aMiHO-3 5-диметиладамантан)амін-дихлорплатинового (II) комплексу (далі - під назвою "LA-13") 1-амшо-3,5-диметиладамантан (8,06мл, 42 ммоль), перемішуючи, додавали до щойно профільтрованого розчину 13,95г (39 ммоль) амінтрихлорплатинату (II) калію при кімнатній температурі в атмосфері азоту Отриману в результаті суміш перемішували протягом 15 годин при 50°С, захищаючи від світла "та повітря Після охолодження до кімнатної температури отриманий в результаті твердий осад фільтрували під шаром азоту і промивали н-гексаном Фільтрувальний осад висушували, пропускаючи струмінь повітря крізь трубу і висушений сирий продукт розчиняли у 120мл диметилформаміду Фільтрат змішували з 360мл 0,1 М хлористоводневої кислоти Отриманий в результаті осад відфільтровували і промивали 0,1 М хлористоводневої кислоти та ефіром Після висушування у вакуумній печі отримували 6,25г потрібного продукту (34,6% від теоретично розрахованої вихідної КІЛЬКОСТІ, на основі вихідного амін-трихлорплатинату (II) калію) Ідентичність отриманого продукту підтверджувалася ІЧ спектральним аналізом, а його чистоту визначали шляхом рідинної хроматографії високої роздільної здатності Елементний аналіз продукту на Ci2H Виявлено 31 ,59 5.,37 5.,98 15. ,53 Розраховано 31 .18 5..23 6..06 15. .34 Приклад З Синтез комплексу включення сполуки LA-9 з пдроксипропіл-бета-циклодекстрином (далі - під назвою "лікарська форма включення LA-9") Сполуку LA-9 розчиняли у диметилформаміді для отримання розчину з остаточною концентрацією 25г/л До розчину додавали 8 56314 пдроксипропіл-бета-циклодекстрин у КІЛЬКОСТІ, яка була необхідна для отримання молярної концентрації LA-9/циклодекстрину 1 3 До розчину LA-9 та циклодекстрину додавали буферну водну фазу ЮмМ Hepes, pH7,3 при перемішуванні і при кімнатній температурі до кінцевого співвідношення об'ємів диметилформаміду та водної фази 1 10 Нерозчинений циклодекстрин розчиняється швидко навіть після першого додавання водної фази Диметилформамід та воду видаляли з розчину комплексу включення шляхом ліофілізації Цитостатичну активність сполук даного винаходу випробували in vitro на ЛІНІЯХ пухлин Для відбору ВІДПОВІДНИХ сполук на ефективність вибирали МТТ-тест В основі цього тесту лежить реакція солі тетразолію з дихальними мітохондріями живих клітин Отриманий в результаті нерозчинний формазан солюбілізують і його КІЛЬКІСТЬ визначають на рідері для мікропланшетів Цей спосіб застосовують як стандартний для визначення цитостатичного ефекту фармацевтичне активних сполук (Tim Mosmann, Rapid color/metric assay for cellular growth and survival, Application to proliferation and cytotoxicity assays Journal of Immunological Methods, 65 (1983), 55-63) Стала інгібування (IC50) представляє концентрацію речовини, яка викликає 50% пригнічення росту культури клітин Цю сталу було визначено за графіком залежності значення МТТ (мітохондріальна активність клітин) від концентрації випробуваної речовини Для визначення сталої на основі виміряних даних застосовували програму GraphPad Prism, причому для побудови кривої з окремих експериментальних точок застосовували сигмоідальну криву Больцмана Вибрані лінії клітин є стандартними ЛІНІЯМИ, застосовуваними для звичайного відбору на цитостатичний ефект фармакологічно активних сполук Приклад 4 Протипухлинна активність на ЛІНІЯХ пухлин мишей У цьому прикладі випробували лінії Р 815 (мастоцитома) та L-1210 (ЛІНІЯ лімфоцитозної лейкемії) Ефект LA-9 порівнювали з ефектом карбоплатину при МТТ-тесті > Було виявлено значення ІС50 1,1 мкМ для лінії Р-815 і 1,5мкМ для лінії L-1210 І навпаки, карбоплатин (або у ВІЛЬНІЙ формі, або як комплекс з циклодекстрином) виявляв значення ІС50 105мкМ, тобто він був приблизно у сто разів менш активним, ніж LA-9 Приклад 5 Протипухлинна активність по відношенню до пухлинних клітин людини Порівняльні експерименти здійснювали на лінії лімфобластичної лейкемії CEMt МТТ-тест застосовували для визначення цитотоксичного ефекту Сталу інгібування ІС50 визначали для сполук LA-9 (ІС50=0,36мкМ), цисплатину (ІС50=1,9 мкМ), карбоплатину (ІС50=30,4мкМ) та оксаліплатину (1С 50=4,8мкМ) Графічне вираження ходу кривих інгібування подано на Фіг 1 Точки на кривих позначають так для LA-9 = орієнтований вгору трикутник, для карбоплатину = орієнтований донизу трикутник, для цисплатину = квадрат, для оксаліплатину = коло Життєздатність клітин визначали за допомогою стандартного спектрофотометричного МТТ-тесту на основі відновлення 3-(4,5диметилтіазол-2-іл)-2,5-дифенілтетразолброміду життєздатними клітинами при утворенні формазану Меланома ока VUP (Masaryk Oncological Institute, Brno) виявляла приблизно у десять разів вищу чутливість до LA-9 (ІС50=9мкМ) порівняно з карбоплатином (ІС50=95 мкМ) Приклад 6 Протипухлинна активність in vivo Протипухлинну активність сполуки LA-9 та цисплатину порівнювали на тваринах з твердою аденокарциномою молочної залози МС 2111 після внутрішньовенного введення однієї дози на 5-й день після прищеплення пухлинної клітини Цей шлях введення, який є характерним для платинових комплексів, ставав можливим завдяки приготуванню розчинної форми У цьому експерименті використовували самиць мишей DBA/1 з масою тіла 22,9-25,8г Пухлини розвивалися після підшкірного прищеплення 0,2мл гомогенату пухлин, розведеного у співвідношенні об'ємів 1 1 з ІЗОТОНІЧНИМ розчином глюкози Випробувані сполуки застосовували у формі ІЗОТОНІЧНОГО водного розчину, приготовленого безпосередньо перед застосуванням шляхом розчинення ВІДПОВІДНОГО люфілізованого продукту у воді для ІН'ЄКЦІЙ З подальшим розведенням ІЗОТОНІЧНИМ розчином хлориду натрію, згідно з ВІДПОВІДНИМИ вимогами, в об'ємах 0,1-0,4мл на 20г маси тіла тварини, як можна побачити з нижчеподаної таблиці Таблиця протипухлинна активність Сполука Контроль Platidiam Форма включення LA-9 Доза речовини (мг/кг) 0 4 2 1 24 12 6 Середній час виживання (Дні) 26,0 >76,5 39,5 28,5 29,0 >106,5 >92.5 Тварини, що вижили (% від контролю) іт і_ і 100 0 >294 4 152 110 112 >410 >356 2 2 3 4 4 56314 10 n = КІЛЬКІСТЬ тварин у групі тварин виживала з постійною повною ремісією і LTS = Long Term Survivors (КІЛЬКІСТЬ тварин, знищувалася після закінчення експерименту без що залишаються жити протягом 125 днів та яких макроскопічного виявлення пухлини Позитивний знищують після закінчення експерименту) вплив на виживання, хоча статистичне і Platidiam = комерційний лікарський засіб незначний, можна вважати як достатній доказ (Lachema), який містить cis-діамшпротипухлинної активності та низької токсичності дихлорплатиновий (II) комплекс (цисплатин) як випробуваної сполуки активну речовину Низька токсичність LA-9 також може бути Сполука LA-9 збільшувала середній час продемонстрована шляхом оцінки коефіцієнта виживання при дозуванні 12мг/кг на 410% додавання у вазі тіла Введення LA-9 порівняно з контрольною групою, через що супроводжувалося менш, ніж 10%-ю втратою ваги виникала значна статистична різниця у часі тіла Оптимальна доза LA-9 становила 13-16мг/кг виживання окремих тварин при рівні значущості а для тварин, яких використовували у = 0,05 при ОЦІНЦІ за допомогою непараметричного випробуваннях Оціночне значення максимальної критерію згідно з роботою Hajek (Fabian V , толерантної дози (MDT) становило приблизно Zakladni statisticke metody [Основні методи 25мг/кг статистики], NCSAV Prague 1963) Половина Фїг.1 Log с (ьлкм) Підписано до друку 05 06 2003 р Тираж 39 прим ТОВ "Міжнародний науковий комітет" вул Артема, 77, м Київ, 04050, Україна (044)236-47-24