Спосіб корекції стрес-індукованих пошкоджень слизової оболонки проксимального відділу травного тракту в експериментальних тварин

Спосіб корекції стрес-індукованих пошкоджень слизової оболонки проксимального відділу травного тракту, що включає використання цитопротекторних засобів, який відрізняється тим, що в умовах експериментального моделювання стресу експериментальним тваринам (щурам) вводять як цитопротекторний засіб препарат кавбузол (екстракт насіння кавбуза) per os в дозі 0,5 мл на 200 г/добу. (19) (21) u201101205 (22) 03.02.2011 (24) 12.09.2011 (46) 12.09.2011, Бюл.№ 17, 2011 р. (72) ПШИК-ТІТКО ІРЕНА ОЛЕГІВНА, ЗАЯЧКІВСЬКА ОКСАНА СТАНІСЛАВІВНА, ГЖЕГОЦЬКИЙ МЕЧИСЛАВ РОМАНОВИЧ (73) ЛЬВІВСЬКИЙ НАЦІОНАЛЬНИЙ МЕДИЧНИЙ УНІВЕРСИТЕТ ІМЕНІ ДАНИЛА ГАЛИЦЬКОГО 3 ки, ферменти, вітаміни А, В, С, В2, РР, r, мінеральні речовини (калій, кальцій, магній, залізо, кобальт) [2]. Цитопротекторні властивості кавбуза зумовлені наявністю каротину, проте недостатньо вивчені в гастроентерології. Запропонована корисна модель ілюструється рисунками: Фіг. 1 - мікрофото слизової оболонки стравоходу щура інтактної групи, Фіг. 2 - мікрофото стравоходу щура з групи, де тваринам вводили мерказоліл (запалення II ступеня: виражений нерівномірний набряк підслизової та інфільтрація), Фіг. 3 - мікрофото слизової оболонки щура з групи, в якій тваринам вводили мерказоліл з кавбузолом (пошкодження І ступеня: розволокнення рогового шару). Спосіб корекції стрес-індукованих пошкоджень слизової оболонки проксимального відділу травного тракту здійснюють таким чином. В умовах експериментального моделювання стресу експериментальним тваринам (щурам) вводять як цитопротекторний засіб препарат кавбузол (екстракт насіння кавбуза) per os в дозі 0,5 мл на 200 г/добу. Вплив олії кавбуза на процеси загоювання неерозивних уражень СОС було вивчено шляхом оцінки структурно-функціональної реорганізації слизової оболонки ясен та стравоходу щурів в умовах експериментального моделювання стресу та в різні терміни загоювання. Модельні дослідження проводили на нелінійних самцях щурах масою 180-220 г з дотриманням нормативів Європейської конвенції про захист хребетних тварин, які використовуються для експериментальних та інших цілей та дозволу університетського Комітету з біоетики. Серії експериментів включали індукування протягом 28 днів гіпотиреозу за методикою Детюк Є.С., співавт. [3], вводячи тваринам мерказоліл (МР) в дозі 16 мг/кг/добу досередини, гіпергастринемії - за методикою Берегової Т.В. і співав., [4] тварини отримували омепразол (ОМ) в дозі 18 мг/кг/добу, внутрішньоочеревинно та поєднання гіпотиреозу з гіпергастринемією - введенням ОМ і МР. Для контролю за приростом маси тіла тварин щотижнево зважували. Для індукції стрес-індукованих пошкоджень у проксимальному відділі травної системи використано загальновживану модель водноімобілізаційного стресу (ВІС) за Takagi et al. [5], попередньо застосовуючи 24-годинну харчову депривацію з необмеженим доступом до води. Схема експерименту передбачала розділення щурів, які отримували плацебо (фізрозчин 1,0 мл) і КЗ (0,5 мл на 200 г/добу) на групи (n=6-8): 1 - контролю, що склали інтактні тварини, 2 - тварини, що зазнали евтаназії відразу після індукції стресу, 3 тварини, що зазнали евтаназії через 24 год після індукції ВІС, 4 - тварини, що зазнали евтаназії через 48 год після індукції ВІС [6]. Після завершення експерименту у наркотизованих тварин робили забір слизової оболонки ясен, язика, шлунку, щитоподібної залози та нижньої третини стравоходу для морфо-функціонального аналізу шляхом проведення матеріалу за загальноприйнятою методи 62655 4 кою з фарбуванням гематоксиліном та еозином (ГЕ). Вивчення препаратів проведено за допомогою мікроскопа Olympus BX 41 з цифровою камерою Olympus C4040Z із програмним забезпеченням Olympus DP-Soft [Olympus, США]. Для аналізу змін СОРП і СОС застосовували напівкількісну візуально-аналогову шкалу (ВАШ) для визначення ступеня (ст.) пошкодження: - розволокнення рогового шару (І ст.), вогнищева базофілія мас кератину (ІІ ст.), десквамація рогових мас, вакуолізація клітин базального шару, везикулярні ядра (ІІІ ст.); запалення - дифузний набряк підслизової (І ст.), виражений нерівномірний набряк підслизової та незначна інфільтрація (ІІ ст.), виражений набряк та десквамація підслизової, периваскулярні або субепітеліальні інфільтрати (ІІІ ст.); гіперплазія - поодинокі гіперхромні ядра у базальних епітеліоцитах (І ст.), помірна кількість мітозів (ІІ ст.), потовщення епітеліального шару (ІІІ ст.). Морфо-функціональна оцінка впливу КЗ на загоєння ознак езофагіту та гінгівіту стресового походження включала вивчення стану рогового шару, представленого масами кератину, багатошарового плоского епітелію, базального шару та підслизової оболонки разом з мікроциркуляторним руслом з диференціюванням ступеня пошкодження, запалення, гіперплазії (як прояв загоєння) у СОС і СОРП. У групі інтактних тварин у СОРП і СОС не було виявлено жодних ознак пошкодження, прояви запалення та гіперплазії не спостерігались. У тварин, яким вводили МЗ, простежено збільшення маси тіла; морфологічні дослідження щитоподібної залози виявили тиреоцити, заповнені колоїдом та інфільтровані сполучною тканиною, що підтверджує індукцію гіпотиреозу. Характерною ознакою слизової оболонки шлунку тварин, які отримували ОМ, були гіперплазія ендокриноцитів та парієтальних клітин шлунку на тлі збільшення товщини слизової оболонки, що є характерними ознаками дисплазії, індукованої гіпергастринемією. Характерними ознаками неерозивного езофагіту та гінгівіту на 48 год після індукції ВІС на тлі гіпотиреозу були ознаки пошкодження II ст. - базофілія рогових мас та, місцями, базальні епітеліоцити з вакуолізованою цитоплазмою (Табл. 1). Прояви запалення теж були помірно вираженими - переважав набряк підслизового шару з незначною, нерівномірною інфільтрацією. Ознаки загоєння були помірно виражені - підвищена кількість фігур мітозів у клітинах базального шару епітелію стравоходу і ясен, що підтверджує генералізований характер ушкоджень. При введенні КЗ ознаки пошкодження СОС і СОРП через 48 год були відсутні; прояви судинно-стромальної реакції були І ст., утримувався нерівномірно виражений набряк підслизової з поодинокими скупченнями лейкоцитів, гіперемія мікроциркуляторного русла (Табл. 1). Найбільш вираженими були прояви гіперплазії ясен: вогнищеве потовщення епітеліального шару та ознаки підвищеної мітотичної активності епітеліоцитів базальних відділів; тоді як у СОС виявлялись окремі групи клітин базального шару з гіперхромними, збільшеними ядрами. 5 62655 6 Таблиця 1 Прояви альтерації, запалення та гіперплазії на 48 год після індукції водно-іммобілізаційного стресу Вид змін І Пошкодження (ясна) Пошкодження (стравохід) Запалення (ясна) Запалення (стравохід) Гіперплазія (ясна) Гіперплазія (стравохід) МЗ+ОМ+КЗ МЗ+КЗ МЗ+ОМ+КЗ МЗ+ОМ+КЗ МЗ+КЗ МЗ+ОМ+КЗ МЗ+КЗ МЗ+КЗ У тварин з гіпергастринемією через 24 год прояви пошкоджень СОРП і СОС, індуковані ВІС, та запалення були виражені мінімально - вогнищеве розволокнення мас кератину, місцями - з ознаками базофілії, та нерівномірний набряк підслизової Ознаки загоєння теж незначно виражені (Табл 2). Місцями спостерігалось сплощення епітеліоцитів, вогнищеве витончення рогових мас та зменшення рядності епітеліального шару, які можна розцінювати як початкові прояви атрофії. При введенні КЗ прояви альтерації та реакція мікроциркуляторного русла практично не виявлялись: епі Ступені пошкодження II МЗ+ОМ МЗ МЗ+ОМ МЗ+ОМ МЗ МЗ+ОМ МЗ МЗ III теліальний шар, підслизовий - з мінімальними ознаками набряку. Мітотична активність базальних епітеліоцитів не виражена. В слизовій стравоходу та ясен виявлялись однотипні зміни, але ступінь вираженості був більш значним у стравоході. Процеси загоєння індукованих ВІС уражень на тлі поєднання гіпотиреозу та гіпергастринемії через 24 год проявлялись пошкодженнями III таб. (Табл. 2) і через 48 год - II тaб. За ВАШ (Табл 1), попереднє введення КЗ покращувало регенерацію та зменшувало прояви запалення. Таблиця 2 Прояви альтерації, запалення та гіперплазії на 24 год. після індукції водно-іммобілізаційного стресу Вид змін І Пошкодження (ясна) Пошкодження (стравохід) Запалення (ясна) Запалення (стравохід) Гіперплазія (ясна) Гіперплазія (стравохід) ОМ МЗ+ОМ+КЗ ОМ МЗ+ОМ+КЗ ОМ+КЗ МЗ+ОМ+КЗ ОМ+КЗ МЗ+ОМ+КЗ ОМ ОМ Ступені пошкодження II III МЗ+ОМ МЗ+ОМ ОМ МЗ+ОМ ОМ МЗ+ОМ На 1 год після стресу ураження проявлялися пошкодження II і III ст. за ВАШ (Табл 3). 7 62655 8 Таблиця 3 Прояви альтерації, запалення та гіперплазії на 1 год після індукції водно-іммобілізаційного стресу Вид змін Пошкодження (ясна) Пошкодження (стравохід) Запалення (ясна) Запалення (стравохід) Гіперплазія (ясна) Гіперплазія (стравохід) І МЗ+ОМ+КЗ ОМ+КЗ МЗ+ОМ+КЗ ОМ+КЗ ОМ+КЗ МЗ+ОМ+КЗ ОМ+КЗ МЗ+ОМ+КЗ ОМ+КЗ ОМ+КЗ Таким чином, виявлена динаміка загоєння стрес-індукованих уражень стравоходу і ротової порожнини вказує, що застосування кавбузолу сприяло пришвидшенню репарації та приводило до практично інтенсифікації процесів реституції на тлі зміни природних захисних реакцій під час гіпергастринемії і гіпотиреозу. Застосування цього препарату є перспективним противиразковим способом корекції стрес-індукованих пошкоджень слизової оболонки проксимального відділу травного тракту. Джерела інформації: 1. Заячківська О.С., Гжегоцький М.Р., Слівовський З. Модельні дослідження участі оксиду азоту, простаноїдів та глікокон'югатів епітеліального бар'єру стравоходу в езофагопротекції // Лікарська справа - 2006 - № 7 - с. 35-41. 2. Потопальський А.І. Кавбуз - найбільша у світі цілюща ягода / А.І. Потопальський, Л.Н Юркевич, І.І. Воробйова - Вінниця: Нова книга, 2004 - 80 с. Ступені пошкодження II ОМ МЗ+ОМ ОМ МЗ+ОМ III МЗ+ОМ ОМ МЗ+ОМ ОМ ОМ ОМ 3. Луцик А.Д. Лектины в гистохимии. / А.Д. Луцик, Е.С. Детюк, М.Д. Луцик - Львов: Вища школа, 1989 - 109 с. 4. Цирюк О.І., Берегова Т.В. Вплив омепразолвикликаної гіпергастринемії на базальну шлункову секрецію у щурів // Вісн. Пробл. біології і медицини - 2001 - Вип 3 – с. 38-41. 5. Takagi K., Kasuya Y., Watanabe K. Studies on the drugs for peptic ulcer. A reliable method for producing stress ulcer in rats. Chem. Pharm. Bull. Tokyo 12:465-72 1964 індукованих уражень слизової оболонки ротової порожнини і стравоходу // Експерим. фізіологія та біохімія - 2010 – с. 49-54. 6. Пшик-Тітко І.О., Заячківська О.С., Гаврилюк О.М., Гжегоцький М.Р. Експериментальне визначення впливу екстракту насіння кавбуза на загоєння стрес-індукованих уражень слизової оболонки ротової порожнини і стравоходу // Експерим. фізіологія та біохімія -2010 - с. 49-54. 9 Комп’ютерна верстка Л.Литвиненко 62655 Підписне 10 Тираж 23 прим. Державна служба інтелектуальної власності України, вул. Урицького, 45, м. Київ, МСП, 03680, Україна ДП “Український інститут промислової власності”, вул. Глазунова, 1, м. Київ – 42, 01601