Спосіб ранньої діагностики пухлинного процесу

Реферат: UA 71346 U UA 71346 U 5 10 15 20 25 30 35 40 45 50 55 60 Корисна модель належить до медицини, а саме до онкології, та може бути використана для формування груп підвищеного онкологічного ризику серед хворих на передракові стани, для індивідуального моніторингу та ранньої діагностики рецидивів, а також для визначення ефективності хіміотерапії. Відомо спосіб ранньої діагностики раку [1] шляхом поляризаційного інтерферометрування крові людини. Оцінку патологічних змін в організмі людини проводять за рахунок оцінки висококогерентного лінійно та циркуляторно поляризованого випромінювання з довжиною хвилі 0,6328 мкм в опромінюючому пучку. Недоліком способу є його недостатня інформативність тому, що при визначенні відмінностей у розподілі фаз у зображенні плазми крові людини неможливо визначити, що саме лежить в основі вивчаючих параметрів, та як це пов'язано з пухлинним процесом в організмі обстежуваних. Також не зрозуміло, чи є такі зміни в плазмі крові специфічними саме для онкологічних хвороб, а не наприклад для хронічного запалення чи якогось системного захворювання. Найбільш близьким по технічній суті вирішуваної задачі є спосіб діагностики раку, що включає визначення сироваткової катаболічної активності тимідинфосфорилази (ТФ) [2]. При зниженні її активності в 2,7-3,3 рази в порівнянні з віковою контрольною групою діагнозують наявність пухлинного процесу. Недоліком цього є те, що зміни проліферації тканин при їх пухлинній трансформації діагностують, визначаючи активність катаболічної реакції, яка зворотно корелює із змінами проліферації тканин. Не враховують анаболічну активність маркера раку (ТФ), яка безпосередньо лежить в основі підвищення її активності в пухлинах та паралельно і в сироватці крові хворих на рак, оскільки при цьому утворюється попередник нуклеотиду, рівень якого лімітує швидкість синтезу ДНК, отже і процес поділу клітин і тканинного росту [3]. Це знижує ефективність та діагностичну цінність способу. В основу корисної моделі поставлено задачу розробити спосіб ранньої діагностики пухлинного процесу, в якому забезпечується підвищення точності за допомогою визначення анаболічної активності тимідинфосфорилази (ТФ) в сироватці крові, що прямо корелює з проліферативною активністю тканин. Поставлена задача вирішується тим, що визначають анаболічну активність ТФ і, якщо вона більше ніж в 2 рази перевищує контрольну активність у відповідній віковій групі, діагностують розвиток пухлинного процесу. Новим в способі, що заявляється є те, що для ранньої діагностики пухлинного процесу спектрофотометричним методом визначають анаболічну активність тимідинфосфорилази (ТФ), якщо вона більше ніж в 2 рази перевищує контрольну активність у відповідній віковій групі, діагностують пухлинний процес. Визначення активності ТФ використовують для індивідуального мониторинга у пацієнтів з передраковими станами, що належать до груп підвищеного онкоризику, або для ранньої діагностики рецидиву пухлини у онкологічних хворих. Розробка способу, що заявляється, стала можливою завдяки встановленому авторами науковому факту, що існує зв'язок між анаболічною активністю ТФ в тканинах та її активністю в сироватці крові [4]. Також є зв'язок між її активністю та стадією пухлинного процесу [5]. Наші дослідження добре узгоджуються з іншими, в яких доведено не тільки зв'язок між ТФ та особливостями пухлинного росту, а й кореляцію із специфічними показниками проліферативної активності - Кі-67, PSNA [6, 7]. Спосіб, що заявляється, добре відтворюється в паралельних дослідженнях, є високочутливим, має низьку вартість. Це дає можливість для його широкого впровадження та підвищення ефективності ранньої діагностики раку. Реалізують спосіб ранньої діагностики пухлинного процесу таким чином. З ліктьової вени шприцом набирають 1 мл крові в пробірку с 0,1 мл 3,8 % розчину цитрату натрію, центрифугують 15 хв. при 1200 g. Клітини крові (еритроцити, лімфоцити та тромбоцити) осідають на дно, відбирають верхньо-середній шар сироватки. Для визначення анаболічної активності ТФ застосовують модифікацію спектрофотометричного методу, пропонованого раніше [8]. Суть модифікації полягає в тому, що в експериментальну та контрольну пробірки до тиміну в інкубаційну суміш додають косубстрат - дезоксирибонуклеозид у співвідношенні 1:2. Оскільки активність цього ферменту змінюється в залежності від віку, отримані дані порівнюють з анаболічної активністю тимідинфосфорилази сироватки крові здорових людей відповідної вікової групи. При підвищенні активності в 2 рази та більше, діагностують наявність пухлинного процесу. Конкретні приклади реалізації способу, що заявляється. Приклад 1. В хірургічне відділення ДОКТМО ім. Калініна, м. Донецька був госпіталізований хворий Б. 60-ти років з попереднім діагнозом: Виразкова хвороба (ВХ), активна фаза, виразка 1 UA 71346 U 5 10 15 20 25 30 35 40 45 50 шлунка, ускладнена кровотечею. Разом із загальноклінічними дослідженнями при госпіталізації спектрофотометричним методом визначено анаболічну активність тимідинфосфорилази (ТФ) в сироватці крові: 46,46 нмоль/хв./мг. В нормі у відповідній віковій групі (60-69 років) сироваткова активність анаболічної ТФ складає - 23,28±2,15 нмоль/хв./мг. Отже, анаболічна активність ТФ у хворого Б. в 2 рази вища за норму, що дозволило запідозрити рак. З даних анамнезу, що підвищують вірогідність розвитку раку при ВХ шлунка, була наявність в анамнезі з 1967 року виразки дванадцятипалої кишки. Останні 5 років хворіє на виразку шлунка. Двічі спостерігалися кровотечі, проходив курс консервативної терапії. Зараз під час гастроскопії у хворого виявлена виразка шлунку до 3,5 см в діаметрі, краї виразки нерівні, щільні. Біопсія: фібриноїдний некроз, інфільтрація лейкоцитами, пептична виразка. В дрібному фрагменті - легка дисплазія. Було виконано резекцію шлунку по Більрот І. Гістологічний висновок: в препараті аденокарцинома, раковий лімфангоїт. Заключний діагноз: Рак шлунку. T3N2M0. Приклад 2. Хворий Т., 59 p. Госпіталізований в Донецький обласний протипухлиний центр з діагнозом: периферійний рак лівої легені, Τ2Ν1Μ0 стадія. Пухлинний процес було виявлено під час планової флюорографії. Спектрофотометричним методом визначено анаболічну активність тимідинфосфорилази в сироватці крові - 67,27 нмоль/хв./мг. В нормі у відповідній віковій групі (50-59 років) сироваткова активність анаболічної ТФ складає 28,71±3,05 нмоль/хв./мг. Отже на ранній стадії раку її активність в 2,3 рази вища за норму. Перевагою способу, що заявляється, є те, що внаслідок визначення анаболічної активності тимідинфосфорилази (ТФ) спектрофотометричним методом забезпечується підвищення точності пропонованого способу. Спосіб простий у виконанні, не потребує спеціальних умов для проведення. Набори реактивів мають малу коштовність. Спектрофотометр СФ-46 є стандартним обладнанням клінічних лабораторій. Реалізація способу здійснюється за годину, 20 хвилин з яких потрібні для отримання сироватки. Одночасно може бути проведено до п'яти досліджень. Лабораторні випробування способу, що заявляється, проведені у 60 хворих на рак різних локалізацій (шлунка, кишечнику, легенів) залежно від віку, а також у 36 умовно здорових осіб у віці від 30 до 69 років, які склали групу контроля. Таким чином досягають підвищення діагностичної точності і ефективності пропонованого способу. Все це робить перспективним вживання способу в практичній медицині для індивідуального мониторинга у пацієнтів з передраковими станами, тобто з підвищеним онкоризиком, або для ранньої діагностики рецидиву пухлини у онкологічних хворих. Джерела інформації: 1. UA 43761, А61В 5/00. Спосіб ранньої діагностики і диференціації стадії раку. Опуб.25.08.2009, Бюл. №16. 2. UA 48550 А, А61В 10/00. Спосіб діагностики рака. Опубл. 15.08.2002, Бюл. № 8. 3. O'Neil, K.L., Grigsby R.V., Fairbairn D.W. Thymidine Kinase: the future in breast cancer prognosis // The Breast.-1995.- V. 4, № 2.- P.79-83. 4. Б.Г. Борзенко, Е.М. Бакурова „Нарушение метаболизма предшественников ДНК в слизистой оболочки желудка как показатель вероятного озлока-чествления язвы этого органа" // Вопр. Онкол.-2008. - Том 2. - С. 184-187. 5. Б.Г. Борзенко, А.А. Горбачев, Ю.В. Уманський та ін. Активность ферментов метаболизма ДНК в сыворотке крови больных раком молочной железы // Вопр. Онкол.-1990. - Т. 36, № 1. - С. 17-23. 6. Dong P., Sakata К., Miyajima Y. The predictive value of p53, Ki-67 and angiogenetic factors in primary hypopharyngeal carcinoma // Kurume Med. J.-2001. - Vol.48, №4. - P. 261-266. 7. Expression of granulocyte colony-stimulating factor receptor and platelet-derived endothelial cell growth factor in oral and oropharyngeal precancerous lesions / Sunaga H., Fujieda S., Tsuzuki H. et al. // Anticancer Res.-2001. - Vol.21, № 4B. - P. 2901-2906. 8. UA 3105, МКИ A 6IB 10/00. Спосіб визначення індивідуальної хіміочутли-вості пухлин шлунка до 5-фторурацилу та його попередників. Опубл. 15.10. 2004, Бюл. № 10. ФОРМУЛА КОРИСНОЇ МОДЕЛІ 55 Спосіб ранньої діагностики пухлинного процесу шляхом одержання сироватки крові та визначення спектрофотометричним методом активності тимідинфосфорилази (ТФ), який відрізняється тим, що визначають анаболічну активність ТФ, і якщо вона більше ніж в 2 рази перевищує контрольну активність у відповідній віковій групі, діагностують розвиток пухлинного процесу. 60 2 UA 71346 U Комп’ютерна верстка А. Крижанівський Державна служба інтелектуальної власності України, вул. Урицького, 45, м. Київ, МСП, 03680, Україна ДП “Український інститут промислової власності”, вул. Глазунова, 1, м. Київ – 42, 01601 3