Спосіб визначення перебігу раку ендометрія під впливом гіпер- та гіпотиреоїдних станів щитоподібної залози в експерименті

Реферат: Спосіб визначення перебігу раку ендометрія під впливом гіпер- та гіпотиреоїдних станів щитоподібної залози в експерименті включає перевивання експериментальної моделі карциноми Герена самицям щурів. Починають моделювати гіпер- та гіпотиреоїдні стани шляхом щоденного додавання до питної води L-тироксину і мерказолілу в дозі, вимірюють ортогональні розміри пухлини, розраховують її об'єм, виведення тварин з експерименту. Виконують морфологічні та імуногістохімічні дослідження зразків пухлини і тіла матки, при виявленні у вилучених зразках кількості маркерів апоптозу та дендритних клітин вище норми констатують здатність гормонів щитоподібної залози активізувати апоптоз пухлинних клітин та впливати на субпопуляцію Т-хелперів, гальмувати розвиток раку ендометрія. UA 72379 U (54) СПОСІБ ВИЗНАЧЕННЯ ПЕРЕБІГУ РАКУ ЕНДОМЕТРІЯ ПІД ВПЛИВОМ ГІПЕР- ТА ГІПОТИРЕОЇДНИХ СТАНІВ ЩИТОПОДІБНОЇ ЗАЛОЗИ В ЕКСПЕРИМЕНТІ UA 72379 U UA 72379 U 5 10 15 20 25 30 35 40 45 50 55 60 Корисна модель належить до області медицини, а саме до експериментальної онкогінекології, і може бути використана для визначення перебігу раку ендометрія на фоні гіперта гіпотиреоїдних станів щитоподібної залози. Незважаючи на численні дослідження, спрямовані на вивчення етіології і патогенезу раку тіла матки у більшості країн світу, число хворих на рак даної локалізації продовжує неухильно зростати. Гіперпластичні процеси ендометрія і рак ендометрія в репродуктивному віці асоціюються з порушенням овуляції, хронічною гіперестрогенемією, безплідністю, міомою матки, генітальним ендометріозом, часто з гіперандрогенемією в комплексі з ожирінням та гіперінсулінемією. Основним фактором ризику виникнення гіперпластичних процесів та пухлин у гормонозалежних тканинах є порушення утворення і, в результаті, кількісного рівня естрогенів та прогестерону [1]. За даними ряду авторів, тиреоїдні гормони впливають на швидкість, метаболізм, зростання, розвиток і диференціювання клітин у нормі і при злоякісному зростанні. Відомо, що гіпотиреоз, як і гіпертиреоз, впливають на зростання пухлин різного генезу, будучи провокуючим моментом, унаслідок функціональних порушень у гіпофізарно-оваріальній системі [2]. З іншого боку гормони щитоподібної залози здатні впливати на субпопуляцію Т-хелперів та інших імунокомпетентних клітин. Також існують дані про те, що тироксину, який регулює функціонування протеїнової тирозинкінази, належить важлива роль у здійсненні апоптозу [3]. Таким чином, функціональний стан щитоподібної залози є не тільки важливим предиктором розвитку рака тіла матки, а також одним з перспективних напрямків корекції імунологічних порушень у хворих. Особливу увагу зосереджують саме на дендритних клітинах (ДК), адже вони виступають посередником для інших імунокомпетентних клітин, які безпосередньо виконують функцію імунного захисту - виявляють і знищують чужорідну клітину або збудника. Найбільш близьким аналогом до запропонованого технічного рішення є спосіб виявлення рецепторів естрогенів у тілі матки та самій пухлині шляхом імуногістохімічних досліджень з використанням моноклональних антитіл [4]. Вказаний спосіб характеризується тим, що у хворих при наявності раку ендометрія чи передракового стану відмічається підвищений рівень рецепторів естрогенів у тканині тіла матки, в порівнянні з таким у здорових жінок. При гіпер- та гіпотиреоїдних станах цей спосіб визначення перебігу раку ендометрія в змозі підтвердити той факт, що в результаті порушення функції щитоподібної залози відмічається абсолютна чи відносна гіперестрогенемія. При відсутності естрогенів, чи їх низькій концентрації рецептори знаходяться у неактивному стані, але після дифузії гормонів через клітинну мембрану, виникає стероїдно-рецепторний комплекс. Він активізується та піддається конформаційним змінам. Кінцевим результатом взаємодії рецепторів і гормонів є синтез специфічних білків, що беруть участь в регуляції різноманітних репродуктивних процесів. Однак недоліком цього способу є те, що за його допомогою лише констатують факт наявності раку ендометрія, а дослідити вплив гормонів щитоподібної залози на розвиток цього онкологічного захворювання, а також враховувати стан імунної системи, що також є вкрай важливою патогенетичною ланкою, не можливо. В основу корисної моделі поставлена задача вдосконалення способу визначення перебігу раку ендометрія під впливом гіпер- та гіпотиреоїдних станів щитоподібної залози в експерименті шляхом виконання морфометричних, морфологічних та імуногістохімічних досліджень зразків пухлини і тіла матки самиць щурів, що дозволить підвищити вірогідність впливу гормонів щитоподібної залози на перебіг раку ендометрія. Поставлена задача вирішується тим, що згідно корисної моделі, після перевивання експериментальної карциноми Герена самицям щурів через 3-4 години починають моделювати гіпер- та гіпотиреоїдні стани протягом двох тижнів шляхом щоденного додавання зранку до питної води L-тироксину в дозі 50мкг на 100г маси тіла і мерказолілу в дозі 5мкг на 100г маси тіла і, починаючи з 7 дня після інокуляції пухлинної суспензії, вимірюють ортогональні розміри пухлини, розраховують її об'єм, потім після виведення тварин з експерименту виконують морфологічні та імуногістохімічні дослідження зразків пухлини і тіла матки, і при виявленні у вилучених зразках кількості маркерів апоптозу та дендритних клітин вище норми констатують здатність гормонів щитоподібної залози активізувати апоптоз пухлинних клітин та впливати на субпопуляцію Т-хелперів, і таким чином гальмувати розвиток раку ендометрія. Спосіб виконується наступним чином Як експериментальна модель раку ендометрія була використана карцинома Герена класична модель низькодиференційної, неметастазуючої, солідної аденокарциноми тіла матки щурів, яка здатна в короткі строки інтенсивно прогресувати і призводити до значної смертності експериментальних тварин. 1 UA 72379 U 5 10 15 20 25 30 35 40 45 50 55 Експеримент виконували на самицях щурів лінії Вістар з масою тіла 160-180 г. Тварини були розподілені на три групи. Перша група (n=15) була групою контролю. До другої групи належали самиці щурів (n=15), яким моделювали гіпертиреоїдний стан шляхом додавання до питної води L-тироксину(Т4) (виробництво фірми БерлінХемі, Німеччина) в дозі 50 мкг на 100 г маси тіла впродовж двох тижнів. Третій групі самиць щурів (n=15) моделювали гіпотиреоїдний стан шляхом додавання до питної води мерказолілу (виробництво ООО Фармацептична компанія "Здоров'я", Україна) в дозі 5 мкг на 100 г маси тіла впродовж двох тижнів. Для формування моделі карциноми Герена тваринам (n=45) підшкірно в ділянку стегна вводили 1,0 мл 20 % суспензії пухлинних клітин, отриманої з 10-добової пухлини. Спостереження за тваринами виконували впродовж 21 доби, після чого щурів виводили з експерименту шляхом декапітації під легкою ефірною анестезією. Для наркоза використовували діетиловий ефір. Дослідження росту карциноми Герена починали на 8 добу після перевивання. З 8 по 21 день після інокуляції пухлини щоденно вимірювали розмір пухлини для оцінки динаміки збільшення об'єму in vivo. Заміряли ортогональні розміри пухлини за допомогою штангенциркуля. Об'єм 3 2 (см ) пухлини розраховували за формулою: V=AB /2, де А - найбільший діаметр пухлини, В найменший діаметр пухлини. Коефіцієнт гальмування росту пухлини (ГРП) розраховували за формулою: ГРП = 100 (VкVo)/Vк, де Vк - об'єм пухлини у групі контролю, Vo - об'єм пухлини у піддослідних групах [5]. У ході спостережень контролювалась смертність у експериментальних групах. Після виведення тварин з експерименту вилучали матку та частину пухлини для подальших гістологічних та імуногістохімічних досліджень. Гістологічний матеріал фіксували в формаліні та поміщали в парафін. Парафінові блоки нарізали товщиною 3-4 мкм. Після депарафінізації і дегідратації отримані зрізи фарбували гематоксиліном і еозином. З метою визначення апоптозу в клітинах пухлини використовували метод визначення ушкоджень ДНК клітин [6]. Для дослідження стану імунної системи на фоні гіпер- та гіпотиреозу використовували метод виявлення CD1a-, CD4- та лангеринпозитивних дендритних клітин з використанням моноклональних антитіл: CD1a (clone: NA/1/34-HLK) (Serotec, Dusseldorf, Germany), CD4 (clone: SK3) (Becton Dickinson, Franklin Lakes, NJ), Langerin (clone: AF2088) (R&D systems, Minneapolis, MN). При виявленні в пухлині кількості апоптозів та дендритних клітин вище норми констатували здатність гормонів щитоподібної залози активізувати апоптоз пухлинних клітин та впливати на субпопуляцію Т-хелплерів, і таким чином гальмувати розвиток раку ендометрія. У порівнянні з найближчим аналогом, заявлений спосіб визначення перебігу раку ендометрія під впливом гіпер- та гіпотиреоїдних станів щитоподібної залози у експерименті шляхом морфометричних, морфологічних та імуногістохімічних досліджень, за рахунок дослідження в зразках пухлин і тіла матки самиць щурів кількості маркерів апоптозу та дендритних клітин, дозволяє з високою вірогідністю визначити вплив гіпер- та гіпотиреоїдних станів щитоподібної залози на перебіграку ендометрія. Джерела інформації: 1. Кузнецова И.В., Томилова М.В. Патогенез гиперпластических процессов эндометрия в репродуктивном периоде // Вопросы гинекологии, акушерства и перинатологии.-2006. - Т. 5, № 4. - С. 58-63. 2. Deligdisch L. Hormonal pathology of the endometrium // Mod. Pathol.-2000. - P.285-294. 3. Калашникова С.А., Горячев А.Н., Новочадов В.В. Щеголев А.И. Тиреоидная модуляція ФНО-зависимого апоптоза и формирование хронической патологи печени при эндогенной интоксикации у крыс // Бюлетень експериментальной биологии и медицины.-2009. - Т. 147, № 2. - С. 240-244. 4. Иммуногистохимические методы определения прогностических факторов при раке молочной железы: № 134-1108: Утв. Мин-во. Здравоохр. РБ 05.03.09 / М-во здравоохранения РБ. - Минск, 2009. - 15 с. 5. Carlsson G., Gullberg В., Hafstrom L. Estimation of liver tumor volume using different formulasan experimental study in rats // J. Cancer Res. Clin. Oncol.-1983.-105. - P.20-23. 6. Gong et al. DNA laddering assay for treated cells // Analytical Biochemistry.-1994. - T. 218, № 3. - P. 14-19. 2 UA 72379 U ФОРМУЛА КОРИСНОЇ МОДЕЛІ 5 10 15 Спосіб визначення перебігу раку ендометрія під впливом гіпер- та гіпотиреоїдних станів щитоподібної залози в експерименті шляхом морфометричних, морфологічних та імуногістохімічних досліджень, який відрізняється тим, що після перевивання експериментальної моделі карциноми Герена самицям щурів через 3-4 години починають моделювати гіпер- та гіпотиреоїдні стани протягом двох тижнів шляхом щоденного додавання зранку до питної води L-тироксину в дозі 50 мкг на 100 г маси тіла і мерказолілу в дозі 5 мкг на 100 г маси тіла і, починаючи з 7 дня після інокуляції пухлинної суспензії, вимірюють ортогональні розміри пухлини, розраховують її об'єм, потім, після виведення тварин з експерименту, виконують морфологічні та імуногістохімічні дослідження зразків пухлини і тіла матки, і при виявленні у вилучених зразках кількості маркерів апоптозу та дендритних клітин вище норми констатують здатність гормонів щитоподібної залози активізувати апоптоз пухлинних клітин та впливати на субпопуляцію Т-хелперів, і таким чином гальмувати розвиток раку ендометрія. Комп’ютерна верстка М. Ломалова Державна служба інтелектуальної власності України, вул. Урицького, 45, м. Київ, МСП, 03680, Україна ДП “Український інститут промислової власності”, вул. Глазунова, 1, м. Київ – 42, 01601 3