Спосіб одержання протитуберкульозного засобу

Спосіб одержання протитуберкульозного засобу шляхом екстракції личинок бджолиної вогнівки спиртом етиловим при кімнатній температурі у темряві протягом не менше 7 діб, який відрізняється тим, що екстракції піддають гомогенезовані молоді личинки фази розвитку 3-5 діб, екстракцію проводять 70% спиртом етиловим при співвідношенні сировина : екстрагент 1:6-1:9. (19) (21) 20040402784 (22) 15.04.2004 (24) 15.03.2006 (46) 15.03.2006, Бюл. № 3, 2006 р. (72) Тихонов Олександр Іванович, Богуцька Олена Євгеніївна, Шпичак Олег Сергійович, Ярних Тетяна Григорівна, Дикий Ігор Леонідович (73) НАЦІОНАЛЬНИЙ ФАРМАЦЕВТИЧНИЙ УНІВЕРСИТЕТ, Тихонов Олександр Іванович (56) Карнеев Ф.Д. Дары восковой моли// Пчеловодство. - №4. - 1999. - С.55-56 3 75205 4 Необхідну концентрацію спирту етилового вивий, співвідношення сировина : екстрагент 1:5, значено експериментальним шляхом. В якості сировина подрібнена. критеріїв вибору було прийнято максимальне виПриклад 2 лучення діючих речовин з сировини та ступінь 100,0 г личинок вогнівки бджолиної подрібнили протитуберкульозної активності одержаного засона подрібнювані тканин РТ-2 до одержання бу. Оптимальною є 70% концентрація спирту етигомогенної маси, залили 557 мл 70% етилового лового. спирту. Приготовлену суміш настоювали у У відомому способі в якості екстрагенту викомацераційному баці в темному місці при кімнатній ристовують спирт етиловий 40%. Проте температурі протягом 7 діб при постійному дослідження авторів у межах нового способу помішуванні, процідили через подвійний шар свідчать, що при використанні у якості екстрагенту марлі. Після відстоювання профільтрували за доспирту етилового меншої і більшої концентрації помогою вакуумного фільтру. Одержали 500 мл ніж 70%, кількість біологічно-активних речовин, готового засобу "Гретавоск" у формі 20% настойекстрагованих з личинок вогнівки бджолиної ки. зменшується. Одержана настойка "Гретавоск" являє собою Дослідження виявили, що оптимальними для прозору рідину солом'яно-жовтого кольору з хазаявленого способу є молоді личинки вогнівки рактерним запахом і смаком спирту етилового. бджолиної, а при використанні старих личинок у Сухий залишок складає 1,57±0,02 %; концентрація стадії окуклення протитуберкульозна активність спирту етилового - 69,9 ± 1,42 мас. об. %; густина одержаного засобу значно знижується. У відомому 0,9123 ± 0,0002 г/см3; в'язкість -1,2264 ± 0,0117; рН способі одержання екстракту цей фактор зовсім не - 6,51 ± 0,018. враховується. На підставі хроматографічних та Оптимальним режимом екстракції за заявлеспектроскопічних методів досліджень було встаним способом є термін 7 діб. При зменшенні цього новлено склад біологічно-активних речовин засобу часу концентрація діючих речовин у одержаному "Гретавоск". В настойці "Гретавоск" було визначезасобі зменшується, при збільшенні - їх кількість но наступні цукри: глюкоза, фруктоза, рамноза, практично не змінюється. манноза. Співвідношення сировини і екстрагенту 1:5 В одержаному засобі виявлено 28 речовин, до 1:10 визначено експериментальним шляхом. При складу яких увійшли амінокислоти та їх похідні співвідношенні 1:10 засіб, одержаний за заявле(сульфоамінокислоти, аміноспирти, амінопохідні ним способом, проявляє протитуберкульозну адіпінової кислоти) а також фрагменти деградації активність. При зміні співвідношення у бік білка - уреїди, які мають у своєму складі збільшення кількості екстрагенту протитуберкульамідогрупу. озна активність одержаного засобу зменшується. Таким чином до складу засобу "Гретавоск" Дослідження показали, що оптимальне входять всі незамінні амінокислоти, які не синтеспіввідношення, яке забезпечує максимальне визуються в організмі, а поступають з їжею або лучення біологічно-активних речовин з сировини і, лікарськими препаратами. Як відомо, амінокислоти як наслідок, максимальну протитуберкульозну приймають участь у обміні речовин, зокрема, в активність засобу, є 1:5. Подрібнення сировини синтезі білків, ферментів та ін. Мікроелементний забезпечує збільшення виходу готового засобу. аналіз показав, що "Гретавоск" містить 28 мікро- та Заявлений спосіб здійснюється наступним макроелементів, серед яких Na, К, Fe, - містяться у шляхом: подрібнену до гомогенної маси сировину великих кількостях Si, Mg, Са, А1, Zn, P - в (личинки вогнівки бджолиної) фази розвитку 3-6 середніх, інші мікроелементи - В, Mn, Pb, Cr, Sn, заливають 70% спиртом етиловим і настоюють, Ga, Co, Ni, Bi, Mo, V, Си, Ag, Sr, Ge, Sb, Cd, As, Hg постійно помішуючи, протягом 7 діб при кімнатній - в невеликих кількостях. температурі у темряві. Одержують 20% прозору Приклад 3 настойку солом'яно-жовтого кольору з характерПротитуберкульозну активність засобу "Гретаним смаком та запахом спирту з умовною назвою воск", одержаного за заявленим способом, вивча"Гретавоск". ли у дослідах на мікобактеріях культури штаму Винахід ілюструється прикладами. "Академія". Приклад 1 Принцип методу полягає у визначенні Вибір екстрагенту (вода очищена, спирт етиконцентрації засобу, що досліджується, інгібуючої ловий), його концентрації та співвідношення сироріст мікобактерій при вирощуванні їх на щільному вина : екстрагент проводили у дослідних серіях поживному середовищі Левінштейна-Йенсена з витягів з личинок вогнівки бджолиної, 10 з яких різним вмістом засобу. Встановлено, що протитунаведено у таблиці 1. беркульозна активність засобу "Гретавоск" В якості екстрагенту вибрано спирт етиловий. проявляється у дозах від 0,1 мл/мл і зростає при Водні витяги з личинок вогнівки бджолиної швидко збільшенні його концентрації. псуються. При дослідженні спектру фармакологічної дії Проби за серіями наведеними у табл. 1, засобу "Гретавоск" у дослідах на тваринах було піддавали електрофотометричному аналізу [3], встановлено, що "Гретавоск" проявляє антиоксирезультати якого наведено у таблиці 2. дантну, антиексудативну, регенеруючу дію, сприяє Оптимальною за оптичною густиною, тобто за синтезу основного компоненту сполучної тканини максимальним вмістом діючих речовин у витязі, є колагену. Найвірогідніше, що саме така сукупність серія №10, а саме: екстрагент - 70% спирт етиловластивостей обумовлює механізм 5 75205 6 протитуберкульозної активності засобу "ГретаПриклад 4 воск". Визначення токсичності настойки "Гретавоск", одержаної за заявленим способом, проводили на білих щурах лінії Вістар масою 150-170 г при пероральному і внутрішньобрюшинному введенні за експрес-методом Т.В. Пастушенко [5] і методиці Прозоровського [6]. Згідно класифікації Сидорова К.К. [7], препарат є практично нетоксичним. ЛД50 складає при введенні per os - біля 15 мл/кг маси тварини, а при внутрішньобрюшинному - біля 5 мл/кг. Таким чином, заявлено спосіб одержання протитуберкульозного засобу "Гретавоск" у формі настойки, який отримують з доступної і відносно дешевої природної сировини. Заявлений спосіб є простим, економічним, не потребує спеціального обладнання, може здійснюватись як у лабораторних умовах, так і на фармацевтичних підприємствах. Одержаний за заявленим способом оригінальний протитуберкульозний засіб може бути використаний для лікування і профілактики туберкульозу як самостійно, так і у комплексі з іншими протитуберкульозними препаратами, а також у складі комбінованих лікарських препаратів. Засіб практично нетоксичний, за широтою терапевтичної дії перевищує існуюя-і засоби для лікування туберкульозу. 7 75205 8 Джерела інформації: України О.В.Стефанова - К.: Авіцена, 2001.- С. 1. Корнеев Ф.Д. Дары восковой моли // Пчело102-114. водство. - № 4. - 1999. - С. 55-56. 5. Пастушенко Т.В., Маруший Л.В., Жуков А.А. 2. Патент РФ № 2038086. Способ получения Экспресс-метод определения среднесмертельных биологически активного продукта из личинок доз химических веществ // Гигиена и санитария. большой восковой моли. Спиридонов Н.А., Рачков 1985. - №6. - С. 115-119. А.К., Мухин С.А., Кондрашова М.Н. МПК 6 А61К 6. Прозоровский В.Б. Использование методов 35/04, заявка 4938002/14, заявл. 26.03.91, опубл. наименьших квадратов для пробит-анализа кри27.06.95, Бюл. № 18. вых летальности // фармакология и токсикология. 3. Державна Фармакопея України / Державне 1962, №1.-С. 115-119. підприємство "Науково-експертний фармакопей7. Сидоров К.К. О классификации токсичности ний центр" - 1-е вид. - Харків: РІРЕГ, 2001. - С. 15ядов при парентеральных способах введения. - В 74,115-127,513-515. кн.: Токсикология новых промышленных химиче4. Доклінічні дослідження лікарських засобів ских веществ. - М., 1973. - Вып. 13. - С. 47-57. (методичні рекомендації) / За ред. член-кор. АМН Таблиця 1 Варіанти дослідних серій витягів з личинок вогнівки бджолиної Серія 1 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 Співвідношення сировина: екстрагент 2 1:10 1:10 1:10 1:10 1:5 1:10 1:10 1:10 1:10 1:5 Подрібненість сировини Екстрагент 3 неподрібнена неподрібнена неподрібнена неподрібнена неподрібнена подрібнена подрібнена подрібнена подрібнена подрібнена 4 вода очищена спирт етиловий 40% спирт етиловий 70% спирт етиловий 90% спирт етиловий 70% вода очищена спирт етиловий 40% спирт етиловий 70% спирт етиловий 90% спирт етиловий 70% Таблиця 2 Результати спектрофотометричного аналізу дослідних серій спиртових витягів вогнівки бджолиної Серія № Оптична густина № 1 ,нм №2,нм 2 0,0936 3 0,1309 4 0,0494 5 0,1219 7 0,0250 Продовження табл.2 Серія № Оптична густина 8 0,1099 9 0,2401 0,0291 10 0,5823 0,1157 9 Комп’ютерна верстка М. Клюкін 75205 Підписне 10 Тираж 26 прим. Міністерство освіти і науки України Державний департамент інтелектуальної власності, вул. Урицького, 45, м. Київ, МСП, 03680, Україна ДП “Український інститут промислової власності”, вул. Глазунова, 1, м. Київ – 42, 01601