Спосіб кількісного визначення тіотриазоліну та пірацетаму в комплексних лікарських препаратах

Спосіб кількісного визначення пірацетаму та тіотриазоліну в лікарських препаратах при їх сумісній присутності з застосуванням високоефективної рідинної хроматографії, який відрізняється тим, що як сорбент використовують силікагель з прищепленими 3-(хлордиметилсиліл)пропіл-Nдодецилкарбаматними зв'язками з розміром частинок 5мкм, а як рухому фазу - дегазований 0,05 Μ водний розчин калію дигідрофосфату з швидкістю рухомої фази 1мл/хв. при температурі колонки 30°С. (19) (21) 2003032498 (22) 24.03.2003 (24) 15.05.2006 (46) 15.05.2006, Бюл. № 5, 2006 р. (72) Дячок Василь Володимирович, Кожарська Ілона Михайлівна, Мазур Іван Антонович, Зіменківський Борис Семенович (73) АКЦІОНЕРНЕ ТОВАРИСТВО "ГАЛИЧФАРМ", ТОВАРИСТВО З ОБМЕЖЕНОЮ ВІДПОВІДАЛЬНІСТЮ "НАУКОВО-ВИРОБНИЧЕ ОБ'ЄДНАННЯ "ФАРМАТРОН" (56) UА, 23472 С1, 1999.07.19. 3 75606 4 додецилкарбаматними зв'язками з розміром часрухома фаза: дегазований 0,05 М розчин катинок 5мкм [фірма "Waters", США], або аналогічна, лію дигідрофосфату; для якої виконуються умови тесту "Перевірка пришвидкість рухомої фази - 1мл/хв; датності хроматографічної системи"; детектування при довжині хвилі 210 нм; рухома фаза: 0,05 М розчин калію дигідрофотемпература колонки - 30°С; сфату, дегазована будь-яким зручним способом; час інтегрування сигналу - 1 сек. швидкість рухомої фази -1,0мл/хв; Паралельно готують і хроматографують роздетекція при довжині хвилі 210 нм; чин СЗ пірацетаму та тіотриазоліну. температура колонки - 30°С; Вміст пірацетаму в грамах в суміші визначачас інтегрування сигналу - 1 сек.; ють за формулою: масштаб реєстрації - 0,9 одиниць оптичної гусS1 m0 P X тини. S0 m1 Оцінку кількісного вмісту досліджуваних речоде: S1 - середнє значення площ піків пірацевин проводили за методом зовнішнього стандарту. В наведених умовах проводили аналіз модетаму дослідженої суміші; льних сумішей досліджуваних речовин та напівпS0 - середнє значення площ піків пірацетаму, ромислових зразків таблеток з метою валідації розчину СЗ пірацетаму та тіотриазоліну; методики та її подальшого використання в умовах m1 - маса наважки суміші, в грамах; GLP. Результати аналізу модельних сумішей (таблеток "Ноотрил", ін'єкційного розчину "Ноотрил") наведені в таблицях 1, 2, 3. Результати аналізу трьох напівпромислових серій препарату наведені в таблиці 2. Стосовно хроматограм розчину стандартного зразку (СЗ) пірацетаму і тіотриазоліну: наведена перевірка придатності хроматографічної системи. Згідно тесту перевірки придатності, ступінь розділення піків пірацетаму і тіотриазоліну складає не менше 2,0 (що вказує на повне розділення вказаних піків). Ефективність хроматографічної колонки, розрахована за піком пірацетаму, складає не менше 1300 теоретичних тарілок. Відносне стандартне відхилення, розраховане для площі піку пірацетаму, складає не менше 2,0%. Коефіцієнт асиметрії піку, розрахований за піком пірацетаму, складає максимально 1,7. Наведені дані свідчать про точність та відтворювальність представленої методики кількісного визначення тіотриазоліну та пірацетаму. Таким чином, розроблена ефективна методика визначення тіотриазоліну та пірацетаму у таблетках "Ноотрил" та ін'єкційному розчині "Ноотрил", яка випробувана для стандартизації препаратів за показником "Кількісний вміст", згідно ДФУ. Приклад 1. Кількісне визначення в штучній суміші пірацетаму та тіотриазоліну в співвідношеннях 4:1. Близько 0,25 г суміші пірацетаму з тіотриазоліном, точна наважка, поміщають в мірну колбу місткістю 100мл, розчиняють в 60-70мл води очищеної, доводять очищеною водою до мітки, старанно перемішують. 10мл отриманого розчину поміщають в мірну колбу місткістю 50мл, об'єм доводять очищеною водою до мітки, старанно перемішують. 20 мкл одержаного розчину хроматографують на високоефективному рідинному хроматографі з УФ-детектором, одержуючи не менше 5 хроматограм при наступних умовах: розмір колонки 3,9х150мм, заповненої силікагелем з привитими З-(хлордиметилсиліл)-пропілМ-додецилкарбонатними зв'язками з розміром частинок 5мкм для якої виконуються умови тесту "Первинна придатність хроматографічної системи"; m0 - маса наважки пірацетаму в стандартному зразку, в грамах; P - маса суміші пірацетаму і тіотриазоліну, в грамах. Вміст тіотриазоліну, в грамах, в суміші визначають за формулою: S3 m2 P X S2 m1 де: S3 - середнє значення площ піків тіотриазоліну дослідженої суміші; S2 - середнє значення площ піків тіотриазоліну, розчину СЗ пірацетаму та тіотриазоліну; m1 - маса наважки суміші, в грамах; m2 - маса наважки тіотриазоліну в стандартному зразку, в грамах; P - маса суміші пірацетаму і тіотриазоліну, в грамах. Примітки 1) Приготування розчину стандартного зразку (СЗ) пірацетаму та тіотриазоліну. Близько 0,2 г (точна наважка) СЗ пірацетаму та 0,05 г (точна наважка) СЗ тіотриазоліну поміщають в мірну колбу місткістю 100мл, розчиняють в 60-70мл води очищеної, доводять очищеною водою до мітки, старанно перемішують. 10мл одержаного розчину поміщають в мірну колбу на 50мл, доводять водою очищеною до мітки і старанно перемішують. Розчин використовують свіжеприготовленим. 2) Приготування рухомої фази. 3,4 г калію дигідрофосфату поміщають в мірну колбу місткістю 500мл, розчиняють в 350-400мл води очищеної, доводять водою очищеною до мітки і перемішують. Розчин використовують свіжеприготовленим. 3) Перевірку придатності хроматографічної системи проводять за методикою, наведеною в Державній фармакопеї України 1 вид., розділ 2.2.29. Приклад 2 Кількісне визначення пірацетаму та тіотриазоліну в таблетках "Ноотріл". Близько 0,35 г (точна наважка) порошку розтертих 20 таблеток "Ноотріл" (склад: 0,2г пірацетаму, 0,05г тіотриазоліну, допоміжних речовин до 0,356г) 5 75606 6 поміщають в мірну колбу місткістю 100мл, додаПриклад 3 ють 60-70мл води очищеної, перемішують близько Кількісне визначення пірацетаму та тіотриазо10 хвилин, доводять водою очищеною до мітки, ліну в ін'єкційному розчині "Ноотріл" (100г пірацеперемішують, фільтрують через фільтр "синя стрітаму, 25г тіотриазоліну, води для ін'єкцій до чка", відкидаючи перші 10-15мл фільтрату. 1000мл) по 5,0мл. 10мл отриманого фільтрату поміщають в мірну 2,0мл розчину "Ноотріл" поміщають в мірну колбу місткістю 50мл, доводять об'єм розчину воколбу місткістю 100мл, доводять водою очишеною дою очищеною до мітки і старанно перемішують. до мітки, старанно перемішують. 20 мкл отриманого розчину хроматографують 10мл одержаного розчину поміщають в мірну на рідинному хроматографі з УФ-детектором. колбу на 50мл і доводять водою очищеною до мітУмови визначення дивись в прикладі 1. ки. Вміст пірацетаму в одній таблетці, в грамах, 20 мкл одержаного розчину хроматографують, обчислюють за формулою: як це наведено в прикладі 1. Вміст пірацетаму, в грамах, в 1мл розчину обS1 m0 B X числюють за формулою: S0 m1 S1 m0 X де: S1 - середнє значення площ піків пірацеS0 m1 таму, розраховане з хроматограм досліджуваної де: S1 - середнє значення площ піків пірацесуміші; таму, розраховане з хроматограм досліджуваного S0 - середнє значення площ піків пірацетаму, розчину; розраховане з хроматограм розчину СЗ пірацетаS0 - середнє значення площ піків пірацетаму, му та тіотриазоліну; розраховане з хроматограм розчину СЗ пірацетаB - середня маса таблеток "Ноотріл", в граму та тіотриазоліну; мах; m0 - маса наважки пірацетаму, в грамах, в m0 - маса наважки пірацетаму, в грамах, взяСЗ; та для приготування СЗ; m1 - кількістьмл ін'єкційного розчину "Ноотm1 - маса наважки таблеткової маси, в граріл", взятого для аналізу. Вміст тіотриазоліну, в мах. грамах, в 1мл розчину обчислюють за формулою: Вміст тіотриазоліну, в грамах, в одній таблетці обчислюють за формулою: S3 m2 X S3 m2 B S2 m1 X S2 m1 де: S3 - середнє значення площ піків тіотриаде: S3 - середнє значення площ піків тіотриазоліну, розраховане з хроматограм досліджуваного розчину; золіну, розраховане з хроматограм досліджуваної суміші; S2 - середнє значення площ піків тіотриазоліS2 - середнє значення площ піків тіотриазоліну, розраховане з хроматограм розчину СЗ пірацетаму та тіотриазоліну; ну, розраховане з хроматограм розчину СЗ пірацетаму та тіотриазоліну; m2 - маса наважки тіотриазоліну, в грамах, в B - середня маса таблеток "Ноотріл", в граСЗ; мах; m1 - кількістьмл ін'єкційного розчину "Ноотm2 - маса наважки тіотриазоліну, в грамах, ріл", взятого для аналізу. взята для приготування СЗ; m 1 - маса наважки таблеткової маси, в грамах. Таблиця 1 Результати кількісного визначення штучної суміші пірацетаму та тіотриазоліну в співвідношенні, 4:1 Взято для аналізу, пірацетам+тіотриазолін 1 0,200+0,0500 Пірацетам Метрологічні харакЗнайдено, в г теристики 2 3 Серія 1 0,201 X 0,201 0,202 S=0,001225 0,199 x 0,001408 0,202 ,% 0,70 0,201 Тіотриазолін Метрологічні харакЗнайдено, в г теристики 4 5 0,0492 0,0493 0,0494 0,0495 0,0496 X 0,0494 S=0,0003162 x 0,0003634 ,% 0,74 7 75606 8 Продовження таблиці 1 1 2 0,220+0,0550 0,214 0,218 0,216 0,217 0,2165 0,180+0,0450 0,1796 0,1799 0,1798 0,1797 0,1800 3 Серія 2 X 0,2163 S=0,001521 x 0,001748 ,% 0,81 4 5 0,0550 0,0552 0,0553 0,0548 0,0552 X 0,0551 S=0,0002291 x 0,0002633 ,% 0,48 0,0448 0,0445 0,0440 0,0442 0,0425 X 0,0440 S=0,0008860 x 0,0001018 ,% 2,31 Серія 3 X 0,1798 S= 0,0001871 x 0,0002150 ,% 0,12 Таблиця 2 Результати кількісного визначення пірацетаму та тіотриазоліну в таблетках "Ноотріл" покритих оболонкою № серії 10202 30202 50202 Пірацетам Наважка таблеМетрологічні ткової маси, в г Знайдено,в г і в % характеристики 0,3490 0,1980(99,00) X 0,199 0,3486 0,1991 (99,55) S=0,002950 0,3498 0,2010(100,50) x 0,003390 0,3489 0,200 (100,00) ,% 170 , 0,3482 0,1976 (98,80) 0,3542 0,2050 (102,50) X 0,207 0,3540 0,2080 (104,00) S=0,002449 0,3539 0,2040 (102,00) x 0,002815 0,3540 0,2010 (100,50) ,% 136 , 0.3541 0,2080(104,00) 0,3492 0,2020 (101,00) X 0,201 0,3495 0,2010(100,50) S=0,002236 0,3497 0,1988 (99,40) x 0,002570 0,3497 0,1992(99,60) ,% 128 , 0,3499 0,2040(102,00) Тіотриазолін Метрологічні Знайдено,в г і в % характеристики 0,0490 (98,00) X 0,0484 0,0488 (97,60) S=0,003873 0,0486 (97,20) x 0,000995 0,0492 (98,40) ,% 2,056 0,0481 (96,20) 0,0491 (98,20) 0,0500 (100,00) 0,0492 (98,40) 0,0491 (98,20) 0,0501 (100,20) 0,0500 (100,00) 0,0502(100,40) 0,0504 (100,80) 0,0501 (100,20) 0,0498 (99,60) X 0,0495 S=0,001095 x 0,001259 ,% 2,54 X 0,0501 S=0,00025 x 0,0002873 ,% 0,57 Таблиця 3 Результати кількісного визначення пірацетаму та тіотриазоліну в ін'єкційному розчині "Ноотріл" № серії Наважка, вмл 1 2 70602 2,0 101002 2,0 Пірацетам Метрологічні Знайдено,в г і в % характеристики 3 4 0,0990 (99,00) X 0,1000 0,0989 (98,90) S=0,006841 0,1010(101,00) x 0,007862 0,1020 (102,00) ,% 7,86 0,1000(100,00) 0,1030 (103,00) X 0,101 0,1020(102,00) S=0,005811 0,0990 (99,00) x 0,001831 0,1010(101,00) ,% 181 , 0,1000(100,00) Тіотриазолін Метрологічні хаЗнайдено,в г і в % рактеристики 5 6 0,02572(102,88) X 0,02578 0,02574 (102,90) S=0,0004919 0,02580 (103,20) x 0,0005653 0,02582 (103,28) ,% 2,19 0,02582(103,28) 0,02548 (101,92) X 0,02547 0,02550(102,00) S=0,0001581 0,02551 (102,04) x 0,0001817 0,02546 (101,84) ,% 0,71 0,02540(101,60) 9 75606 10 Продовження таблиці 3 1 111202 2 2,0 3 0,1010(101,00) 0,0990 (99,00) 0,1020(102,00) 0,1000(100,00) 0,0989 (98,90) Комп’ютерна верстка М.Клюкін 4 X 0,1000 S=0,006834 x 0,007854 ,% 7,85 5 0,02500 (100,00) 0,02480 (99,20) 0,02498 (99,92) 0,02505 (100,20) 0,02512 (100,48) Підписне 6 X 0,02499 S=0,0006403 x 0,0007359 ,% 2,94 Тираж 26 прим. Міністерство освіти і науки України Державний департамент інтелектуальної власності, вул. Урицького, 45, м. Київ, МСП, 03680, Україна ДП “Український інститут промислової власності”, вул. Глазунова, 1, м. Київ – 42, 01601