Комбінація молочнокислих бактерій і її застосування для профілактики і/або лікування інфекцій і запальних станів

1. Комбінація молочнокислих бактерій для запобігання і/або лікування інфекцій і запальних станів, які викликаються бактеріями, вірусами або грибами в ротовій порожнині і піхві, що включає: (a) перший компонент, який складається з щонайменше одного штаму молочнокислих бактерій, які продукують Н2O2, і (b) другий компонент, який складається з щонайменше одного штаму молочнокислих бактерій, які утилізують аргінін, в якій компонент (а) вибраний із групи, що складається зі штамів видів Lactobacillus crispatus, Lactobacillus salivarius i Lactobacillus casei, і компонентом (b) є штам Lactobacillus brevis CD2, депонований у Німецькій колекції мікроорганізмів і клітинних культур, Брауншвейг, Німеччина, 6 лютого 1998 під номером DSM 11988. 2. Комбінація за п.1, яка відрізняється тим, що співвідношення числа бактерій у компоненті (а) до числа бактерій у компоненті (b) складає від 1:100 до 100:1. 3. Комбінація за п.2, яка відрізняється тим, що вказане співвідношення складає від 1:5 до 5:1. 4. Комбінація за пунктом 3, яка відрізняється тим, що вказане співвідношення складає 1:1. 5. Комбінації за будь-яким з пп.1-4 , яка відрізняється тим, що включає від 1х102 до 5х1011 бакте 2 (19) 1 3 76696 4 13. Комбінація за п.1, яка відрізняється тим, що 15. Застосування за п.14, яке відрізняється тим, компонент (а) є Lactobacillus salivarius, і яка додатщо інфекції і запальні стани включають гінгівіт, ково включає Lactobacillus fermentum. періодонтит, мукозит та стоматит, викликані лікар14. Застосування комбінації молочнокислих бактеськими препаратами і/або фізичними агентами, рій, що включає (а) перший компонент, який скласиндром Бехчета, діакератоз ротової порожнини, дається з щонайменше одного штаму молочнокиглосит, захворювання горла, сіаладеніт, сіалолітіслих бактерій, які продукують H2O2, і аз, пухирчатку, плоский лишай, синдром Шегрена, (b) другий компонент, що складається з щонаймевагіноз, вагініт, уретрит, простатит, проктит, отит, нше одного штаму молочнокислих бактерій, які кон’юктивіт, риніт, синусит, лейкоплакію, афти, утилізують аргінін, герпес та інфекції, які викликаються Helicobacter у якій компонент (а) вибраний із групи, що складаpilori у ротовій порожнині. 16. Застосування за будь-яким з пп.14-15, яке відється зі штамів видів Lactobacillus crispatus, різняється тим, що гігієнічний продукт або фарLactobacillus salivarius i Lactobacillus casei, і компонентом (b) є Lactobacillus brevis CD2, депонований мацевтичний препарат призначений для лікування у Німецькій колекції мікроорганізмів і клітинних ротової порожнини як протизапальний агент, агент культур, Брауншвейг, Німеччина, під номером проти карієсу і/або агент проти зубного нальоту. 17. Застосування за п.14, яке відрізняється тим, DSM 11988, для виготовлення харчової добавки, гігієнічного продукту або фармацевтичного препащо гігієнічний продукт або фармацевтичний прерату, що має активність, яка інгібує ріст патогеннопарат для лікування ротової порожнини представго агента для запобігання і/або лікування інфекцій і лений у вигляді дезодоранту. 18. Застосування за будь-яким з пп.14-17, яке відзапальних станів, викликаних бактеріями, вірусами різняється тим, що співвідношення числа бактеабо грибами, особливо в ротовій порожнині, піхві, уретрі, носі, очах і вухах. рій у компоненті (а) до числа бактерій у компоненті (b) складає 1:1. Даний винахід відноситься до комбінації молочнокислих бактерій і її застосування для отримання харчової добавки, гігієнічного продукту або фармацевтичного препарату для профілактики і/або лікування інфекцій і запальних станів, що викликаються бактеріями, вірусами або грибами, особливо в ротовій порожнині, піхві, уретрі, носу, очах і вухах. Молочнокислі бактерії є грампозитивними бактеріями, які продукують молочну кислоту шляхом ферментації глюкози. Streptococcus thermophilus також включені в дане визначення. Добре відомо, що штами молочнокислих бактерій, які продукують Н2O2 можуть діяти як регулювальники бактерійної флори у відкритих порожнинах організму і на слизових оболонках. Було показано, що молочнокислі бактерії, які продукують Н2О2 можуть бути антагоністами Е.соlі, N. gonorrhoea, G. vaginalis, С. trachomatis, U. urealyticum і В. bivius. Однак дані бактерії мають обмежену корисність при застосуванні в медичній практиці. Це очевидне з того факту, що препарати на основі молочнокислих бактерій (наприклад вагінальні супозиторії), призначені для лікування інфекцій., які викликаються вищезгаданими мікроорганізмами (наприклад вагініту), не застосовуються лікарями, які вважають за краще лікувати своїх пацієнтів антибіотиками або хіміотерапевтичними препаратами. Наскільки відомо заявникам антибактерійна або регулююча флору дія у відкритих порожнинах організму і на слизових оболонках не є визначальною ознакою молочнокислих бактерій, які утилізу ють аргінін. У цей час із здивуванням було встановлено, що активність молочнокислих бактерій, які продукують Н2О2 значною мірою посилюється при доданні одного і більше штамів молочнокислих бактерій, які здатні утилізувати аргінін. Аргінін утворює частину різних невеликих пептидів, виявлених в біологічних рідинах і також присутній у вигляді вільного аргініну. Багато які види бактерій використовують його для власного харчування і зростання. Отже, молочнокислі бактерії, які утилізують аргінін можуть позбавляти інші патогенні або потенційно патогенні бактерії певної кількості аргініну, яка хоч і недостатня для зупинки їх зростання, робить їх більш чутливими до впливу. Н2О2, що продукується молочнокислими бактеріями. Отже, даний винахід забезпечує комбінацію молочнокислих бактерій, що включає: (a) перший компонент, що складається з щонайменше одного штаму молочнокислих бактерій, які продукують Н2О2, і (b) другий компонент, що складається з щонайменше одного штаму молочнокислих бактерій, які утилізують аргінін. Штам молочнокислих бактерій в компоненті (а) переважно вибраний з групи, що включає штами видів Lactobacillus crispatus, Lactobacillus salivarius і Lactobacillus casei в той час, як штам молочнокислих бактерій в компоненті (Ь) вибраний з групи, що включає штами видів Lactobacillus brevis, Lactobacillus gasseri i Lactobacillus fermentum. Конкретніше, штам молочнокислих бактерій в компоненті (b) представляє штам Lactobacillus brevis 5 76696 6 CD2 той, що зберігається в DSM - Німецькій колеінфекції і запальні стани включають гінгівіт, періокції мікроорганізмів і клітинних культур, GmbH, донтит, мукозит і стоматит, викликаний лікарськиBraunschweig, Німеччина, з 6 лютого 1998 року під ми препаратами і/або фізичними агентами, синдінвентарним номером DSM 11988 згідно з Бударом Бехчета, діакератоз ротової порожнини, пештськім Договором, або його мутанти або похідглосит, захворювання горла, сіаладеніт, сіалолітіні. аз, пухирчатку, плоский ліхен, синдром Шегрена, Співвідношення числа бактерій в компоненті вагіноз, вагініт, уретрит, простатит, проктит, отит, (а) до числа бактерій в компоненті (Ь) переважно кон'юнктивіт, риніт, синусит, лейкоплакію, афти, рівне від 1:100 до 100:1, і більш переважно від 1:5 герпес і інфекції, що викликаються Helicobacter до 5:1, найбільш переважне співвідношення дорівpilori в ротовій порожнині. нює 1:1. Комбінацію також можна застосовувати для ліКомбінацію можна вводити в разовій лікарській кування ротової порожнини у вигляді дезодоранту для ротової порожнини і препарату проти запаформі, що включає від 1 102 до 5 1011 бактерій лення, карієсу і/або зубного нальоту. компонента (а) і від: 1 102 до 5 1011 бактерій комНаступні приклади служать для більш докладпонента (b), переважне 1 109 бактерії компонента ної ілюстрації різних аспектів винаходу, але їх ні (а) і 3 109 бактерій компонента (b). якому образом не треба тлумачити як такі, що обКомбінацію також можна вводити у вигляді межують винахід. таблеток, смоктальних таблеток, цукерок, жувальПриклад 1 ної гумки, желатинових капсул, вагінальних супоОцінювали інгібуючу дію: молочнокислих бакзиторіїв, супозиторіїв і мікроклизм, а також у витерій, які продукують Н2О2 (компонент А); молочгляді пілюль, зубних паст і гелів, зубних порошків, нокислих бактерій, які утилізують аргінін (компорідин для полоскання рота, засобів для чищення нент В); і комбінації двох штамів конкретно в зубів, спреїв, суспензій і мазей. співвідношенні 1:1 (комбінація АВ) на зростання Згідно з іншим варіантом винаходу комбінація потенційно патогенних бактерій. додатково включає щонайменше один штам моСтисло, рН культури молочнокислих бактерій, лочнокислих бактерії, вибраних з групи, що вклющо тестується спочатку доводили до нейтрального чає: значення, оскільки кисле значення рН саме по собі Lactobacillus acidophilus, Lactobacillus buchneri, інгібує зростання бактерій. Суспензію піддавали Lactobacillus casei, Lactobacillus catenaforme, стерилізації фільтруванням і фільтрат використоLactobacillus cellobiosus, Lactobacillus crispatus, вували для просочення ряду дисків з всмоктуючоLactobacillus curvatus, Lactobacillus delbrueckii, го паперу (30мкл фільтрату на диск). Диски вміщуLactobacillus jensenii, Lactobacillus leichmannii, вали на чашки з селективним поживним Lactobacillus minutus, Lactobacillus plantaram, середовищем, на яке висівали 0,1мл Gardnerella Lactobacillus salivarius, Lactobacillus brevis, vaginalis (штам, який викликає вагіноз і який видіLactobacillus gasseri, Lactobacillus fermentum, ляли в лабораторії) разом з контрольним диском, Bifidobacterium adolescent, Bifidobacterium який просочували тільки 30мкл дистильованої воangulatum, Bifidobacterium bifidum, Bifidobacterium ди. Після інкубування протягом 24год. при 37°С breve, Bifidobacterium catenulatum, Bifidobacterium оцінювали інгібування зростання патогенів визнаdentium, Bifidobacterium eriksonii, Bifidobacterium ченням діаметра кільця навколо диска в міліметinfantis, Bifidobacterium longum, Bifidobacterium рах. plantarum і Streptococcus thermophilus. Другу серію дослідів проводили з Комбінація може також включати вітаміни, чеStreptococcus mutans в якості мішеневого патогетвертинні амонієві основи, мінеральні солі, антиону, даний вид є збудником зубного нальоту і карієксиданти і засоби проти зубного нальоту. су. Винахід також відноситься до застосування Характеристика бактерій як продуцентів Н2О2 комбінації молочнокислих бактерій, що включає: була дана за допомогою класичної бензидин(a) перший компонент, що складається з щопероксидазної реакції, якою виявляються колонії найменше одного штаму молочнокислих бактерій, бактерій, що продукують Н2О2 по синьому забарвякі продукують Н2О2, і ленню. Визначали активність аргініндегідролази (b) другий компонент, що складається з щодля оцінки здатності молочнокислих бактерій утинайменше одного штаму молочнокислих бактерій, лізувати аргінін [M.C.Manca de Nadra, які утилізують аргінін, для отримання харчової Milchwissenschaft, 37 (1982) pp.669-670]. добавки, гігієнічного продукту або фармацевтичноМолочнокислі бактерії отримували з Америго препарату для профілактики і/або лікування канської колекції типових культур (АТСС), інфекцій, і запальних станів, що викликаються бакRockville, США. теріями, вірусами або грибами, особливо в ротовій порожнині, піхві, уретрі, носу, очах і вухах. Дані 7 Штам бактерій Продуцент Н2О2 (компонент А) Lactobacillus crispatus (ATCC 39197) Lactobacillus salivarius (ATCC 11741) Lactobacillus crispatus + Lactobacillus salivarius Утилізатор аргініну (компонент В) Lactobacillus brevis (ATCC 14869) Lactobacillus fermentum (ATCC 14931) Lactobacillus brevis + Lactobacillus fermentum Комбінація AB (співвідношення А до В 1:1) Lactobacillus crispatus + Lactobacillus brevis Lactobacillus crispatus + Lactobacillus fermentum Lactobacillus salivarius + Lactobacillus brevis Lactobacillus salivarius + Lactobacillus fermentum Продуцент Н2О2 (компонент А) Lactobacillus crispatus (ATCC 39197) Lactobacillus salivarius (ATCC 11741) Lactobacillus cnspatus + Lactobacillus salivarius Утилізатор аргініну (компонент В) Lactobacillus brevis (ATCC 14869) Lactobacillus fermentum (ATCC 14931) Lactobacillus brevis + Lactobacilhis fermentum Комбінація AB (співвідношення А до В 1:1) Lactobacillus crispatus + Lactobacillus brevis Lactobacillus crispatus + Lactobacillus fermentum Lactobacillus salivarius + Lactobacillus brevis Lactobacillus salivarius + Lactobacillus fermentum 76696 8 по індексу зубного нальоту і гінгівальному індексу. Для зубного нальоту використали наступну Кільце інгібування бальну систему для шести зубів (перший верхній (активність проти G. vaginalis, мм) моляр праворуч; верхній центральний різець зліва; перший верхній премоляр зліва; перший нижній моляр зліва; нижній центральний різець праворуч; 75 перший нижній премоляр праворуч): 0 - на всіх відсутній зубний наліт 60 1 - немає видимого зубного нальоту 2 - видимий зубний наліт 63 3 - дуже виражений зубний наліт Наступну бальну систему використали для 0 оцінки гінгівальних бляшок з використанням краю 2 ясен, прилеглого до шести зубів, вказаних вище: 0 - без запалення 0 1 - невелике запалення 2 - помірне запалення з кровотечею при натисненні 3 - помітне запалення з тенденцією до спон112 танної кровотечі. Об'єднані дані, отримані для шести зубів чотирьох добровольців були наступними: 100 117 104 98 102 99 0 1 1 118 126 121 120 Приклад 2 Готували смоктальні таблетки з наступним складом композиції: Комбінація АВ 4000млн (Lactobacillus salivarius + Lactobacillus brevis, співвідношення 1:1) Маніт 400мг Сахарин 5мг Поліетиленоксид 50мг Mg стеарат 15мг Тальк 25мг Кремній діоксид 5мг Дані таблетки давали чотирьом добровольцям, яких просили не чистити зуби або використовувати жувальну гумку протягом попереднього тижня. Суб'єкти використали три таблетки в день протягом одного тижня після їжі, даючи таблеткам розчинитися у роті. Клінічні обстеження проводили Суб'єкт №1 №2 №3 №4 Індекс зубного нальоту 0 7 днів 8 2 9 3 15 5 15 7 Гінгівальний індекс 0 7 днів 7 1 10 3 6 2 8 3 Приклад 3 Чотирьох суб'єктів з клінічним і гістологічним діагнозом рецидивуючих афтозних виразок лікували протягом десяти днів шістьма смоктальними таблетками на день, склад яких представлений в прикладі 2. У всіх пацієнтів, що були піддані лікуванню спостерігали повне загоєння виразок в кінці десятиденного курсу і ні у одного з них не з'являлося нових виразок протягом наступного місяця. Для поліпшення смаку і зовнішнього вигляду бактерійної комбінації АВ можна додавати придатні барвники і підсолоджувачі такі, як сахарин, м'ятне масло і ксиліт, як це прийнято і добре відоме фахівцям в даній області. Комбінацію АВ можна вводити у вигляді пілюль, цукерок, жувальної гумки, желатинових капсул, зубних паст і гелів, зубних порошків, рідин для полоскання рота, зубних чистячих засобів, таблеток, вагінальних супозиторіїв супозиторіїв, спреїв, суспензій і мікроклизм. Приклад 4 Приготування зубної пасти. Основа зубної пасти. Процентний склад: Кальцій фосфат дигідрат 37,5% Гліцерин (85% у воді) 30,0% Віддушка (масло м'яти перцевої) 1,0% Натрієва сіль карбоксиметилцелюлози 1,0% Вода очищена 20,8% Натрієва сіль сахарину (1% водний розчин) 2,5% Натрій лаурилсульфат 2,0% Вода очищена 5,2% 100,0% Композиція по масі: 9 Кальцій фосфат дигидрат Гліцерин (85% у воді) Віддушка (масло м'яти перцевої) Натрієва сіль карбоксиметилцелюлози Вода очищена Натрієва сіль сахарину (1% водний розчин) Натрій лаурилсульфат Вода очищена 76696 10 сніжну гомогенну пасту з приємним м'ятним запахом. 38,5г ліофілізованих молочнокислих бактерій (L. salivarius + L. brevis, 1:1; 1010 КОЕ/г) пропускали 9,0г через сито з отворами 50 меш і додавали невели1872г кими порціями до частини (770г) вищезгаданої основи зубної пасти, що залишилася. Отримана 22,5г гомогенна паста мала світлий блідо-коричневий 18,0г колір і м'ятний запах. 48,8г Приклад 5 Приготування вагінальних таблеток з швидким 900,0г вивільненням Гліцерин додавали до дигідрату кальцій фосВагінальні таблетки, покриті шипучим шаром, фату, який подрібнювали і пропускали через сито готували вологою грануляцією. Таблетки важили з отворами 50 меш. Суміші давали гідратуватися, 2100мг кожна і містили 100мг комбінації молочноотримавши густу гомогенну пасту. У цій точці докислих бактерій як активна речовина. давали віддушку (1% масло м'яти перцевої). Кожна вагінальна таблетка мала наступний Натрієву сіль карбоксиметилцелюлози гідрасклад: тували у воді протягом ночі (концентрація 4,6% в Ліофілізовані і пропущені через сиочищеній воді). До отриманого густого гелю додавали розчин то молочнокислі бактерії (30 109 натрієвої солі сахарину. L.brevis, 30 109 L.salivarius і 90 109 Полімерний гель виливали в ступку, де вже L.Plantarum на грам) 100,0мг знаходився кальцій фосфат, який був гідратований Лактоза 1368,0мг гліцерином, і компоненти енергійно перемішували. Кукурудзяний крохмаль 246,0мг Окремо готували.28% розчин натрію лаурилКислота адипінова 192,0мг сульфату в очищеній воді. Натрій бікарбонат 150,0мг Потім розчин натрію лаурилсульфату додаваМагній стеарат 30,0мг ли до густої пасти дикальцій фосфату. Кислота стеаринова 9,0мг Отриману густу гомогенну пасту, яка мала хоКолоїдний кремній діоксид 5,0мг роші реологічні властивості перемішували протя2100,0мг гом декількох хвилин і рафінували пропущенням через вальцювальний рафінер. Отримували біло Комп’ютерна верстка Т. Чепелева 337,5г 270,0г 9,0г Підписне Тираж 26 прим. Міністерство освіти і науки України Державний департамент інтелектуальної власності, вул. Урицького, 45, м. Київ, МСП, 03680, Україна ДП “Український інститут промислової власності”, вул. Глазунова, 1, м. Київ – 42, 01601