Екстракційно-фотометричний спосіб визначення тропанових алкалоїдів у траві нетреби звичайної

Реферат: Екстракційно-фотометричний спосіб визначення тропанових алкалоїдів у рослинній сировині, що включає одержання водно-спиртової витяжки з сировини, використання як реагента бромтимолового синього при рН 7,5, потрійну екстракцію хлороформом, фільтрацію, додавання до фільтрату спиртового розчину кислоти борної з подальшим вимірюванням оптичної густини у порівнянні з розчином стандартного зразку атропіну. Як рослинну сировину використовують траву нетреби звичайної, водно-спиртову витяжку з сировини одержують шляхом кипятіння на водяній бані з десятикратною кількістю етанолу 40 % протягом 60 хвилин, аналізу піддають 2,0 мл одержаної витяжки, а оптичну густину вимірюють за довжини хвилі 420 нм. UA 77225 U (12) UA 77225 U UA 77225 U 5 10 15 20 25 30 35 40 45 50 55 Корисна модель належить до фармації, зокрема до способів хімічного аналізу, а саме до контролю якості рослинної сировини. Нетреба звичайна (Xanthium strumarium L.; йод-трава, зобник, туриця; рос. - дурнишник обыкновенный) - однорічна трав'яниста рослина родини айстрових (Asteraceae). Для медичних потреб заготовляють траву нетреби, зрізуючи облистнену частину стебел. Зібрану сировину використовують свіжою або сушать під укриттям на вільному повітрі [1]. З досвіду вітчизняної і зарубіжної народної медицини відомо, що трава нетреби звичайної має антимікробні, потогінні, жарознижуючі та седативні властивості. Найчастіше настій трави нетреби застосовують при діареї, дизентерії, при хворобах застудного характеру, при шкірних захворюваннях та хворобах щитоподібної залози. Свіжий сік рослини вважається ефективним засобом при кропив'янці. Зовнішньо використовують свіжий сік і настій трави нетреби для змащування уражених місць при шкірних захворюваннях (екзема, лишаї, скрофульозні струпи, рак шкіри, вугри, висипи, грибкові ураження тощо). Нетребу звичайну використовують у гомеопатії [2, 3, 4]. Згідно з літературними джерелами, трава рослини містить значну кількість йоду, глікозид ксантострумарин, сесквітерпенові лактони, поліфеноли, полістероли, аскорбінову кислоту та алкалоїди групи тропану [1, 2]. Серед методів ідентифікації та кількісного визначення тропанових алкалоїдів у лікарській рослинній сировині використовують фармакопейні методи: тонкошарової хроматографії та метод алкаліметрії, які призначені для визначення вмісту даних біологічно активних сполук у траві беладони [5, 6]. За найближчий аналог вибрано спосіб визначення тропанових алкалоїдів у настойці беладони методом екстракційної фотометрії [7], згідно з яким 1 мл настойки упарюють насухо, сухий залишок розчиняють у буферному розчині з рН 7,5 та переносять у ділильну лійку. Додають розчин бромтимолового синього, 10 мл хлороформу та збовтують протягом 3 хвилин. Хлороформну витяжку фільтрують через паперовий фільтр з натрію сульфатом безводним у мірну колбу. Екстракцію хлороформом повторяють ще двічі, фільтрують через той самий фільтр, який потім промивають хлороформом. До об'єднаної хлороформної витяжки додають розчин борної кислоти, доводять спиртом етиловим 96 % до позначки. Отриманий розчин використовують для вимірювання оптичної густини. Для приготування розчину стандартного зразку субстанцію атропіну кількісно переносять водою у ділильну лійку, додають концентрований розчин аміаку та тричі збовтують з хлороформом. Хлороформну витяжку переносять у мірну колбу на 100 мл, доводять розчинником до позначки. Аліквоту отриманого розчину переносять у ділильну лійку, додають хлороформ, розчин бромтимолового синього, буферний розчин з рН 7,5 та збовтують протягом 3 хв. Хлороформну витяжку вміщують у мірну колбу, додають розчин борної кислоти та доводять спиртом етиловим 96 % до позначки. Кількісний вміст алкалоїдів у настойці у перерахунку на атропін обчислюють за формулою: A  0,0003  100 , X 1 A0 де: A1 - оптична густина випробовуваного розчину; A0 - оптична густина розчину стандартного зразку атропіну; 0,0003 - вміст атропіну у розчині стандартного зразку, г. Задача корисної моделі полягає у створенні нового способу визначення тропанових алкалоїдів у траві нетреби звичайної, придатного для стандартизації даної рослини за новим показником - вмістом суми тропанових алкалоїдів у перерахунку на атропін. Поставлена задача вирішується тим, що у екстракційно-фотометричному способі визначення алкалоїдів групи тропану у рослинній сировині, що включає одержання водноспиртової витяжки з сировини, використання як реагент бромтимолового синього при рН 7,5, потрійну екстракцію хлороформом, фільтрацію, додавання до фільтрату спиртового розчину кислоти борної з подальшим вимірюванням оптичної густини у порівнянні з розчином стандартного зразку атропіну, згідно з корисною моделлю, що як рослинну сировину використовують траву нетреби звичайної, водно-спиртову витяжку з сировини одержують шляхом кип'ятіння на водяній бані з десятикратною кількістю етанолу 40 % протягом 60 хвилин, аналізу піддають 2,0 мл одержаної витяжки, а оптичну густину вимірюють за довжини хвилі 420 нм. Водно-спиртова витяжка з трави нетреби звичайної, одержана наведеним способом, є оптимальним для подальшого дослідження методом екстракційної фотометрії. Використання даного екстракту у поєднанні з використанням буферного розчину з визначеним рН 7,5 та 1 UA 77225 U 5 10 15 20 25 30 35 40 45 50 55 розчином бромтимолового синього забезпечує отримання найбільш вираженого максимуму поглинання за довжини хвилі 420 нм. Заявлений спосіб здійснюють наступним чином: висушену траву нетреби подрібнюють. Точну наважку подрібненої сировини вміщують у мірну колбу, додають 40 % етанол у співвідношенні сировина - етанол 1:10 та кип'ятять на водяній бані протягом 60 хвилин. Отриманий розчин охолоджують, фільтрують. Фільтрат упарюють насухо, сухий залишок розчиняють у буферному розчині з рН 7,5, переносять у ділильну лійку, додають розчин бромтимолового синього, хлороформ та струшують протягом 3 хвилин. Хлороформну витяжку фільтрують крізь паперовий фільтр з натрію сульфатом безводним у мірну колбу. Екстракцію повторюють ще 2 рази. Фільтрують крізь той самий фільтр у мірну колбу. У колбу додають розчин кислоти борної, доводять 96 % етанолом до позначки, перемішують та вимірюють оптичну густину отриманого розчину на спектрофотометрі за довжини хвилі 420 нм. Як розчин порівняння використовують розчин стандартного зразку атропіну. Спектр поглинання тропанових алкалоїдів характеризується наявністю максимуму поглинання за довжини хвилі 420 нм. Вміст суми алкалоїдів у траві нетреби у перерахунку на атропін розраховують за емпіричною формулою: A  0,0003  100 X 1 A0 де: A1 - оптична густина випробовуваного розчину; A0 - оптична густина розчину стандартного зразку атропіну; 0,0003 - вміст атропіну у розчині стандартного зразку, г. Корисна модель ілюструється прикладом. Приклад 1. Відповідно до заявленого способу висушену траву нетреби подрібнили до розміру часток, що проходять крізь сито з діаметром отворів 0,35 мм. 1, 0000 г (точна наважка) подрібненої сировини помістили у мірну колбу, додали 10 мл 40 % етанолу та кип'ятили на водяній бані протягом 60 хвилин. Отриманий розчин охолодили, відфільтрували. 2 мл фільтрату випарили насухо, сухий залишок розчинили у 10 мл буферного розчину рН 7,5, перенесли у ділильну лійку, додали 0,5 мл розчину бромтимолового синього, 10 мл хлороформу та струшували протягом 3 хвилин. Хлороформну витяжку відфільтрували крізь паперовий фільтр з 1 г натрію сульфату безводного у мірну колбу місткістю 50 мл. Фільтр промили 3 мл хлороформу. Екстракцію повторили ще 2 рази, кожний раз 10 мл хлороформу. Відфільтрували крізь той самий фільтр у мірну колбу. У колбу додали 10 мл розчину кислоти борної, довели 96 % етанолом до позначки, перемішали та вимірювали оптичну густину отриманого розчину на спектрофотометрі за довжини хвилі 420 нм у кюветі з товщиною шару 10 мм. Як розчин порівняння використовували розчин стандартного зразку атропіну, приготований наступним чином. 0,1160 г атропіну кількісно перенесли водою у ділильну лійку, додали 0,5 мл концентрованого розчину аміаку та тричі збовтували з 20, 15 та 15 мл хлороформу, кожний раз по 3 хвилини. Хлороформну витяжку відфільтрували крізь паперовий фільтр з 2 г натрію сульфату безводного у мірну колбу місткістю 100 мл та довели об'єм розчину хлороформом до позначки. 10 мл отриманого розчину перенесли у мірну колбу місткістю 100 мл та довели об'єм розчину хлороформом до позначки. 3 мл отриманого таким чином розчину стандартного зразку помістили у ділильну лійку, додали 7 мл хлороформу, 0,5 мл бромтимолового синього, 10 мл буферного розчину рН 7,5 та струшували протягом 3 хвилин. Хлороформну витяжку відфільтрували крізь паперовий фільтр з 1 г натрію сульфату безводного у мірну колбу місткістю 50 мл. Фільтр промили 3 мл хлороформу. Екстракцію повторили ще 2 рази, кожний раз 10 мл хлороформу. Відфільтрували крізь той самий фільтр у мірну колбу. У колбу додали 10 мл розчину кислоти борної, довели 96 % етанолом до позначки. Вміст суми алкалоїдів групи тропану у траві нетреби у перерахунку на атропін розраховували за емпіричною формулою: A  0,0003  100 X 1 A0 де: A1 - оптична густина випробовуваного розчину; A0 - оптична густина розчину стандартного зразку атропіну; 0,0003 - вміст атропіну у розчині стандартного зразку, г. Для трави нетреби звичайної: 2 UA 77225 U 0,092  0,0003  100  0,01г . 0,272 Таким чином, заявлено простий та достовірний екстракційно-фотометричний спосіб визначення алкалоїдів групи тропану у траві нетреби звичайної. Заявлений спосіб дозволяє стандартизувати за вмістом алкалоїдів групи тропану рослинну сировину, а саме траву нетреби звичайної, з метою використання її у створенні лікарських засобів. Джерела інформації: 1. Флора СССР. В 30-ти томах / Начато при руководстве и под главной редакцией акад. В. Л. Комарова; Редактор тома Б. К. Шишкин. - M.-Л.: Издательство Академии Наук СССР, 1959. Т. XXV. - С. 521-530. 2. Лесюк М. Траволікування захворювань щитовидної залози. - Львов: СП "БаК", 1999.-32 с. 3. Корсун В.Ф., Лобанов К.А. Лекарственные растения и гипотиреоз. - М, 2007.-35 с. 4. Корсун В.Ф., Лобанов К.А. О фитотерапии гипотиреоза // Матер. XII конф. "Традиционная медицина России - прошлое, настоящее, будущее". - М, 2007. - С. 104-107. 5. Державна фармакопея України / Держ. п-во "Науково-експертний фармакопейний центр".1-е вид., 3 доп., 2008. - С. 157-159. th 6. European Pharmacopoeia 6 ed. - Strasbourg: European Department for the Quality of Medicines, 2011. - Р. 4234-4235. 7. Костенникова З.П., Чичкова И.В. Оптимизация условий экстракционно-фотометрического определения алкалоидов группы тропана / З.П. Костенникова, И.В.Чичкова // Фармация, 1989 № 5. - С. 35-39. X 5 10 15 20 ФОРМУЛА КОРИСНОЇ МОДЕЛІ 25 30 Екстракційно-фотометричний спосіб визначення тропанових алкалоїдів у рослинній сировині, що включає одержання водно-спиртової витяжки з сировини, використання як реагента бромтимолового синього при рН 7,5, потрійну екстракцію хлороформом, фільтрацію, додавання до фільтрату спиртового розчину кислоти борної з подальшим вимірюванням оптичної густини у порівнянні з розчином стандартного зразку атропіну, який відрізняється тим, що як рослинну сировину використовують траву нетреби звичайної, водно-спиртову витяжку з сировини одержують шляхом кипятіння на водяній бані з десятикратною кількістю етанолу 40 % протягом 60 хвилин, аналізу піддають 2,0 мл одержаної витяжки, а оптичну густину вимірюють за довжини хвилі 420 нм. Комп’ютерна верстка А. Крижанівський Державна служба інтелектуальної власності України, вул. Урицького, 45, м. Київ, МСП, 03680, Україна ДП “Український інститут промислової власності”, вул. Глазунова, 1, м. Київ – 42, 01601 3