Вакцина, інактивована проти хвороби тешена свиней

Реферат: Вакцина, інактивована проти хвороби Тешена свиней, містить інактивовану вірусовмісну суспензію, змішану з масляним ад'ювантом. При цьому використовують штам "Дніпровський 34", депонований у Депозитарії Державного науково-контрольного інституту біотехнології і штамів мікроорганізмів за номером 486, інактивований етиленіміном, і ад'ювант ВНДІЗТ. UA 79396 U (12) UA 79396 U UA 79396 U 5 10 15 20 25 30 35 40 45 50 55 60 Корисна модель належить до ветеринарної вірусології та біотехнології, зокрема до вакцин, які використовуються для імунопрофілактики тешовірусного енцефаломієліту (хвороби Тешена) свиней. Відомі жива та інактивована вакцини проти хвороби Тешена. Вірусвакцину проти хвороби Тешена готують з культурального авірулентного тешовірусу 1-го серотипу штаму "Перечинський-642", виділеного в 1971 р. [Романенко В.Ф., Сорока В.И., Прус О.Г. Иммуногенность вирусвакцины против болезни Тешена // Ветеринария.-1991. - № 7. - С. 27-28.]. При виготовленні вакцини проти хвороби Тешена інактивованої, культуральної, емульгованої використовують епізоотичний штам "Закарпатський", виділений у 1973 р. [Дудников Л.А., Сергеев О.В., Алипер Т.И., Непоклонов Е.А., Сергеев В.А. Антигенная активность инактивированного препарата вируса болезни Тешена на свиньях в зависимости от адъюванта // Вирусные болезни с.-х. животных. - Владимир.-1995. - С. 152.]. Вірус накопичують в 7,0 3 перещеплюваних культурах нирок поросят до вихідної активності не нижче 10 ТЦД50/см , інактивують формальдегідом при 28 °C упродовж 8 діб та змішують у співвідношенні 1:1 з масляним ад'ювантом (80 % масла та 20 % емульгатора). Кінцевим продуктом є емульсія типу "вода в маслі" з в'язкістю 250-400 спз залежно від мінерального масла, що використовується (вакцинне, вазелінове, парфумерне) і жирового емульгатора (ланолін). Недоліком цих вакцинних препаратів є те, що виробничий штам тешовірусу, що використовується при виробництві вакцини, не захищає від епізоотичних штамів, які циркулюють в даний час на території України, інактивація вірусу формаліном триває 8 діб, кінцевий продукт, внаслідок використання для емульгування ланоліну потребує підігрівання при застосуванні в зимовий період. В основу корисної моделі поставлено задачу створити вакцинний препарат проти тешовірусного енцефаломієліту (хвороби Тешена) свиней на основі імунологічно домінуючого штаму тешовірусу свиней 1-го серотипу зі скороченням терміну його виготовлення і зниженою в'язкістю. Поставлена задача вирішується шляхом використання штаму "Дніпровський-34" тешовірусу свиней 1-го серотипу, інактивації вірусу етиленіміном упродовж 10 годин, використання ад'юванту ВНДІЗТ. Штам "Дніпровський-34" Porcine teschovirus-1 культивується в перещеплюваних культурах клітин СНЕВ, ВНК-21, РК-15, ПТП, в яких викликає цитопатичний ефект, що спостерігається в 3 залежності від доз вірусу через 24-72 годин, і накопичується в титрі 7,0-8,5 lg ТЦД50/см . У реакції віруснейтралізації антигенно споріднений з еталонними штамами тешовірусу 1-го серотипу Talfan, Teschen 199 й Tirol, епізоотичним контрольним штамом "Чернігівський-2372" на 100 % та вакцинним штамом "Перечинський-642" вірусу ензоотичного енцефаломієліту (хвороби Тешена) свиней на 66 %. Штам "Дніпровський-34" Porcine teschovirus депоновано в Депозитарії Державного науково-контрольного інституту біотехнології і штамів мікроорганізмів (03151, м. Київ, вул. Донецька, 30) 03 листопада 2009 р. під реєстраційним номером 486. [Пат. 8 57372 Україна, МПК C12N7/00, А61К39/125, А61К39/187, C12R1/92. Штам Porcine teschovirus для виробництва ветеринарних імунобіологічних препаратів / Дерев'янко С.В., Сорока В.І., Бокун А.О., Бова Т.О., Божок Л.В.; заявник і патентовласник Інститут сільськогосподарської мікробіології НААН. - № и201009325; заявл. 26.07.2010; опубл. 25.02.2011, бюл. №4.-3 с.]. Другою суттєвою ознакою корисної моделі є застосування для інактивації вірусу етиленіміну, який в концентрації 0,02 % за 10 годин інактивує інфекційність вірусу хвороби Тешена. На відміну від формальдегіду він впливає тільки на нуклеїнову кислоту вірусу. Інактивація є легко контрольований лінійний процес [Пат. 31211 Україна МПК (2006) C12N7/04. Спосіб інактивації вірусу ензоотичного енцефаломієліту (хвороби Тешена) свиней / Сорока В.І., Дерев'янко С.В., Бабіч Н.В., Бова Т.О.: Інститут сільськогосподарської мікробіології УААН № u 200714613. Заявл. 24.12.07, опубл. 25.03.08.]. Третьою відмінністю є застосування ад'юванту ВНДІЗТ, який вміщує емульгатор ВНДІЗТ 1015 % і масляну основу 85-90 % [Пат. 2058154 Російська Федерація. МПК (1996) А61К39/135. Адъювант / Мамков Н.С., Дудников А.И., Михалишин В.В., Савельев В.Ю., Шипилов В.И., Ильина Г.П., Косульникова Н.А., Черкасова Г.Α.; заявитель: Всероссийский научноисследвательский институт защиты животных. - № г 92012922/13; заявл. 21,12.92; опубл. 20.04.96]. Як масляна основа використовується масло для протиящурних біопрепаратів. Ад'ювант, що використовується, має низьку кінематичну в'язкість (при 20 °C 13-18 мм/сек). Температура застигання масла становить - 36-60 °C, що сприяє застосуванню вакцини при мінусових температурах зовнішнього середовища. Ад'ювант змішується з вірусовмісною сировиною у співвідношенні 1:1, що дає можливість одержати емульсію типу "вода в маслі", яка легше фасується та вводиться тваринам. 1 UA 79396 U 5 10 15 20 25 30 Вакцина містить наступне співвідношення компонентів, мас. %: вірусовмісна інактивована 7,0культуральна суспензія штаму "Дніпровський-34" тешовірусу 1-го серотипу з активністю 10 8,5 310 ТЦД50/см 50,0; масляний ад'ювант ВНДІЗТ - 50,0. Отже, запропонована вакцина, інактивована проти хвороби Тешена свиней, виготовляється на основі домінуючого імуногенного штаму "Дніпровський-34" тешовірусу 1-го серотипу, інактивованого етиленіміном, з використанням ад'юванту ВНДІЗТ. Одноразове введення 3 вакцини в дозі 2 см сприяє формуванню специфічного імунітету у свиней до збудника хвороби Тешена, що зберігається упродовж 11 місяців. Захисний рівень антитіл спостерігається вже через 14 днів після введення вакцини. Спосіб виготовлення вакцини проти хвороби Тешена демонструється прикладом 1. Приклад 1. Культуру клітин СНЕВ (ВНК-21, ПТП або іншу чутливу до тешовірусів свиней) інфікують штамом "Дніпровський-34" тешовірусу 1-го серотипу з множинністю зараження 0,1-1 ТЦД50/клітину та витримують в термостаті при 37 °C 24-48 годин до появи цитопатичної дії вірусу на 75-100 %. Культуральні ємності з інфікованою культурою клітин тричі заморожують при -18 °C і нижче та розморожують при температурі 37 °C. Вірусовмісну суспензію очищають 7,08,5 хлороформом і визначають її інфекційну активність, яка повинна бути не менше 10 10 3 ТЦД50/см . Додають етиленімін в концентрації 0,02 % і витримують 10 годин при 28 °C. Після закінчення експозиції для нейтралізації етиленіміну додають тіосульфат натрію до кінцевої концентрації 2 % і витримують 10-30 хвилин при кімнатній температурі. Ступінь інактивації визначають триразовими послідовними пасажами в чутливих до тешовірусів культурах клітин. Інактивовану вірусовмісну суспензію штаму "Дніпровський-34" тешовірусу 1-го серотипу в рівному об'ємі змішують гомогенізатором при 5000 об./хв. упродовж 5 хвилин до отримання гомогенної емульсії з масляним ад'ювантом ВНДІЗТ і фасують по 1-5 доз. Приклад 2. Вакцинний препарат, виготовлений описаним вище способом, одноразово 3 внутрішньом'язово в дозі 2 см вводять трьом поросятам 3,5-місячного віку і трьом кролям 6-9 місячного віку. Для контролю двох поросят залишають нещепленими. Через 28 діб після щеплення усіх поросят заражають епізоотичним контрольним штамом "Чернігівський-2372" тешовірусу 1-го серотипу в дозі 10 ЛД50. Упродовж 40 діб за ними ведуть спостереження. Результати імуногенної та антигенної активності вакцини, інактивованої проти хвороби Тешена, наведені в таблиці. Таблиця Імуногенна та антигенна активність вакцини, інактивованої проти хвороби Тешена № тварини 6 8 9 4к 7к 1 2 3 35 4 0 2 2 2 0 0 0 Титри віруснейтралізуючих антитіл в сироватках крові тварин через/діб Поросята 64 256 512 128 512 1024 128 256 2048 2 4 2 4 2 4 Кролі 16 512 256 16 256 256 2 256 256 Результати зараження захворіло/загинуло (діб) 1024 1024 1024 4 8 2048 256 1024 Клінічно здорові 11 23 14 26 Отже, виготовлений зразок вакцини проти хвороби Тешена антигенно активний і імуногенний. Препарат призначений для застосування у свинарських господарствах різних форм власності для проведення специфічної профілактики тешовірусного енцефаломієліту (хвороби Тешена) свиней. ФОРМУЛА КОРИСНОЇ МОДЕЛІ 40 Вакцина, інактивована проти хвороби Тешена свиней, що містить інактивовану вірусовмісну суспензію, змішану з масляним ад'ювантом, яка відрізняється тим, що використовують штам "Дніпровський 34", депонований у Депозитарії Державного науково-контрольного інституту біотехнології і штамів мікроорганізмів за номером 486, інактивований етиленіміном, і ад'ювант ВНДІЗТ при такому співвідношенні компонентів, мас. %: 2 UA 79396 U вірусовмісна інактивована культуральна суспензія штаму "Дніпровський 34" тешовірусу І серотипу з 7,0 8,5 3 активністю 10 -10 ТЦД50/см масляний ад'ювант ВНДІЗТ 50,0 50,0. Комп’ютерна верстка Л. Бурлак Державна служба інтелектуальної власності України, вул. Урицького, 45, м. Київ, МСП, 03680, Україна ДП “Український інститут промислової власності”, вул. Глазунова, 1, м. Київ – 42, 01601 3