Спосіб очистки сироваток для ідентифікації бурої бактеріальної гнилі картоплі ralstonia solanacearum (smith.) та бактеріального опіку плодових erwinia amylovora (burill.)

Реферат: Спосіб очистки сироваток для ідентифікації бурої бактеріальної гнилі картоплі Ralstonia solanacearum (Smith.) та бактеріального опіку плодових Erwinia amylovora (Burill.) включає імунізацію кролів антигенами бурої бактеріальної гнилі картоплі (ББГК) Ralstonia solanacearum (Smith.) та бактеріального опіку плодових (БОП) Erwinia amylovora (Burill), виділення сироваток та очистку через колонку з сефадексом G-250. UA 82460 U (12) UA 82460 U UA 82460 U 5 10 15 20 25 30 35 40 45 50 55 Корисна модель належить до галузі імунології, зокрема до технології виготовлення сироваток для ідентифікації бактеріальних хвороб. В літературі відомі багато способів імунізації тварин. Вони відпрацьовані відповідно їх призначенням і відрізняються між собою по складності імунізації, особливостям антигенів, способам очистки та іншим показникам [1, 2]. Найбільш близьким аналогом до нашої корисної моделі є спосіб очистки антисироваток з крові тварин (прототип) [3]. Спосіб включає очистку сироватки шляхом фільтрування крізь фільтрувальний папір та її центрифугування протягом 20 хвилин при 3000 обертів за хвилину. Згадані способи та спосіб-аналог мають такі недоліки: - Вони є трудомісткими. - Їх використання пов'язане з використанням дорогого обладнання. В основу корисної моделі поставлена задача розробити спосіб очистки сироваток для ідентифікації бурої бактеріальної гнилі картоплі Ralstonia solanacearum (Smith.) та бактеріального опіку плодових Erwinia amylovora (Burill.) шляхом очистки через колонку з сефадексом G-250. Поставлена задача вирішується тим, що у запропонованому способі після імунізації кролів антигенами бурої бактеріальної гнилі картоплі (ББГК) Ralstonia solanacearum (Smith.) та бактеріального опіку плодових (БОП) Erwinia amylovora (Burill.) та виділення сироваток шляхом очистки через колонку з сефадексом G-250 вдається отримати чисті сироватки для імунохімічної ідентифікації даних бактеріальних хвороб. 1. Запропонований спосіб не трудомісткий. 2. Для використання даного способу очистки нема потреби використання дорогого обладнання (центрифуга). 3. Запропонований спосіб дозволяє отримати чисті сироватки для імунохімічної ідентифікації бактеріальних хвороб. Приклади виконання. Приклад 1 (найближчий аналог). Після імунізації кролів антигенами бурої бактеріальної гнилі картоплі (ББГК) Ralstonia solanacearum (Smith.) та бактеріального опіку плодових (БОП) Erwinia amylovora (Burill.) та виділення сироваток проводять їх очистку шляхом центрифугування протягом 20 хвилин при 3000 обертів за хвилину [3]. У результаті очистки сироваток з крові кролів (таблиця 1, додаток 1) від кроля № 1, імунізованого антигеном бурої бактеріальної гнилі картоплі (ББГК) Ralstonia solanacearum (Smith), отримано 11 мл сироватки; від кроля № 2, імунізованого тим же антигеном - 11 мл; від кроля № 3, імунізованого антигеном бактеріального опіку плодових (БОП) Erwinia amylovora (Burill.) 10,5 мл; від кроля № 4, імунізованого теж антигеном БОП Erwinia amylovora (Burill.) - 9,5 мл сироватки до даних антигенів. Отримані сироватки рожевого кольору, недостатньо чисті (таблиця 1, додаток 1; фото 1, додаток 2). Приклад 2. Після імунізації кролів антигенами бурої бактеріальної гнилі картоплі (ББГК) Ralstonia solanacearum (Smith.) та бактеріального опіку плодових (БОП) Erwinia amylovora (Burill.) та виділення сироваток проводять їх очистку шляхом пропускання через колонку з сефадексом G250, врівноважену фізичним розчином. У результаті очистки через колонку з сефадексом G-250 від кроля, що був імунізований антигеном бурої бактеріальної гнилі картоплі (ББГК) Ralstonia solanacearum (Smith.) очищено 11 мл; від кроля №2, імунізованого тім ж антигеном - 10,5 мл; від кроля № 3, імунізованого антигеном бактеріального опіку плодових (БОП) Erwinia amylovora (Burill.) - 9,5 мл; від кроля № 4, імунізованого теж антигеном - 9 мл сироватки до даних антигенів (таблиця 1, додаток 1; фото 2, додаток 3). Після очистки через колонку з сефадексом G-250 сироватки зберігають у холодильнику при 4-6 °C і далі використовують для ідентифікації даних хвороб. Таким чином, після імунізації кролів антигенами бурої бактеріальної гнилі картоплі (ББГК) Ralstonia solanacearum (Smith.) та бактеріального опіку плодових (БОП) Erwinia amylovora (Burill.) та виділення сироваток шляхом очистки через колонку з сефадексом G-250 вдається отримати чисті сироватки для імунохімічної ідентифікації даних бактеріальних хвороб. Процес очистки 4-х проб сироваток крові для імунохімічної ідентифікації бактеріального опіку плодових Erwinia amylovora (Burill.) та бурої бактеріальної гнилі картоплі Ralstonia solanacearum (Smith.) склав 28 хвилин, а способом очистки фільтруванням та центрифугуванням (прототипом) - 3, 5 годин. 1 UA 82460 U 5 10 15 Запропонований нами спосіб забезпечує виготовлення чистої сироватки необхідної для імунологічного вивчення бурої бактеріальної гнилі картоплі Ralstonia solanacearum (Smith.) та бактеріального опіку плодових Erwinia amylovora (Burill.) та ідентифікації його видових та внутрішньовидових форм. Літературні джерела 1. Щербакова Л.А., Умнов A.M., Найденова В.Н. Иммуноферментный метод определения мицелия возбудителя стеблевой ржавчины в растениях пшеницы. / Прикладная биохимия и микробиология. 1988. - том 24., вып. 1 - с. 114-120. 2. Ратушняк Л.К. Поширення та діагностика вірусу шарки сливи на півдні України. Авт. канд. дис. на здобуття наукового ступеня канд біол.наук. К., 2004-24 с. 3. Громова Б.О., Гусева Н.Н., Тимчук К.С. Биохимические методы изучения иммунитета сельскохозяйственных растений к болезням. / В сб. Методы исследований патологических изменений растений. М., Колос, 1988. - С. 3-31. 4. Патент України на корисну модель № 59997 від 10.06.2011р. Спосіб виготовлення сироватки до ліпополісахаридів збудника бурої бактеріальної гнилі картоплі // Промислова власність, Бюл. № 6 С. 124. Таблиця 1 Результати очистки сироваток для ідентифікації бурої бактеріальної гнилі картоплі Ralstonia solanacearum (Smithє) та бактеріального опіку плодових Erwinia amylovora (Burill.), визначений різними способами (2012р.) № п/п 1. 2. 3. 4. 20 25 Кількість отриманої сироватки (мл) Способом фільтрування з Способом прототипом сефадексом G-250 Сироватки № 1 - бура бактеріальна гниль картоплі (ББГК) Ralstonia solanacearum (Smithє) № 2 - бура бактеріальна гниль картоплі (ББГК) Ralstonia solanacearum (Smithє) № 3 - бактеріальний опік плодових (БОП) Erwinia amylovora (Burill.) № 4 - бактеріальний опік плодових (БОП) Erwinia amylovora (Burill.) 11,0 11,0 11,0 10,5 10,0 9,5 9,5 9,0 ФОРМУЛА КОРИСНОЇ МОДЕЛІ Спосіб очистки сироваток для ідентифікації бурої бактеріальної гнилі картоплі Ralstonia solanacearum (Smith) та бактеріального опіку плодових Erwinia amylovora (Burill), що включає імунізацію кролів антигенами бурої бактеріальної гнилі картоплі Ralstonia solanacearum (Smith) та бактеріального опіку плодових Erwinia amylovora (Burill), виділення сироваток, який відрізняється тим, що їх очистку проводять через колонку з сефадексом G-250. 2 UA 82460 U Комп’ютерна верстка Л. Бурлак Державна служба інтелектуальної власності України, вул. Урицького, 45, м. Київ, МСП, 03680, Україна ДП “Український інститут промислової власності”, вул. Глазунова, 1, м. Київ – 42, 01601 3