Спосіб кількісного визначення глікоалкалоїдів у надземній частині кураю пагорбкового

Реферат: Спосіб кількісного визначення глікоалкалоїдів у рослинній сировині шляхом екстракційнофотометричного визначення, що включає одержання водно-спиртової витяжки з сировини, використання як реагенту бромтимолового синього при рН 7,5, потрійне екстрагування хлороформом, фільтрацію, додавання до фільтрату спиртового розчину кислоти борної та вимірювання оптичної густини хвилі у порівнянні з розчином стандартного зразка. Крім цього, як рослинну сировину використовують надземну частину кураю пагорбкового, водно-спиртову витяжку одержують шляхом кип'ятіння на водяній бані з 20-ти кратною кількістю етанолу 70 %, розчин бромтимолового синього додають у кількості 1,5 мл, оптичну густину вимірюють за довжині хвилі 422 нм, а як стандартний зразок використовують сальсоліну гідрохлорид. UA 95151 U (54) СПОСІБ КІЛЬКІСНОГО ВИЗНАЧЕННЯ ГЛІКОАЛКАЛОЇДІВ У НАДЗЕМНІЙ ЧАСТИНІ КУРАЮ ПАГОРБКОВОГО UA 95151 U UA 95151 U 5 10 15 20 25 30 35 40 45 50 55 60 Корисна модель належить до фармації, зокрема до способів хімічного аналізу, а саме до контролю якості рослинної сировини за вмістом алкалоїдів. Чисельні та різноманітні за своєю структурою природні алкалоїди все більш привертають увагу вчених. Інтерес до цієї групи можна пояснити широким розповсюдженням у природі та великим спектром фармакологічної дії, серед якої визначаються противірусна, антибактеріальна, антифунгінальна, антидіабетична, противиразкова, седативна, антиконвульсивна, знеболювальна, нейропротекторна, протиканцерогенна, антиоксидантна, гепатозахисна та інші [1-6]. Алкалоїди суттєво впливають на фармакологічні властивості рослин та їх препаратів, крім того, вони можуть збільшувати токсичність, тому необхідним є нормування їх вмісту. Відомо, що курай пагорбковий (Salsola collina L.) родини Мареві (Chenopodiaceae) містить алкалоїди, серед яких більшу кількість складають глікоалкалоїди сальсолін і сальсолідин [1, 7, 8]. В літературі описано багато методів кількісного визначення алкалоїдів, зокрема, метод високоефективної рідинної хроматографії [9], високоефективної тонкошарової хроматографії [10], капілярного ізотахофорезу, який дозволяє розділити та визначити аглікони, але не забезпечує розділення окремих глікоалкалоїдів, що відрізняються цукровою частиною [11]. Також існує методика електрохімічного визначення глікоалкалоїдів з використанням вуглецевих нанотрубок фенілборонової кислоти [12]. За найближчий аналог вибрано спосіб визначення глікоалкалоїдів групи тропану у надземній частині овочевих рослин родини пасльонових [13]. Відомий спосіб здійснюють шляхом одержання водно-спиртової витяжки з сировини, використання як реагенту бромтимолового синього, потрійну екстракцію хлороформом, фільтрацію, додавання до фільтрату спиртового розчину кислоти борної, вимірювання оптичної густини за довжині хвилі 220 нм порівняно з розчином стандартного зразку атропіну. Недоліком даного способу є неможливість визначення глікоалкалоїдів в екстрактах з надземної частини кураю пагорбкового (Salsola collina L.). Задача корисної моделі полягає у створенні способу визначення глікоалкалоїдів у надземній частині кураю пагорбкового, придатного для стандартизації за показником - вміст алкалоїдів. Поставлена задача вирішується таким чином, що у способі кількісного визначення глікоалкалоїдів у рослинній сировині шляхом екстракційно-фотометричного визначення, що включає одержання водно-спиртової витяжки з сировини, використання як реагенту бромтимолового синього при рН 7,5, потрійне екстрагування хлороформом, фільтрацію, додавання до фільтрату спиртового розчину кислоти борної та вимірювання оптичної густини хвилі у порівнянні з розчином стандартного зразка. Згідно з корисною моделлю як рослинну сировину використовують надземну частину кураю пагорбкового, водно-спиртову витяжку одержують шляхом кип'ятіння на водяній бані з 20-ти кратною кількістю етанолу 70 %, розчин бромтимолового синього додають у кількості 1,5 мл, оптичну густину вимірюють за довжині хвилі 422 нм, а як стандартний зразок використовують сальсоліну гідрохлорид. Ознаки заявленого способу визначені експериментальним шляхом. Спиртовий екстракт кураю пагорбкового, одержаний описаним вище методом, є оптимальним для подальшого екстракційно-фотометричного дослідження. Використання даного екстракту у поєднанні з визначеним рН 7,5 та кількістю розчину бромтимолового синього при довжині хвилі 422 нм дають найбільш виражений максимум поглинання, що забезпечує точність визначення, сходимість та відтворюваність результатів. Заявлений спосіб здійснюють наступним чином: висушену надземну частину кураю пагорбкового подрібнюють до розміру часток, що проходять крізь сито з діаметром отвору 0,350 мм. 5,0000 (точна наважка) подрібненої сировини вміщують у мірну колбу, додають 100 мл 70 % етанолу та кип'ятять на водяній бані протягом 60 хвилин. Отриманий розчин охолоджують, фільтрують. 5 мл отриманого екстракту випаровують на водяній бані до сухого залишку. Після охолодження залишок кількісно переносять у ділильну лійку 10 мл буферного розчину рН 7,5, додають 1,5 мл розчину бромтимолового синього, 10 мл хлороформу і збовтують протягом 3 хв. Хлороформний витяг фільтрують крізь фільтр, змочений хлороформом, в мірну колбу ємністю 50 мл. Вилучення повторюють ще двічі по 10 мл хлороформом, які також фільтрують крізь той же фільтр в ту же колбу. В колбу додають 10 мл розчину кислоти борної, доводять 96 % етанолом до мітки, перемішують та вимірюють оптичну густину отриманого розчину на спектрофотометрі за довжини хвилі 422 нм. Паралельно вимірюють оптичну густину розчину стандартного зразку сальсоліну, приготованого наступним чином: 0,1170 (точна наважка) сальсоліну гідрохлориду кількісно з 10 мл води переносять у ділильну лійку, додають 0,5 мл концентрованого розчину амонію гідроксиду та вилучують послідовно 20, 15, 15 мл хлороформу при збовтуванні протягом 3 хв. 1 UA 95151 U 5 10 Хлороформні витяги фільтрують крізь фільтр, змочений хлороформом в мірну колбу ємністю 100 мл і доводять об'єм розчину хлороформом до метки. 10 мл отриманого розчину переносять в мірну колбу ємністю 100 мл і доводять об'єм розчину хлороформом до мітки (розчин А). 1 мл стандартного розчину містить 0,0001 г сальсоліну. 3 мл отриманого розчину А переносять у ділильну лійку, додають 7 мл хлороформу, 1,5 мл розчину бромтимолового синього, 10 мл фосфатного буферного розчину з рН 7,5 та збовтують протягом 3 хв. Хлороформний витяг фільтрують крізь фільтр, змочений хлороформом, в мірну колбу ємністю 50 мл. Вилучення повторюють ще 2 по 10 мл хлороформом і фільтрують крізь той же фільтр у ту же колбу. В колбу додають 10 мл розчину кислоти борної, доводять 96 % спиртом до мітки і перемішують. УФ-спектр поглинання глікоалкалоїдів кураю пагорбкового характеризується наявністю максимуму поглинання за довжини хвилі 422 нм. Вміст суми глікоалкалоїдів у надземній частині кураю пагорбкового у перерахунку на сальсолін розраховують за емпіричною формулою: A 1 100 , (1) A0 де: A 0 - оптична густина розчину стандартного зразка сальсоліну за довжини хвилі 422 нм; A 1 - оптична густина випробуваного розчину за довжини хвилі 422 нм; _____ - вміст сальсоліну у розчині стандартного зразка, г. x 15 20 25 30 35 40 45 Корисна модель ілюструється прикладом. Приклад 1. У відповідності із заявленим способом висушену надземну частину кураю пагорбкового подрібнили до розміру часток 0,350 мм. 5,0124 г (точна наважка) подрібненої сировини помістили у мірну колбу, додали 100 мл 70 % етанолу та кип'ятили на водяній бані протягом 60 хвилин. Отриманий розчин охолодили, відфільтрували. 5 мл отриманого екстракту випарили на водяній бані до сухого залишку. Після охолодження залишок кількісно перенесли у ділильну лійку з 10 мл буферного розчину рН 7,5, додали 1,5 мл розчину бромтимолового синього, 10 мл хлороформу і збовтували протягом 3 хв. Хлороформний витяг відфільтрували крізь фільтр, змочений хлороформом, в мірну колбу ємністю 50 мл. Вилучення повторювали ще двічі по 10 мл хлороформом, які також відфільтровували крізь той же фільтр в ту же колбу. В колбу додали 10 мл розчину кислоти борної, довели 96 % етанолом до мітки, перемішали та вимірювали оптичну густину отриманого розчину на спектрофотометрі за довжини хвилі 422 нм у кюветі з товщиною шару 10 мм. Як розчин порівняння використовували розчин стандартного зразка сальсоліну, приготованого наступним чином: 0,1170 (точна наважка) сальсоліну гідрохлориду кількісно з 10 мл води перенесли у ділильну лійку, додали 0,5 мл концентрованого розчину амонію гідроксиду та вилучували послідовно 20, 15, 15 мл хлороформу при збовтуванні протягом 3 хв. Хлороформні витяги відфільтрували крізь фільтр, змочений хлороформом в мірну колбу ємністю 100 мл і довели об'єм розчину хлороформом до метки. 10 мл отриманого розчину перенесли в мірну колбу ємністю 100 мл і довели об'єм розчину хлороформом до мітки. 1 мл стандартного розчину містить 0,0001 г сальсоліну. 3 мл отриманого розчину перенесли у ділильну лійку, додали 7 мл хлороформу, 1,5 мл розчину бромтимолового синього, 10 мл фосфатного буферного розчину рН 7,5 та збовтували протягом 3 хв. Хлороформний витяг відфільтрували крізь фільтр, змочений хлороформом, в мірну колбу ємністю 50 мл. Вилучення повторювали ще двічі по 10 мл хлороформом і відфільтровували крізь той же фільтр у ту же колбу. В колбу додали 10 мл розчину кислоти борної, довели 96 % спиртом до мітки і перемішали. Вміст глікоалкалоїдів у надземній частині кураю пагорбкового у перерахунку на сальсолін розраховували за емпіричною формулою: x x 50 55 0,5860 0,0214 1 100 25 100 100 % 0,2660 5,0124 50 25 1 100 12 % Отримані результати відповідають даним, відомим з джерел інформації, і свідчать про достовірність результатів, одержаних заявленим способом. Таким чином, заявлено спосіб визначення глікоалкалоїдів у надземній частині кураю пагорбкового, який дозволяє ідентифікувати та визначити вміст глікоалкалоїдів у лікарській рослинній сировині надземної частини кураю пагорбкового та відзначається точністю, доступністю, сходимістю, відтворюваністю в умовах різних лабораторій та є ефективним для 2 UA 95151 U 5 10 15 20 25 30 35 використання як в умовах виробництва, так і в умовах аптек при визначенні якості лікарської рослинної сировини. Джерела інформації: 1. Chemical and biologically active constituents Salsola collina / Y. - Sh. Jin, J. - L. Du, Y. Yang et all // Chemistry of Natural Compounds. - 2011. - Vol. 47, № 2. - P. 257-261. 2. Antidiabetic and antioxidant properties of alkaloids from Catharanthus roseus (L.) / Soon Huat Tiong, Chung Yeng Looi, Hazrina Hazni at al // Molecules. - 2013. - V. 18(8). - P. 9770-9784. 3. Cytotoxicity, antiviral and antimicrobial activities of alkaloids, flavonoids and phenolic acids / B. Ozcelik, M. Kartal, I. Orhan // Pharmaceutical Biology. - 2011. - V. 49(4). - P. 396-402. 4. Berberine: a plant alkaloid with therapeutic potential for central nervous system disorders / S. K. Kulkarni, A. Dhir // Phytotherapy Research. - 2010. - Vol. 24(3). - P. 317-324. 5. Cardiovascular actions of berberine / C.W. Lau, X.Q. Yao, Z.Y. Chen et al. // Cardiovascular Drug Reviews. - 2001. - Vol. 19(3). - P. 234-244. 6. Alkaloids Isolated from Natural Herbs as the Anticancer Agents / Jin-Jian Lu, Jiao-Lin Bao, XiuPing Chen et al. // Evidence-Based Complementary and Alternative Medicine. - Vol. 2012. - Article ID 485042, http://dx.doi.org/10.1155/2012/485042. 7. Studies on the chemical constituents of Salsola collina / X. J. Wang, Y. X. Zhao, X. H. Ji, X. B. Ding // Zhong yao cai=Zhongyaocai=Journal of Chinese medicinal materials. - 2011. - Vol. 34, № 2. P. 230-231. 8. A new alkaloid from Salsola collina / Y. Xiang, Y. B. Li, J. Zhang, P. Li, Y. Z. Yao // Yao Xue Xue Bao. - 2007. - Vol. 42, № 6. - P. 618-620. 9. High-performance liquid chromatographic determination of glycoalkaloids in potatoes from conventional, integrated, and organic crop system / P. Abreu, A. Relva, S. Matthew et al. // Food control. - 2007. - Vol. 18(1). - P. 40-44. 10. Simultaneous determination of three steroidal glycoalkaloids in Solanum xanthocarpum by high performance thin layer chromatography / K. Shanker, S. Gupta, P. Srivastava et al. // Journal of Pharmaceutical and Biomedical Analysis. - 2011. - Vol. 54(3). - P. 497-502. 11. Determination of potato glycoalkaloids using isotachophoresis and comparison with a HPLC method / F. Kvasnicka, K.R. Price, K. Ng, G.R. Fenwick // Journal of liquid chromatography. - 1994. Vol. 17(9). - P. 1941-1951. 12. Electrochemical determination of glycoalkaloids using a carbon nanotubes-phenylboronic acid modified glassy carbon electrode / H. Wang, M. Liu, X. Hu et al. // Sensors. - 2013. - Vol. 13(12). - P. 16234-16244. 13. Україна Пат. № 75939 UA, МПК (2012.01) G01J 3/30 (2006.01) G01N 21/00 A61K 36/81 (2006.01). / Національний фармацевтичний університет. - З. № u201203557; Заявл. 26.03.2012; Опубл. 25.12.2012. Екстракційно-фотометричний спосіб визначення алкалоїдів групи тропану у надземній частині овочевих рослин родини пасльонових. ФОРМУЛА КОРИСНОЇ МОДЕЛІ 40 45 50 Спосіб кількісного визначення глікоалкалоїдів у рослинній сировині шляхом екстракційнофотометричного визначення, що включає одержання водно-спиртової витяжки з сировини, використання як реагенту бромтимолового синього при рН 7,5, потрійне екстрагування хлороформом, фільтрацію, додавання до фільтрату спиртового розчину кислоти борної та вимірювання оптичної густини хвилі у порівнянні з розчином стандартного зразка, який відрізняється тим, що як рослинну сировину використовують надземну частину кураю пагорбкового, водно-спиртову витяжку одержують шляхом кип'ятіння на водяній бані з 20-ти кратною кількістю етанолу 70 %, розчин бромтимолового синього додають у кількості 1,5 мл, оптичну густину вимірюють за довжині хвилі 422 нм, а як стандартний зразок використовують сальсоліну гідрохлорид. Комп’ютерна верстка Г. Паяльніков Державна служба інтелектуальної власності України, вул. Урицького, 45, м. Київ, МСП, 03680, Україна ДП “Український інститут промислової власності”, вул. Глазунова, 1, м. Київ – 42, 01601 3