Спосіб спектрофотометричного визначення концентрації кислоти саліцилової у лікарських формах аптечного виготовлення у присутності резорцину

Реферат: Спосіб спектрофотометричного визначення концентрації кислоти саліцилової у лікарських формах аптечного виготовлення у присутності резорцину включає одержання розчину точної маси кислоти саліцилової у спирті та визначення величини оптичного поглинання за методом -5 стандарту. Використовують 2,010 г/мл розчину кислоти саліцилової у 70 % спирті, а як комплексоутворювач використовують 1 мл 1 % розчину алюмінію хлориду. Вимірюють величину оптичного поглинання у максимумі при довжині хвилі 314 нм, вміст кислоти саліцилової визначають за визначеною формулою. UA 95150 U (54) СПОСІБ СПЕКТРОФОТОМЕТРИЧНОГО ВИЗНАЧЕННЯ КОНЦЕНТРАЦІЇ КИСЛОТИ САЛІЦИЛОВОЇ У ЛІКАРСЬКИХ ФОРМАХ АПТЕЧНОГО ВИГОТОВЛЕННЯ У ПРИСУТНОСТІ РЕЗОРЦИНУ UA 95150 U UA 95150 U 5 10 15 20 25 30 35 Корисна модель належить до фармації, зокрема до способів фізико-хімічного аналізу, а саме до контролю якості лікарських форм аптечного виготовлення, які містять кислоту саліцилову. Для кількісного визначення речовин широко використовуються електронні спектри поглинання, при вивченні яких керуються довжиною хвилі максимуму. Метод спектрофотометрії є найбільш простим, ефективним, швидким та економічним для умов лабораторій з аналізу якості лікарських засобів. Для кількісного визначення речовин використовують або безпосередньо поглинання світла розчином речовини, що визначається, або компонент, що визначається, переводять за допомогою хімічних реакцій у сполуку, що має характерний спектр поглинання. Державна фармакопея України, а також Європейська та Британська фармакопеї [1, 2, 3] наводять метод алкаліметричного титрування при кількісному визначенні субстанції кислоти саліцилової при індикаторному визначенні точки еквівалентності. Проте рекомендований метод є менш точним у порівнянні зі спектрофотометрією. Метод спектрофотометрії для кількісного визначення кислоти саліцилової у субстанції або у лікарських формах в умовах аптеках та лабораторій з аналізу лікарських засобів використовується у різних варіантах: метод питомого показника поглинання, метод стандарту, за утворенням комплексної сполуки з катіоном заліза (III) [3, 4]. Недоліком методу показника поглинання є отримання некоректних результатів, що пов'язано із значним впливом на оптичне поглинання кислотності або основності 96 % спирту, який використовувався для приготування аналітичних розчинів [5]. Спектрофотометричне визначення кислоти саліцилової у лікарській формі методом стандарту за утворенням комплексної сполуки з катіоном заліза (III) унеможливлює присутність резорцину, який аналогічно вступає у хімічну взаємодію з катіоном заліза (III). В основу корисної моделі поставлено задачу створення простого способу кількісного визначення кислоти саліцилової у присутності резорцину у лікарських формах аптечного виготовлення, який завдяки визначеному оптимальному співвідношенню кислоти саліцилової та алюмінію хлориду дозволяє забезпечити необхідну точність та відтворюваність результатів аналізу при здійсненні контролю якості лікарських форм. Поставлена задача вирішується таким чином, що у способі визначення концентрації кислоти саліцилової у лікарських формах аптечного приготування у присутності резорцину шляхом спектрофотометрії за методом стандарту, згідно з корисною моделлю визначають величину -5 оптичного поглинання аналітичного розчину 2,010 г/мл кислоти саліцилової у 70 % спирті при довжині хвилі 314 нм, як комплексоутворювач використовують 1 мл 1 % розчину алюмінію. Вміст кислоти саліцилової визначають за формулою: X  Ai  C st  100  100  100 , де Ast  1  5 Ai - оптична густина аналітичного розчину препарату у максимумі за довжини хвилі 314 нм; Ast - оптична густина розчину порівняння кислоти саліцилової; C st - концентрація розчину порівняння кислоти саліцилової, (в г/мл). 40 45 Заявлений спосіб забезпечує високу чутливість та специфічність кількісного визначення кислоти саліцилової завдяки оптимальному поєднанню параметрів нового способу. Всі параметри заявленого способу визначені екпериментальним шляхом. Експериментальним шляхом за допомогою методу молярних співвідношень було визначено, що у стехіометричних співвідношеннях 1:2; 1:2,5; 1:3 кислоти саліцилової та алюмінію хлориду комплексна сполука стає стабільною та характеризується постійним максимумом поглинання при довжині хвилі 314 нм (табл. 1). Таблиця 1 Співвідношення компонентів реакції "кислота саліцилова - алюмінію хлорид" Співвідношення компонентів реакції 1:0,5 1:1 Концентрація в аналітичному розчині, моль/л кислота саліцилова 1,45×10 -5 алюмінію хлорид -5 0,82×10 -5 1,45×10 1 Довжина хвилі максимумі поглинання, нм 302 309 у UA 95150 U -5 2,07×10 -5 2,89×10 -5 3,52×10 -5 4,14×10 5 10 15 20 25 30 35 40 45 50 1:1,5 1:2 1:2,5 1:3 312 314 314 314 Заявлений спосіб простий у виконанні, забезпечує прийнятну точність визначення кислоти саліцилової у лікарських формах аптечного приготування у присутності резорцину. Авторами експериментально досліджено спектри поглинання аналітичних розчинів (Фіг. 1) у -5 70 % спирті при концентрації речовини 2,0×10 г/мл: кислоти саліцилової, резорцину, кислоти саліцилової з алюмінію хлоридом, кислоти саліцилової та резорцину з додаванням алюмінію хлориду. Доведено, що спектр поглинання аналітичного розчину кислоти саліцилової та резорцину з додаванням алюмінію хлориду характеризується максимумами поглинання при довжинах хвиль 276 нм та 282 нм, що відповідають резорцину, максимумом поглинання при довжині хвилі 314 нм, який підтверджує утворення комплексної сполуки, а резорцин не заважає виявленню кислоти саліцилової. При виконанні заявленого способу кількісного визначення кислоти саліцилової в умовах лабораторії з аналізу якості лікарських засобів важливі такі аспекти, як можливість прийнятного відтворення в умовах іншої лабораторії, економічні витрати на здійснення даного способу. Згідно з вимогами ДФУ щодо валідації аналітичних методик і випробувань [1] було підтверджено відтворюваність і точність заявленого способу в умовах різних лабораторій з аналізу якості лікарських засобів. Для 4 % саліцилово-резорцинового спиртового розчину було проведено вивчення метрологічних характеристик заявленого способу на мінімальному аналітичному діапазоні застосування: прецизійність на рівні внутрішньолабораторної точності, а також відтворюваність в умовах різних лабораторій. Отримані валідаційні характеристики узгоджуються з критеріями відповідності згідно з вимогами ДФУ. Заявлений спосіб здійснюють наступним чином: 1,00 мл 4 % спиртового розчину саліциловорезорцинового поміщають у мірну колбу місткістю 100,00 мл і доводять об'єм розчину спиртом 70 % до 100,00 мл. 5,00 мл отриманого розчину поміщають у мірну колбу місткістю 100,00 мл, додають 1,00 мл 1,00 % розчину алюмінію хлориду і доводять об'єм розчину спиртом 70 % до 100,00 мл. Розчин порівняння - спирт 70 %. Оптичну густину одержаного розчину вимірюють у максимумі при довжині хвилі 314 нм у кюветі з товщиною шару 10 мм. При кількісному визначенні кислоти саліцилової вимірюють оптичну густину аналітичного розчину препарату та стандартного розчину кислоти саліцилової у максимумі за довжини хвилі 314 нм відносно розчинника - спирт 70,00 %. Вміст кислоти саліцилової розраховують за наведеною вище формулою. У відповідності з ДФУ було здійснено валідацію заявленого способу - як експериментальний доказ того, що він придатний для розв'язання поставлених завдань. Основними валідаційними характеристиками заявленого способу як методики кількісного визначення є діапазон застосування, лінійність, робастність, правильність, а також відтворюваність в умовах різних лабораторій. Саме ці показники свідчать про відтворюваність заявленого способу у запропонованих умовах та дозволяють оцінити як він працює в різних профільних організаціях. Корисна модель ілюструється прикладами. Приклад 1. Екстемпоральну лікарську форму 4 % саліцилово-резорцинового спиртового розчину виготовлено, враховуючи правила аптечної технології, за прописом: Кислоти саліцилової 4,0 г Резорцину 4,0 г Спирту 70 % до 100 мл. 1,00 мл 4 % саліцилово-резорцинового спиртового розчину поміщають у мірну колбу місткістю 100,00 мл і доводять об'єм розчину спиртом 70 % до 100,00 мл. 5,00 мл отриманого розчину поміщають у мірну колбу місткістю 100,00 мл, додають 1,00 мл 1,00 % розчину алюмінію хлориду і доводять об'єм розчину спиртом 70 % до 100,00 мл. Розчин порівнянняспирт 70 %. Оптичну густину одержаного розчину вимірюють у максимумі при довжині хвилі 314 нм у кюветі з товщиною шару 10 мм. При кількісному визначенні кислоти саліцилової вимірюють оптичну густину аналітичного розчину препарату та стандартного розчину кислоти саліцилової у максимумі за довжини хвилі 314 нм відносно розчинника-спирт 70,00 %. Стандартний розчин кислоти саліцилової готували за наступною схемою: 0,2000 г (точна наважка) саліцилової кислоти поміщають у мірну колбу місткістю 100,00 мл і доводять об'єм розчину спиртом 70 % до 100,00 мл. 1,00 мл отриманого розчину поміщають у мірну колбу місткістю 100,00 мл, додають 1,00 мл 1,00 % розчину алюмінію хлориду і доводять об'єм розчину спиртом 70 % до 100,00 мл. 2 UA 95150 U Оптична густина аналітичного розчину склала: А1=0,722, А2=0,723, А3=0,724; Ai=0,723, оптична густина стандартного розчину - Ast=0,712. Розраховано вміст кислоти саліцилової у відсотках: X  5 0,723  2  10 5  100  100  100  4,06 % 0,712  1  5 Знайдена кількість кислоти саліцилової відповідає нормі (3,6-4,4 %). Приклад 2. Для оцінки метрологічних характеристик заявленого способу були попередньо розраховані критерії прийнятності (табл. 2). Таблиця 2 Критерії прийнятності метрологічних характеристик заявленого способу Критерії прийнятності метрологічних характеристик Допуски за ДФУ Максимально допустима повна невизначеність методики - maxΔAs Максимальна систематична похибка - maxδ Критичне значення залишкового стандартного відхилення RSDo% Індекскореляції - Rc Критичне практично не значуще значення вільного члену - а Величини критичних значень у% ±10,00 3,20 1,02 1,81 0,9924 5,12 10 Здійснено прогноз повної невизначеності заявленого способу кількісного визначення вмісту кислоти саліцилової за формулою  As  (2SP  2FAO )  (1,082  0,70 2 )  1,29 %  max  As  3,2 % 15 [1], результати якої не перевищують максимально допустиму повну невизначеність методики (табл. 3). Для дослідження специфічності заявленого способу вивчена відносна систематична похибка ( noise , %) . Вимірювали оптичну густину ( Ablank ) розчину плацебо три рази з вийманням кювети. Паралельно виміряли оптичну густину ( Ast ) розчину порівняння. Було знайдено середнє значення розчину плацебо: Ablank  0,0057 ; Ast  0,7153 . Відносну систематичну похибку, що вноситься допоміжними речовинами, обчислювали за формулою: 20  noise (%)  виконується 100  Ablank  (100  0,0057 ) 0,7153  0,79 % Ast нерівність  noise  0,79 %  max   1,02 % , [6]. тобто За отриманими фонове даними поглинання є незначущим, а заявлений спосіб характеризується припустимою специфічністю. Таблиця 3 Оцінка невизначеності пробопідготовки заявленого способу Операція пробопідготовки Параметр Невизначеність, % Розчин порівняння Зважування на аналітичних вагах, mst 0,0002/0,2 × 100=0,10 г Доведення до об'єму мірної колби, 100,00 0,12 мл Узяття аліквоти, мл 1,00 0,60 Доведення до об'єму мірної колби, 100,00 0,12 мл Невизначеність пробопідготовки 2st  0,10 2  0,12 2  0,60 2  0,12 2  0,40 % розчину порівняння Лікарська форма4 % саліцилово-резорциновий спиртовий розчин 3 UA 95150 U Зважування на аналітичних вагах, г Доведення до об'єму мірної колби, мл Узяття аліквоти, мл Доведення до об'єму мірної колби, мл Узяття аліквоти, мл Доведення до об'єму мірної колби, мл 4,00 0,0002/4×100=0,005 100,00 0,12 1,00 0,60 100,00 0,12 5,00 0,60 100,00 0,12  sp  2st  2xi  Невизначеність % пробопідготовки,  0,40  0,0052  0,12 2  0,60 2  0,12 2  0,60 2  0,12 2   1,1632  1,08 % Здійснено перевірку стабільності розчинів впродовж 1 год. Результати, що наведено у табл.4. підтверджують виконання співвідношення: Δt, %  maxδ, тобто випробовуваний розчин та розчин порівняння характеризуються стабільністю протягом 60 хв. 5 Таблиця 4 Результати дослідження стабільності аналітичних розчинів комплексної сполуки Модельна иазь 100,00 % Стандарт Термін дослідження стабільності nt, хв ( Ai* ) 10 0,7568 0,7930 20 0,7560 0,7951 30 0,7559 0,7960 40 0,7542 0,7936 50 0,7544 0,7920 60 0,7548 0,7923 Середнє 0,7553 0,7937 RSDt, max, Δt, % % % 0,14 0,20 0,28 0,41 1,02 * Значення оптичної густини є середнім 3-х вимірів розчину Вивчено вплив рН для кожного модельного розчину. Результати дослідження свідчать про незначний вплив коливань рН середовища та не перевищують максимальну невизначеність методики (табл. 5). 10 Таблиця 5 Результати вивчення впливу коливання рН на поглинання оптичної густини аналітичними розчинами Оптична густина Модельний розчин, + 0,01 Μ без % НCl додавання 90,00 0,6520 0,6497 100,00 0,7260 0,7210 110,00 0,7963 0,7927 Ai* + 0,01 М NaOH 0,6543 0,7240 0,7983 Середнє SrpH RSDpH, % 0,6520 0,7237 0,7958 0,0023 0,0025 0,0029 0,23 0,25 0,29 ΔpH, % max, % 0,68 0,73 0,84 1,02 * Значення оптичної густини є середнім 3-х вимірів кожного розчину. 15 Приклад 3. Відповідно до вимог ДФУ [1] дослідження валідаційних характеристик проводили у межах діапазону застосування заявленого способу 80,00 % - 120,00 % на модельних розчинах. Для вивчення лінійності отримані результати були статистично оброблені методом найменших квадратів [1]. Побудову калібрувального графіку проводили в нормалізованих координатах. Вимоги до лінійної залежності в нашому випадку виконуються на всьому діапазоні концентрацій, який вивчався (Фіг. 2). 4 UA 95150 U 5 Виконуються вимоги до критерію практичної невизначущості систематичної похибки та до залишкового стандартного відхилення (табл. 6). Розроблений метод характеризується лінійністю й дозволяє коректно контролювати вміст саліцилової кислоти в ЛФ у межах діапазону застосування. Оцінку результатів дослідження збіжності, правильності та відтворюваності здійснювали шляхом порівняння з критеріями прийнятності (табл. 6). Таблиця 6 Результати вивчення валідаційних характеристик заявленого способу Валідаційні характеристики Позначення Результати дослідження, % а 0,37 Лінійність S0 0,19 Rc 0,9999 Збіжність ΔAs 0,33 Правильність 0,89 Z Відтворюваність Δintra 0,64 10 15 20 25 30 Критерії прийнятності, % а5,12 S0RSD0=1,81 Rc0,9924 ΔAsmaxΔAs=3,20 Z1,02 ΔintramaxΔAs=3,20 Результати дослідження заявленого способу спектрофотометричного визначення концентрації кислоти саліцилової у лікарських формах аптечного виготовлення свідчать, що наявність резорцину не заважає отримувати коректні результати аналізу. Таким чином заявлено простий, не трудомісткий, експресний, точний та достовірний спосіб спектрофотометричного визначення концентрації кислоти саліцилової у лікарських формах аптечного виготовлення у присутності резорцину, який є економічно доцільним, дозволяє контролювати якість виготовлених в умовах аптеки лікарських форм та може бути коректно відтворений в умовах різних лабораторій з контролю якості лікарських засобів. Джерела інформації: 1. Державна Фармакопея України /Державне підприємство "Науково-експертний фармакопейний центр". - 1-е вид. - Харків: РІРЕГ, 2001. - С. 438-439; Доповнення 1. - Харків: РІРЕГ. - 2004. – 520 с., Доповнення 2. - Харків: РІРЕГ. - 2008. – 608 с., Доповнення 3. - Харків: РІРЕГ, 2009. – 280 с. th 2. European Pharmacopoeia. - 6 ed. - Strasbourg: European Directorate for the Quality of Medicines, 2008. - Vol. 2. - 3308 p. 3. British Pharmacopoeia, 2009. Electronic version. - 10952 p. 4. Japanese Pharmacopoeia 16th edition. [Електронний ресурс].Режим доступу: http://jpdb.nihs.go.jp/jp16e/. 5. С.В. Сур, Н.Н. Зволинская, Η.Μ. Архипова. Результаты второго экспериментального раунда программы профессионального тестирования лабораторий "Фарма-тест" в системе Государственной инспекции по контролю качества лекарственных средств МЗ Украины //Провизор. - 2003. - № 2. - С. 30-35. 6. Гризодуб А.И. Стандартизованные процедуры валидации методик контроля качества лекарственных средств /А.И. Гризодуб //Фармаком. - 2006. - № 1/2. - С. 35-44. ФОРМУЛА КОРИСНОЇ МОДЕЛІ 35 40 Спосіб спектрофотометричного визначення концентрації кислоти саліцилової у лікарських формах аптечного виготовлення у присутності резорцину, що включає одержання розчину точної маси кислоти саліцилової у спирті та визначення величини оптичного поглинання за -5 методом стандарту, який відрізняється тим, що використовують 2,010 г/мл розчину кислоти саліцилової у 70 % спирті, як комплексоутворювач використовують 1 мл 1 % розчину алюмінію хлориду, вимірюють величину оптичного поглинання у максимумі при довжині хвилі 314 нм, вміст кислоти саліцилової визначають за формулою: X  Ai  C st  100  100  100 , де Ast  1 5 Ai - оптична густина аналітичного розчину препарату у максимумі за довжини хвилі 314 нм; 45 Ast - оптична густина розчину порівняння кислоти саліцилової; C st - концентрація розчину порівняння кислоти саліцилової, (в г/мл). 5 UA 95150 U Комп’ютерна верстка О. Рябко Державна служба інтелектуальної власності України, вул. Урицького, 45, м. Київ, МСП, 03680, Україна ДП “Український інститут промислової власності”, вул. Глазунова, 1, м. Київ – 42, 01601 6