Спосіб діагностики можливого перебігу звичайного псоріазу

Реферат: UA 95896 U UA 95896 U 5 10 15 20 25 30 35 40 45 50 55 60 Корисна модель належить до медицини, а саме до дерматовенерології, і може бути використана для визначення перебігу звичайного псоріазу. Одне з провідних місць за рівнем захворюваності серед хронічних запальних хвороб шкіри займає псоріаз. За даними різних авторів, на псоріаз страждають від 2 до 5 % населення. Псоріаз є клінічно гетерогенним захворюванням, що характеризується різним ступенем тяжкості і широким спектром проявів у пацієнтів. Незважаючи на високий рівень захворюваності, є тенденція до її зростання, особливо в більш молодому віці і навіть у дітей, збільшується кількість тяжких форм псоріазу, резистентних до традиційних методів лікування, відзначається почастішання випадків тривалої непрацездатності та інвалідизації, зниження якості життя пацієнтів, рівня соціальної адаптації та професійної активності. В даний час прогнозування перебігу псоріазу ґрунтується виключно на клінікоанамнестичних проявах захворювання - форма псоріазу з переважним ураженням долонь і підошов, каплевидний псоріаз; дебют захворювання до 30 років, давність захворювання більше 10 років, наявність супутніх захворювань алергічної природи, виявлених у невеликих груп пацієнтів, не підтверджених рандомізованими дослідженнями. Відомий спосіб прогнозування перебігу псоріазу, при якому в супернатантах культур мононуклеарів крові як показника функціональної активності, визначають рівень спонтанної та індукованої фітогемаглютиніном продукції інтерлейкіну (ІЛ)-6 мононуклеарами твердофазним імуноферментним аналізом до і на 14 день лікування і при збільшенні спонтанної продукції ІЛ-6 до 5158,3±218,4 пг/мл і зниження індукованої продукції ІЛ-6 до 3056,3±223,5 пг/мл прогнозують розвиток більш важкої клінічної форми псоріазу, головним чином еритродермії (Патент РФ № 2461007, 2012. Способ прогнозирования течения псориаза /Хисматуллина З.Р., Болотов П.Д., Мусина Ф.С., Муталова Э.Г., Даниленко Р.У.). Спосіб не дозволяє визначити судинні порушення в шкірі. Необхідність повторного (на 14-й день лікування) визначення рівня ІЛ-6 в крові не дозволяє вибрати правильну тактику ведення пацієнтів, спрямовану на профілактику несприятливого перебігу захворювання шляхом призначення своєчасної адекватної раціональної терапії. Найбільш близьким за технічним рішенням та вибраним за прототип є спосіб прогнозування перебігу псоріазу шляхом дослідження венозної крові хворого. При цьому виділяють лімфоцити, інкубують з розчином моноклональних антитіл до CD54-антигена, визначають в люмінесцентному мікроскопі відносне число CD54+ лімфоцитів і при значенні даного параметра 32 % і більше прогнозують більш тяжкий перебіг псоріазу (Патент РФ № 2224255, 2004. Способ прогнозирования течения псориаза /Никулин Н.К., Клеменова И.А., Чернова Т.Ю.). Недоліком є неспецифічність імунних показників (СВ54-антиген - молекула міжклітинної адгезії 1 типу), експресія або підвищений рівень яких можливі не тільки при псоріазі, але і при інших хронічних дерматозах, супутніх соматичних захворювань, частих у хворих на псоріаз. Недоліками даного способу є його трудомісткість і багатоетапність методу, тривалість дослідження (більше 3 год.) і необхідність придбання реактивів (розчини фосфатно-сольового буфера, верографіну, Хенкса), обладнання (люмінесцентний мікроскоп). Спосіб не відображає судинні порушення в шкірі хворих на псоріаз, не враховує первинну роль патологічного ангіогенезу, що індукує запальну реакцію в дермі і прогресування дерматозу, не дає можливості з своєчасно оцінити потенційну тяжкість псоріазу чи імовірність погіршення клінічного перебігу. В основу корисної моделі поставлено задачу удосконалення способу діагностики можливого перебігу звичайного псоріазу, в якому за рахунок зміни досліджуваних показників, досягається визначення судинних порушень в шкірі, які впливають на тяжкість перебігу захворювання. Поставлена задача вирішується в способі діагностики можливого перебігу звичайного псоріазу, який здійснюють шляхом дослідження показників крові, згідно з корисною моделлю, проводять імуноферментне дослідження крові, визначають показник судинного ендотеліального фактору росту - VEGF і при його рівні від 160 до 200 пг/мл визначають легкий ступінь тяжкості псоріазу, при рівні 201-380 пг/мл - помірний і 381-480 пг/мл важкий ступінь захворювання. Дослідження останніх років показали, що одним з найважливіших факторів, що визначають патогенез цього захворювання, є незбалансована васкуляризація (порушений ангіогенез) Ангіогенез - це складний багатоклітинний феномен, який містить проліферацію капілярних ендотеліальних клітин, інвазію їх в судинний матрикс і утворення капілярних трубок. Головним механізмом регуляції процесу ангіогенезу є вивільнення ангіогенних факторів (основним з яких є судинний ендотеліальний фактор росту - VEGF), під їх дією відбувається активація ендотеліоцитів (переважно в посткапілярних венулах) і міграція за межі базальної мембрани з формуванням відгалужень основних судин (Спринджук М.В. Ангиогенез /М.В. Спринджук //Морфологія. - 2010. - Т. IV, № 3. - С. 4-13). 1 UA 95896 U 5 10 15 20 25 30 35 40 45 50 55 60 Основною особливістю ангіогенезу при псоріазі є наявність посиленої проліферації ендотеліальних клітин, що вистеляють внутрішню поверхню кровоносних судин. VEGF визнається ключовим проангіогенним фактором, відповідальним за утворення нових кровоносних судин в псоріатичних бляшках (Canavese M. Vascular endothelial growth factor and psoriasis pathogenesis: major culprit, treatment target, or possible biomarker? /M. Canavese, J. Schaube //Int. J. Clin. Rev. - 2011. - Vol. 7, № 5. - P. 112-115). Визнано, що VEGF є відповідальним за утворення нових кровоносних судин в псоріатичних бляшках, після чого починає посилюватися проліферативна активність, відповідно, поява нових і збільшення за площею існуючих елементів сипу. У пацієнтів з тяжкою формою псоріазу відзначено порушення системної регуляції VEGF через поліморфні варіанти рецепторів до VEGF в активованих кератиноцитах шкіри. Взаємодія між VEGF і ангіопоетин/тирозинкіназа-рецептором 2 ендотелію при псоріазі опосередковується прозапальним цитокіном TNF. Стає все більш очевидним, що VEGF-опосередкована активація судинного ендотелію грає важливу роль у патогенезі псоріазу, отримані дані підтверджують, що індивідуальна "ангіогенна конституція" визначає сприйнятливість до псоріазу. Підвищення рівня VEGF в плазмі крові пацієнтів з ексудативним псоріазом дозволило припустити зв'язок розвитку тяжких форм захворювання з цим фактором (Айвазова Т.В. Особенности ангиогенеза больных экссудативной формой псориаза /Т.В. Айвазова, Н.Е. Кушлинский, Ю.Н. Перламутров //Клин. дерматол. венерол. - 2008. - № 3. - С. 8-11). Спосіб, що заявляється, здійснюють таким чином. Забір крові з ліктьової вени в кількості 5 мл здійснюють в ранкові години (8-8.30 год.) натще в стерильні пробірки. Сироватку крові відділяють від формених елементів при центрифугуванні протягом 10 хв при 2500 g, проводять дослідження. Зміст VEGF оцінюють за допомогою твердофазного "сендвіч-варіанту" імуноферментного аналізу з використанням моно- чи поліклональних антитіл до VEGF людини відповідно до інструкції, що додається виробником тест-систем (Вектор-Бест, Росія). На першій стадії аналізу зразки, що досліджуються, та контрольні зразки інкубують в лунках з іммобілізованими антитілами. VEGF, який є в зразках, зв'язується з імобілізованими антитілами, незв'язаний матеріал видаляється відмиванням. Зв'язаний VEGF взаємодіє після інкубації з кон'югатом № 1 (антитіла до VEGF людини з біотином), незв'язаний кон'югат видаляється відмиванням. На третій стадії зв'язаний кон'югат № 1 взаємодіє при інкубації з кон'югатом № 2 (стрептавідин з пероксидазою хріну). Після третього відмивання кількість зв'язаного кон'югату № 2 визначають кольоровою реакцією з використанням субстрату пероксидази хріну - перекису водню і хромогену - тетраметилбензидину. Реакцію зупиняють додаванням стоп-реагенту та вимірюють оптичну щільність розчинів у лунках при довжині хвилі 450 нм. Інтенсивність жовтого фарбування пропорційна кількості VEGF в зразках. При вивченні VEGF у сироватці крові 60 хворих на псоріаз і 25 здорових осіб виявлено збільшення рівня показника (326,08±34,29 пг/мл), який в 5,2 разу вище, ніж у здорових (62,59±5,10 пг/мл, р