Застосування повністю людського анти-vap-1-антитіла для лікування фіброзних станів

Реферат: Винахід стосується застосування повністю людського анти-VAP-1-антитіла, що містить варіабельну область важкого ланцюга, представлену в послідовності SEQ ID NО: 19, і варіабельну область легкого ланцюга, представлену в послідовності SEQ ID NО: 42, як антифіброзного засобу для лікування фіброзного стану, вибраного з групи, що складається з пульмонарного фіброзу, фіброзу нирок, включаючи виниклий у результаті діабетичної нефропатії, фіброзу шкіри й COPD, захворювання, при якому стінки дихальних шляхів стають фіброзними з накопиченням міофібробластів і колагену, і включаються всі подібні фіброзні тканини. UA 112154 C2 (12) UA 112154 C2 UA 112154 C2 5 10 15 20 25 30 35 40 45 50 55 60 Область техніки, якої стосується винахід Даний винахід стосується інгібіторів VAP-1 і їхнього застосування як антифіброзних засобів. Крім того, даний винахід стосується способу діагностики фіброзного стану й набору для застосування в діагностичному способі. Рівень техніки Як правило, фіброзні хвороби розвиваються в результаті порушеного процесу загоєння після травми або хронічного запалення. Фіброзна патологія переважно розвивається в органах, які постійно піддаються впливу ушкоджувальних факторів хімічної й біологічної природи, наприклад таких, як печінка, легені, шкіра й нирки. Незалежно від того, є розлади гострими або хронічними, вони мають загальну характеристику, що полягає у втраті органом функції, оскільки нормальна тканина заміщається рубцевою тканиною. Захворювання прогресує, часто викликаючи необоротні зміни з поганим прогнозом і виживаністю. Склад фіброзного рубця є практично однаковим, незалежно від причини поразки. Діагностика й установлення тяжкості фіброзу є дуже важливими з погляду прогнозу хвороби. Процес планування лікування у великому ступені заснований на оцінці фіброзу, його прогресуванні й початку ускладнень. При фіброзі печінки перкутанна біопсія є золотим стандартом для класифікації й установлення стадії захворювання печінки. Однак це є інвазивна процедура з властивим їй певним неминучим ризиком і ускладненнями, яка, крім того, асоціюється з болем і дискомфортом. Показники смертності в результаті ускладнень від цієї процедури перебувають у межах від 1:1000 до 1:10000 (Crockett et al., 2006). Було встановлено, що активність сироваткової моноаміноксидази підвищена в пацієнтів із цирозом, хронічним гепатитом і раком печінки, які всі асоційовані з фіброзом, але має нормальні показники в пацієнтів із запальними захворюваннями сполучної тканини, такими як ревматоїдний артрит або системний червоний вовчок (McEwen and Castell, 1967, J. Lab. Clin. Med., 70: 36-47; Ito et al., 1971, Digestion, 4: 49-58; Ma Lin et al., 1976, Proc. Soc. Exp. Biol. med., 151: 40-43). Однак припускали, що підвищена активність сироваткової моноаміноксидази є тільки показником або відповіддю на поразку тканини, і не було відомо про її роль у патогенезі фіброзу. Звичайні терапевтичні підходи в основному спрямовані на лікування запального процесу при фіброзі з використанням кортикостероїдів і імуносупресорів. Однак, на жаль, дані засоби мають слабку ефективність, або вона зовсім відсутня, і існує очевидна потреба в нових лікарських препаратах для лікування фіброзних хвороб. Сутність винаходу Деякі завдання даного винаходу стосуються інгібіторів VAP-1 як антифіброзних засобів, застосування інгібіторів VAP-1 для виробництва лікарського препарату для лікування фіброзної хвороби й способів профілактики, лікування або ослаблення фіброзної хвороби в людини, яка потребує цього, де зазначений спосіб включає введення зазначеному пацієнтові ефективної кількості інгібітору VAP-1. Додаткове завдання даного винаходу стосується способу діагностики фіброзного стану в суб'єкта. Спосіб включає (а) одержання проби рідини організму від зазначеного суб'єкта; (b) аналіз кількості розчинного VAP-1 (sVAP-1) або активності SSAO у зазначеній пробі; (с) діагностику фіброзу на основі зазначеної кількості sVAP-1 або активності SSAO. Якщо бажано, то кількість sVAP-1 або активність SSAO можна порівняти з кількістю sVAP-1 або активністю SSAO в референц-рідині організму. Ще одне завдання даного винаходу стосується набору для застосування в способі діагностики фіброзної хвороби. У деяких варіантах здійснення вищевказаних цілей інгібітор VAP-1 являє собою анти-VAP-1антитіло, таке як повністю людське анти-VAP-1-антитіло, що містить одну-три консенсусних CDR-послідовності, вибраних із групи, що складається з послідовностей SEQ ID NO: 1-3, і/або поліпептиду легкого ланцюга, що містить одну-три консенсусних CDR- послідовності, вибраних із групи, що складається з послідовностей SEQ ID NO: 24-26. У деяких інших варіантах здійснення зазначене анти-VAP-1-антитіло містить поліпептид важкого ланцюга, що містить першу CDR-послідовність, вибрану з послідовностей SEQ ID NO: 4-8, другу CDR-послідовність, вибрану з послідовностей SEQ ID NO: 9-13, і третю CDR-послідовність, вибрану з послідовностей SEQ ID NO: 14-18, і/або поліпептид легкого ланцюга, що містить першу CDRпослідовність, вибрану з послідовностей SEQ ID NO: 27-31, другу CDR-послідовність, вибрану з послідовностей SEQ ID NO: 32-36, і третю CDR-послідовність, вибрану з послідовностей SEQ ID NO: 37-41. У деяких додаткових варіантах здійснення винаходу зазначене анти-VAP-1-антитіло містить варіабельну область важкого ланцюга, що містить амінокислотну послідовність, вибрану із 1 UA 112154 C2 5 10 15 20 25 30 35 40 45 50 55 60 групи, що складається з послідовностей SEQ ID NO: 19-23, і відповідну варіабельну область легкого ланцюга, що містить амінокислотну послідовність, вибрану із групи, що складається з послідовностей SEQ ID NO: 42-46. У ще одних додаткових варіантах здійснення зазначене антитіло представляє собою повністю людське рекомбінантне антитіло, що містить поліпептид важкого ланцюга, представлений в SEQ ID NO:47, і поліпептид легкого ланцюга, представлений в SEQ ID NO:48. У ще одних варіантах здійснення вищевказаних завдань інгібітор VAP-1 представляє собою інгібітор SSAO, такий як сполука, яка вибрана із групи, що складається з похідних гідразину, пропеніламінів і пропаргіламінів, 2-бутиніламінів, галогеналіламінів, похідних піроліну, пропаргілдіамінів, аліламінів, діамінів, похідних 4,5,6,7-тетрагідроімідазо[4,5-с]піридину, тіокарбамоїльних похідних, карбоксамідів, сульфонамідів, похідних тіазолу й/або гуанідину, оксимних похідних, дигідразину, арилалкіламінів, оксазолідинонів, галогеналкіламінів, похідних бенфотіаміну й імідазопіридину. У деяких додаткових варіантах здійснення вищевказаних завдань фіброзний стан обирають із групи, що складається з фіброзу печінки й запальних захворювань, що сприяють його розвитку, тобто гострого й хронічного гепатиту, захворювання жовчного міхура й жовчних шляхів, і токсичної поразки печінки, пульмонарного фіброзу, фіброзу нирок, включаючи той, що виникає в результаті діабетичної нефропатії, мієлофіброзу, фіброзу підшлункової залози, склеродерми, захворювань сполучних тканин, рубцювання, фіброзу шкіри, фіброзу серця, трансплантата органа, стенозу судин, рестенозу, фіброзу артерій, артрофіброзу, фіброзу молочної залози, фіброзу м'язів, ретроперитонеального фіброзу, фіброзу щитовидної залози, фіброзу лімфатичних вузлів, фіброзу сечового міхура, плеврального фіброзу й COPD, захворювання, при якому стінки дихальних шляхів стають фіброзними в міру накопичення міофібробластів і колагену, і включаються всі подібні фіброзні тканини. Інші конкретні варіанти здійснення винаходу наводяться в залежних пунктах формули винаходу. Інші завдання, деталі й переваги даного винаходу стануть зрозумілими з наступних фігур, докладного опису винаходу й прикладів. Короткий опис фігур Нижче винахід буде описаний докладніше за допомогою кращих варіантів здійснення з посиланням на фігури, що додаються, де: На фігурі 1 показано, що введення анти-VAP-1-антитіла BTT-1029 приводить до практично повного захисту від індукованого CCl4 фіброзу печінки. Забарвлювання сіріусом червоним печінки від мишей WT і з нокаутом VAP-1, яким уводили мінеральну олію (МО, контрольна група), CCl4 або CCl4 разом з антитілом проти VAP-1. Кількісне визначення фіброзного рубця проводили з використанням граничної обробки зображень J. Наведене середнє значення ± стандартна помилка середнього. Збільшення ×10. На фігурі 2 показано, що в печінці мишей, оброблених антитілом проти VAP-1, і в печінці мишей з нокаутом VAP-1 практично був відсутній гепатит і некротичні ділянки, незважаючи на індукцію фіброзу під дією CCl4. Показані пофарбовані гематоксилін-еозином при збільшенні ×20 некротичні гепатоцити (вістря стрілок) і поточний гепатит (стрілки). На фігурі 3 показано, що підвищення експресії колагену IV і еластину у фіброзних тканинах відвертається антитілом проти VAP-1. Проводили кількісне визначення колагену IV, еластину й ламініну з використанням граничної обробки зображень J. Наведене середнє значення ± стандартна помилка середнього. На фігурі 4 показано, що рівні мРНК указують на регуляторний вплив VAP-1 на зірчасті клітини й фібробласти печінки. Показаний аналіз еластину, aSMA, VAP-1 і TIMP1 кількісної ОТПЦР. Дані представлені у вигляді середнього значення ± стандартна помилка середнього по трьох мишах при аналізі в трьох паралелях. *р